تقنية جديدة لتحليل الكمي لتساقط الشعر في الفئران عن طريق تحليل درجات الرمادي

الثعلبة هي شكل شائع من تساقط الشعر يمكن أن يحدث في العديد من الحالات المختلفة ، بما في ذلك كأثر جانبي للعلاج الكيميائي. لقد طورنا طريقة لقياس تساقط الشعر في الفئران ، باستخدام جهاز تصوير هلام قياسي لإجراء تحليل تدرج الرمادي ، لتسهيل دراسة علاجات الثعلبة الجديدة الواعدة.

الهدف العام من هذا الإجراء هو توفير قياس كمي لكثافة الشعر باستخدام امتصاص الضوء. يتم تحقيق ذلك من خلال تصوير أولا على جهاز تصوير هلامي. تتمثل الخطوات التالية في تحديد منطقة الاهتمام في الصورة وتحديد امتصاص الضوء داخل المنطقة محل الاهتمام.

ثم تتم مقارنة امتصاص الضوء بمعيار التصوير الفوتوغرافي. في النهاية ، يمكن حساب متوسط امتصاص الضوء بين التي تمت معالجتها بالمثل لإظهار آثار التدخل على نمو الشعر. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها غير متحيزة وقابلة للقياس الكمي وقابلة للتكرار.

هذا مهم للغاية لأنه يسمح لك باستخدام المعايير والتقنيات الإحصائية مثل Inova لتحديد الأهمية الإحصائية للنتائج. بالنسبة لهذا البروتوكول ، استخدم جهاز تصوير جل مع مصدر ضوء مدمج للتصوير العاكس. هذا يضمن توحيدا جيدا للضوء ، في حين أن الإضاءة العابرة تخلق صورة ظلية غير مناسبة للتحليل.

ابدأ بإعداد جهاز تصوير الجل ، واضبط التركيز ومجال الرؤية. باستخدام بعض النصوص المطبوعة ، يمكن أن يكون الماوس خارج نطاق التركيز قليلا لأن هذا يعمل بالفعل. لتقليل الأخطاء الكمية في المناطق الصغيرة ذات الأهمية ، تحقق من توحيد مصدر الضوء عبر المنطقة المصورة بهدف المتوسط البصري الممتاز في منطقة الاهتمام.

بعد ذلك ، قم بإعداد. حدد مخدرا سريعا ومدة عمل قصيرة وقدم ما يكفي لإبقاء ثابتة للتصوير الفوتوغرافي. الآن ضع على جهاز التصوير عموديا وأقرب ما يكون إلى التوازي قدر الإمكان.

بالنسبة للصور الظهرية ، ضع في وضع الانبطاح مع تمديد أطرافها. بالنسبة للصور البطنية ، ضع في وضع ضعيف. تأكد من عدم تدويرها بشكل جانبي.

يمكن سحب قيم الامتصاص بين الصور ، ولكن هذا ليس ما تم تصميم الجهاز من أجله. لذا فإن إضافة معيار مقياس رمادي يسمح لنا بتطبيع قيم الامتصاص عند تجميع البيانات. الآن ضع معيار المقياس الرمادي في المنطقة المصورة.

ثم أغلق الغرفة وقلل من الإضاءة المحيطة التي يمكن أن تدخل الغرفة على الكاميرا. اضبط الحد F على تعريض ضوئي يجعل منطقة الاهتمام غير مشبعة أو غير مشبعة أو غير معرضة للضوء. ثم التقط صورة.

إذا تم اختيار نقطة التوقف F بحيث تكون الصورة مشبعة ، تثبيت قيمة المقياس الرمادي عند القيمة و B بدون فائدة على الإطلاق. ثم قم بتغيير F.Stop بمقدار واحد ، مع الحفاظ على منطقة الاهتمام والمعيار في نطاق التعريض الضوئي الخطي ، والتقط صورة ثانية مع اكتمال التصوير الفوتوغرافي. ضع على طاولة تدفئة وراقبها حتى تتعافى.

الرقيق القصي. ثم أعد إلى أقفاصها وفي النهاية إلى الحمام للشفاء التام. لتحديد كمية امتصاص الضوء باستخدام برنامج التصوير الهلامي ، ضع علامة على مناطق الاهتمام على صور للحصول على عرض ظهري للحيوان بالكامل.

استخدم صورة مستطيلة أو صورة بيضاوية أو أداة يدوية حرة لتحديد مسافة من الأطراف العلوية إلى الأطراف السفلية ، وتمتد بشكل جانبي قدر الإمكان. احتفظ بها داخل هوامش الجزء الخلفي من للحصول على رؤية بطنية للحيوان بالكامل. استخدم مستطيلين.

واحد لتغطية منطقة الحوض ، التي يتم إعدادها ، والآخر لتغطية منطقة الصدر غير المعتنى بها. يمكن أيضا تمييز المناطق الأصغر ذات الأهمية مثل مكان إعطاء الدواء على أنها مطلوبة. ثانيا ، حدد منطقة الاهتمام على معيار امتصاص المقياس الرمادي.

ثم سجل الامتصاص من كل منطقة ذات أهمية محددة للمقارنة بين الصور الفوتوغرافية. تطبيع مستويات الامتصاص إلى معيار الخلفية باستخدام علاقة سجل التعرض للامتصاص. للقيام بذلك ، رسم منحنى سجل التعرض مقابل سجل الامتصاص.

باستخدام القيم التي تم الحصول عليها من معيار امتصاص المقياس الرمادي ، ثم اضبط الاختلافات في معيار كل صورة على النحو التالي. أولا ، حدد F-stop لقراءة عائد الاستثمار و F-stop للمرجع واحسب متوسط امتصاص المعيار في جميع الصور الفوتوغرافية عند قراءة F-stop. هذا المتوسط هو القيمة القياسية المرجعية أو RSV.

بعد ذلك ، احسب الفرق في الامتصاص بين إعدادات F-Stop للقراءة والمرجع في كل صورة وقم بإجراء نفس العمليات الحسابية للمعيار ولكل عائد استثمار محدد. الآن باستخدام بيانات من محطة F واحدة ، احسب الامتصاص المصحح لكل عائد استثمار باستخدام الصيغة الموضحة. بعد ذلك ، قم بتطبيق الأساليب الإحصائية القياسية لتحليل البيانات C3 HHEJ المطعمة الفئران ، والتي تم تحليل نموذج الثعلبة ADA باستخدام الطريقة الموصوفة في حالات التعرض المختلفة.

كانت الاختلافات في عائد الاستثمار غير المتداخل مرتبطة ارتباطا وثيقا كما هو متوقع. أنتجت مقارنات مماثلة نفس الارتباط الوثيق على مدى ثلاثة أسابيع. تم تصوير الفئران لتحديد تساقط شعرها المتوقع.

أظهرت 80٪ من الفئران المصورة تساقط الشعر في هذا الإطار الزمني. وبالمقارنة ، لم تظهر الفئران الستة السوداء العادية C 57 أي تساقط للشعر في نفس الإطار الزمني. في دراسة ثانية ، تم قياس الثعلبة الناجمة عن العلاج الكيميائي باستخدام التقنية الموصوفة.

عولجت الفئران بالسيكلوفوسفاميد لمدة ثلاثة أسابيع وبعد شهرين أظهرت تساقطا كبيرا للشعر مقارنة بالضوابط. بمجرد إتقانها ، يمكن تحليل كل صورة في أقل من خمس دقائق. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحديد كمية نمو الشعر في القوارض باستخدام نظام تصوير هلام قياسي.