بروتوكول لدراسة الانقراض من الخوف مشروطة في ركوب الدراجات وبطبيعة الحال إناث الفئران

الهدف العام من هذا الإجراء هو فحص آثار هرمونات الغدد التناسلية على سلوك انقراض الخوف لدى الإناث خلال الحالات الهرمونية المنخفضة والعالية لدورة إسراء ودور الاستراديول عند إعطاؤه خارجيا. يتم تحقيق ذلك من خلال مراقبة دورة الإسراء أولا لإناث الفئران البالغة وتحديد المرحلة التي تمر بها قبل التجريب. بعد ذلك ، يتم وضع الموجودة في مرحلة الشبق في غرفها المخصصة للسكن وتكييف الخوف.

في اليوم التالي عندما تكون في الشبق ، يتم حقن الإناث بالاستراديول أو السيارة وتخضع للتدريب على انقراض الخوف. أخيرا ، في اليوم الثالث ، يتم إعادة إلى نفس الغرفة لاختبار استدعاء جلسة الانقراض في اليوم السابق. في النهاية ، يسمح المسحة المهبلية لتحديد مسار EST للمحققين بالتلاعب بالتقلبات الطبيعية في هرمونات الغدد التناسلية لدراسة تأثيرها على ذاكرة انقراض الخوف.

يمكن استخدام هذا البروتوكول للمساعدة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الفروق بين الجنسين ، مثل هل تختلف عمليات انقراض الخوف عند الذكور والإناث؟ وإذا كان الأمر كذلك ، فما هي الآليات الهرمونية والعصبية البيولوجية التي تلبي هذه الاختلافات؟ الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هي أنه يمكن أن يساعد في تعزيز دراسة الإناث في حالة انقراض الخوف من خلال مشاركة الأساليب للقيام بذلك.

غالبا ما يكافح الباحثون الجدد في هذه الأساليب لمراقبة دورة eser بشكل موثوق لأن الإجراء يمكن أن يستغرق وقتا طويلا ويعتمد بشكل كبير على التقنية المناسبة. قد تساهم الآثار المترتبة على هذه الدراسات في خيارات العلاج الخاصة بالجنس للاضطرابات المرتبطة بالخوف والقلق. قد يكون هذا مهما نظرا لأن النساء أكثر عرضة للإصابة بهذه الأمراض النفسية بمرتين من الرجال.

ليزا مان ، باحثة ما بعد الدكتوراه في المختبر بالإضافة إلى رعاية سرية. سيقوم مساعد باحث في المختبر بعرض الإجراء لجمع العينات لمراقبة دورة الشبق. بعد تحضير محلول ملحي بنسبة 0.9٪ ، اغمس قضيبا قطنيا في السائل واستخدم منشفة ورقية لمسح طرف المحلول الزائد مع تثبيت ذيل الفئران لأعلى والحرص على عدم التسبب في الضيق.

أدخل الطرف القطني برفق في القناة المهبلية غير العميقة جدا ، ولفه حول الجدران لالتقاط الخلايا المهبلية الرخوة قبل ذلك. قم بإزالة الطرف مع عدم نقل الكثير من السوائل ، قم بلف طرف القضيب برفق على شريحة مجهر مسبقة التصنيف ، مع التأكد من انتقال العينة إلى الشريحة. اجمع العينات لدورتين كاملتين على الأقل وانقل عدة أيام متتالية على شريحة واحدة لتتمكن من تتبع وإضافات EST اليومية وتحديدها بشكل أفضل.

تتغير المرحلة بمجرد أن تجف الشرائح ، اغمرها 10 مرات في المثبت ، ثم 10 مرات في محلول تلطيخ. وأخيرا ، خمس مرات في محلول البقعة. اشطفها بلطف بالماء.

اترك الشرائح تجف تماما في الهواء قبل عرضها تحت المجهر قبل بدء تجربة التكييف ، وقم بتعريض الإناث مسبقا لغرف التكييف مع إضاءة المنزل لمدة 20 إلى 30 دقيقة يوميا لمدة ثلاثة أيام للسماح لها بالتأقلم مع البيئة. قم بتعيين الصندوق الذي تعرضوا له مسبقا كغرفة للدراسة. قم بتنظيف الصناديق جيدا بين الجلسات لإزالة الروائح لأنها يمكن أن تؤثر على السلوك ودورة الإجهاد EST.

بمجرد التحقق من أن في مرحلة الشبق من دورة EST الإضافية ، ابدأ مرحلة تكييف التعود. خذ قياسات خط الأساس للتجميد قبل تحفيز حالة النغمة الأولى عن طريق قياس الثواني التي يقضيها في الهاتف المحمول أثناء التحفيز. الفاصل الزمني الغائب ، احسب النسبة المئوية لدرجة التجميد بقسمة ثاني قضى غير متحرك على مدة التجربة.

لإجراء تدريب على الانقراض خلال مرحلة الشبق الشرق الأوسط ، قم بتكييف الفئران في يومها الأخير من ESTRO على النحو الذي يحدده المسح. ضع في غرفة التكييف وقم بإجراء تجربة CS وحدها للتعويد. حث نغمة CS لمدة 30 ثانية.

بعد الانتظار لمدة ثلاث دقائق في المتوسط قبل التجربة التالية ، كرر تجربة CS وحدها أربع مرات أخرى ليصبح المجموع خمس تجارب قبل التكييف. قم بتوصيل أرضية شبكة صدمة القدم بمولد تحفيز كهربائي. استخدم مستوى تحفيز من 0.5 إلى 0.6 مللي أمبير كمحفز غير مشروط أو US ونغمة أربعة كيلوهرتز 80 ديسيبل مثل CS مباشرة بعد جلسة التعود.

ابدأ تجارب CS US المقترنة لتكييف الخوف من خلال تقديم نغمة CS 32 ، متبوعة بصدمة أمريكية مدتها 0.5 ثانية مفصولة بفاصل زمني بين المحاكمة لمدة ثلاث دقائق تقريبا. كرر التجربة المزدوجة ست مرات أخرى في نهاية جلسة التكييف. أعد إلى أقفاص منازلهم وإلى منشأة حتى اليوم التالي في اليوم الثاني.

بعد المسحة وتحديد مرحلة الشبق المتوسط لجميع التي خضعت لليوم الأول من البروتوكول ، قم بإعداد ما يكفي من الاستراديول في زيت السمسم أو 0.9٪ محلول ملحي لكل لتلقي 15 ميكروغرام لكل جرعة كيلوغرام لإدارة الهرمون تحت الجلد. ارفع الجلد المترهل بين لوح الكتف من الرقبة في قرصة لطيفة وأدخل المحقنة في المثلث الذي تتكون من طيات الجلد. بعد 30 دقيقة من تلقي لحقنها ، ضعها في غرف التكييف وابدأ التدريب على الانقراض عن طريق إجراء 20 CS وحدها.

تتكون كل تجربة من 32 أربعة كيلوهرتز ، 80 ديسيبل نغمة مع ما يقرب من ثلاث دقائق بين التجارب بعد 24 ساعة. اليوم الثالث ، قم بمسح التي أكملت الجلسات في اليومين الأول والثاني بعد وضع في غرف التكييف المخصصة لها. ابدأ جلسة استدعاء الانقراض بإجراء ثلاث تجارب Cs وحدها مع ما يقرب من ثلاث دقائق بين التجارب عند الانتهاء من جلسة الاستدعاء ، وإعادة إلى أقفاصها المنزلية وتحليل البيانات وفقا لبروتوكول النص في بروتوكول انقراض الخوف هذا.

أظهرت التي انطفأت جيدا واحتفظت بذاكرة التدريب على الانقراض خوفا منخفضا في اليوم الأخير من الاختبار السلوكي أثناء استدعاء الانقراض. كما هو موضح هنا ، لا تختلف ذكور وإناث الفئران اختلافا كبيرا في التعبير عن الخوف المشروط. خلال كل مرحلة ، يصبح الاختلاف بين الجنسين واضحا عندما يتم تحليل بشكل منفصل كمجموعات مرحلة ES عالية ومنخفضة هرمون الاستروجين.

يوضح هذا الرسم البياني تأثير مرحلة الإسترو على ذاكرة انقراض الخوف ، إناث الفئران التي تخضع لتدريب على الانقراض خلال مرحلة انخفاض هرمون الاستروجين في دورة EST الإضافية. لا تتذكر ذاكرة الانقراض في اليوم الثالث وكذلك تلك التي تم تدريبها على PROEs. ومع ذلك ، عندما يتم حقن إناث متري تحت الجلد بجرعة 15 ميكروغراما لكل كيلوغرام من الاستراديول قبل الانقراض ، يبدو أن توحيد ذاكرة انقراض الخوف قد تم تعزيزه كما يتضح من التجميد المنخفض أثناء استدعاء الانقراض.

لذلك ، تشير هذه البيانات إلى أن هرمونات الغدد التناسلية يمكن أن تعدل استدعاء انقراض الخوف ، وكذلك التوسط في الاختلافات بين الجنسين في سلوكيات انقراض الخوف المشروطة. يمكن إجراء إجراءات إضافية مثل جراحة القنية والكيمياء المناعية جنبا إلى جنب مع الطريقة الموضحة هنا للإجابة على أسئلة مثل ، أين يعمل الاستراديول في الدماغ لتعديل الخوف والانقراض وتوحيد الذاكرة ، وكيف يغير الاستراديول نشاط الخلايا العصبية داخل هذه المناطق؟ بعد مشاهدة هذا الفيديو, يجب أن يكون لديك فهم واضح لكيفية دراسة إعادة تدوير الفئران الطبيعية وتأثير الاستراديول في تمديد واضح سابق.