إجراء لغرس الدائرة العمود الفقري للالطولية في فيفو التصوير من الحبل الشوكي ماوس

في هذا الفيديو، ونحن تصف الإجراء لزرع غرفة التصوير الضوئي مزمنة على الحبل الشوكي الظهري على فأرة الحاسوب الحية. تتم مراجعة الغرفة، إجراء العمليات الجراحية، والتصوير المزمن وأظهر.

الهدف العام من هذا الإجراء هو زرع غرفة تصوير فوق الحبل الشوكي الظهري للفأر لتمكين التصوير البصري الطولي دون الحاجة إلى تكرار النوبات الجراحية. يتم تحقيق ذلك عن طريق تعريض ثلاث فقرات صدرية أولا وإزالة الأنسجة الرخوة فوق العمود الفقري. الخطوة الثانية هي تثبيت الفقرات المكشوفة باستخدام القطع الجانبية للغرفة وإجراء استئصال الصفيحة الفقرية الظهرية.

بعد ذلك ، يتم تثبيت اللوحة العلوية للغرفة بإحكام فوق الحبل الشوكي المكشوف وإغلاقها باستخدام مطاط سيليكون وغطاء زجاجي. الخطوة الأخيرة هي إغلاق الجلد حول الغرسة باستخدام مواد لاصقة والسماح للحيوان بالتعافي. في النهاية ، يتم استخدام الفحص المجهري الفلوري متعدد الفوتون لتصوير السلوك الخلوي وبنية الأنسجة في الحبل الشوكي بدقة تحت الخلوية بمرور الوقت.

الميزة الرئيسية لمنهجيتنا الجديدة على الطرق الحالية ، مثل الفتح الجراحي المتكرر للحبل الشوكي ، هي القدرة على الحصول على عدد عشوائي تقريبا من النقاط الزمنية للتصوير منتشرة على مدى فترة طويلة من الزمن دون المضاعفات المرتبطة بالجراحة المتكررة ، مثل العدوى المحتملة أو الصدمة الجراحية أو إجهاد. خطرت لنا فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما كنا نفكر في النجاح السابق للتصوير الطولي بعد إصابة الحبل الشوكي في أسماك الحمار الوحشي الشفافة. ثم قررنا توسيع هذا النموذج ليشمل نموذج الثدييات.

ابدأ هذا الإجراء عن طريق حلق منطقة القوس الصدري للفأر المخدر باستخدام الفلور isof. ثم قم بإزالة الشعر المشذب. بعد ذلك ، قم بإعطاء خليط المحلول الملحي والكيتوبروفين وديكساميثازون للفأر تحت الجلد.

باستخدام مسحات القطن. قم بإجراء ثلاث غسلات متناوبة من اليود و 70٪ من الإيثانول ، وانتظر دقيقة واحدة بين الغسل. بعد ذلك ، قم بإعطاء 100 ميكرولتر من 0.125٪ بوبيفاكائين في وسط الرقعة المحلوقة تحت الجلد لتقليل الألم في موقع الشق.

ثم انقل الماوس إلى هجمات الاستريو المخصصة. أدخل مقياس حرارة المستقيم وانتظر حوالي 10 دقائق حتى يصبح بوبيفاكائين ساري المفعول تحت المجهر. قم بإنشاء شق بطول خمسة ملليمترات فوق الفقرات ذات الأهمية بشفرة مشرط.

بعد ذلك ، قم بزيادة حجم الفتحة في الجلد عن طريق التشريح الحاد. بعد ذلك ، قم بفصل اللفافة الضامة برفق بين الجلد والعضلة الأساسية. امسك الجلد للخلف للحصول على منطقة عمل أكبر مع الضاعات واحرص على عدم زيادة أي وزن على الصدر وإعاقة التنفس.

ثم أمسك المنضدة ، معظم الفقرات التي ستتعرض من خلال العضلات العلوية بزوج من الملقط. قطع الأنسجة على جانبي العملية الظهرية بعيدا عن ثلاث فقرات. بعد ذلك ، قم بإزالة جميع الأنسجة المغطى من الصفائح الظهرية.

بعد ذلك ، قم بقطع الأوتار المرتبطة بالفقرات بعناية على كلا الحواف الجانبية للعمود الفقري. قم بإزالة أكبر قدر ممكن من الأنسجة برفق من الحواف الجانبية لعمود الفقرات من أجل توفير سطح تثبيت نظيف. ثم قم بإزالة الفقرات برفق من أي أنسجة رخوة متبقية.

باستخدام مكشطة العظام وقطعة قطن ، قم بقص أي أنسجة غير متناسقة باستخدام المقص الجراحي. بعد ذلك ، اضبط الضاعرات لكبح جماح الأنسجة المحيطة بعمود الفقرة. جنبا إلى جنب مع الجلد ، قم بتوصيل القضبان الجانبية للزرع بالشوكات الموجودة على أعمدة التسليم وضعها في حاملات العمود.

بعد ذلك ، قم بتثبيت الفقرات الثلاث. استخدام الأشرطة الجانبية عن طريق الضغط الكافي لتثبيتها بإحكام. ثم استخدم الملقط للمساعدة في ضمان تثبيت مستوي للفقرات الثلاث.

تأكد من أن الأشرطة الجانبية مستوية ومتوازية قبل إجراء استئصال الصفيحة الفقرية. بعد ذلك ، قم بتنظيف وتجفيف السطح الظهري للفقرات المثبتة بعناية باستخدام مسحات قطنية. في هذا الإجراء ، أدخل أطراف مقص Vana في المساحة فوق الجافية للفقرة الإنسية المثبتة واضغط على المقابض برفق.

إذا كان العظم جافا ، فيجب أن يتشقق على طول الصفيحة الظهرية. كرر هذا الإجراء على الجانب المقابل لتحرير الصفيحة أثناء الإمساك بالصفيحة السائبة برفق من خلال العملية الظهرية باستخدام الملقط ، قم بقطع أي نسيج ضام بعناية في الأطراف المنقارية والتدليل للصفيحة. ثم اغسل جيدا أي دم يغطي الحبل الشوكي بنسبة 0.9٪ محلول ملحي أو دماغي اصطناعي يمتص السوائل الزائدة بمسحات قطنية.

بعد ذلك ، قم بقص الحواف الجانبية للعظم وانتقل إلى الأشرطة الجانبية للزرع. بعد ذلك السيطرة على النزيف باستخدام مسحات القطن والمحلول الملحي. في حالة انفصال جزء من السمحاق وتغطيته بالحبل الشوكي ، قم بإزالة الأنسجة برفق باستخدام مسحات قطنية وإبرة قياس 29 إلى 30.

احرص على عدم إصابة الحبل الشوكي ولا تخلط بين السمحاق الفضفاض وداتور ملفوف بإحكام. في النهاية. أغلق الحواف المكشوفة المتبقية للعظم باستخدام الأسنان والأكريليك والسيانواكريلات.

توخي الحذر بشكل خاص لمنع الغراء من الوصول إلى الحبل الشوكي المكشوف. الآن ، ضع اللوحة العلوية على بعناية بحيث تصطف الفتحات الأربع مع الثقوب الأربعة الموجودة على القضبان الجانبية والفتحة تغطي الحبل الشوكي المكشوف. باستخدام مفك براغي صائغ ، ابدأ بعناية بالمسمار الأول ، وقم بتثبيت عمود مفك البراغي بزوج آخر من الملقط.

لا تقم بإحكام ربط المسمار في هذه المرحلة ، ولكن أدخله بحيث يتم تعشيق الخيوط القليلة الأولى. كرر هذه العملية مع البراغي الثلاثة الأخرى. مع وضع جميع البراغي الأربعة في مكانها ، قم بإحكام ربط كل برغي بالتناوب بنفس الزيادات الصغيرة حتى يتم تأمين جميع البراغي بإحكام.

بعد ذلك ، استخدم المطاط الصناعي السيليكوني ذو العلامة التجارية سريعة العتبة لملء الفراغ بين الحبل الشوكي والنافذة الزجاجية وتطبيقه على الحبل الشوكي المكشوف. تأكد من التخلص من أي سيليكون يحتوي على فقاعات هواء من طرف الخلط قبل تطبيقه. ثم ضع بسرعة غطاء خمسة ملليمترات في الملحق في اللوحة العلوية.

استخدم ضغطا كافيا للضغط تدريجيا على المطاط الصناعي السائل لإحاطة الحبل الشوكي ولكن لا يؤدي إلى ضغط الحبل الشوكي. بعد ذلك ، قم بتغطية حواف المطاط الصناعي المنضح بالأسنان والأكريليك والسيانواكريلات ، واستخدم المواد اللاصقة لإلتصاق المطاط الصناعي بالعظم المحيط قدر الإمكان لمنع المطاط الصناعي من التحول فوق سطح الحبل الشوكي. بعد ذلك ، قم بإزالة الضاعرات واسحب الجلد لأعلى حول حافة الغرسة.

استخدم السيانواكريلات للصق الجلد بحواف الغرسة. بعد ذلك ، أدخل البراغي في أجنحة اللوحة العلوية. بعد ذلك ، قم بإغلاق الفجوات الموجودة في الفتحات اللولبية للوحة العلوية باستخدام أكريليك الأسنان قبل إعادة إلى القفص للتعافي.

قبل جلسات التصوير ، قم بتخدير الماوس مرة أخرى وقم بتوصيل البراغي المكشوفة للغرسة بالأعمدة الملولبة للتثبيت. يوضح هذا الشكل أن غرفة العمود الفقري المزمنة تظل شفافة بصريا على مدى عدة أسابيع. هذه صور بيضاء إلى خفيفة للحبل الشوكي تتراوح من عدة دقائق إلى ثلاثة أسابيع بعد العملية.

التعرف على معالم الأوعية الدموية في جميع النقاط الزمنية. يلاحظ تغيير طفيف في يوم واحد بعد الجراحة. يوجد فرط نمو ليفي كثيف في جزء من النافذة في وقت مبكر من ثلاثة أيام ويؤدي إلى تشويش جزئي في منطقة التصوير.

أيضا توسع الأوعية الدموية الجديد الخفيف ولكنه لا يحجب الأوعية الدموية الأصلية في الضوء الأبيض أو تصوير PEF. تسمح غرفة العمود الفقري المزمنة بالتصوير المتكرر متعدد الفوتونات دون الحاجة إلى عمليات جراحية متكررة معروضة. فيما يلي صور فأر معدل وراثيا يعبر عن YFP في مجموعة فرعية من محاور DRG في الظهر للحبل الشوكي.

تم تمييز الأوعية الدموية عن طريق حقن الصبغة داخل الأوعية الدموية الموضحة باللون الأحمر. يمكن أيضا تتبع نشاط الخلايا الدبقية الصغيرة بمرور الوقت في الفخذ ، والفئران المعدلة وراثيا ، والفئران المعدلة وراثيا ، والفخذ ، والفئران المعدلة وراثيا ، والفخذ ، والفخذ ، بينما تظل المحاور والخلايا الدبقية الصغيرة مرئية. ينخفض التباين والدقة بشكل متواضع بمرور الوقت.

بمجرد إتقانها. يمكن القيام بهذه التقنية في غضون ساعة واحدة تقريبا إذا تم إجراؤها بشكل صحيح بعد تطويرها. مهدت هذه التقنية الطريق لنا لاستكشاف عدم التجانس الزمني والمكاني لموت المحاور بعد إصابة الحبل الشوكي.

والفئران.