تقنيات الحد الأدنى الغازية لحقن الفئران في العصب البصري

الهدف العام من هذا الإجراء هو توفير نهج طفيف التوغل لحقن الأدوية أو الخلايا الجذعية في العصب البصري للفأر الحي. يتم تحقيق ذلك عن طريق تخدير الجرذ أولا ، ووضعه على حامل التشريح ، وإدخال خياطة في الملتحمة للتلاعب بالعين. في وقت لاحق ، تتمثل الخطوة الثانية في تشريح التلال المدارية خلف العين لكشف العصب البصري.

بعد ذلك ، يتم إدخال الماصة الزجاجية في العصب البصري ، ويتم حقن الدواء أو الخلايا الجذعية قبل إغلاق موقع الجراحة وإحياء الجرذ من التخدير. في النهاية ، بعد فترة زمنية معينة ، يتم التضحية بالجرذ ، وتشريح العصب البصري ويمكن تصور آثار الحقن الجراحي أو الزرع عن طريق الفحص المجهري. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الأساليب الحالية هي أن هذا النهج طفيف التوغل ، وهذا يسمح للفئران بالبقاء على قيد الحياة طالما كنت بحاجة إليها.

دراسة آثار الحقن الجراحي أو الزرع. ستظهر الإجراء كيت شوارتز ، وهي طالبة فنية من مختبري. إجراء جميع العمليات الجراحية تحت التخدير باستخدام اثنين إلى 3٪ من الفلور.

تأكد من المستوى المناسب من التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم ومعدل التنفس. تأكد من أن الجرذ لا يتردد استجابة لإصبع القدم. قرص. قم بتأمين حسب الضرورة لتجنب حركة الرأس أثناء العملية.

ثم ضع قطرة من الليدوكائين على العين الجراحية. استخدم الدموع الاصطناعية كل 10 دقائق لمنع الجفاف أثناء التخدير. أعط حقنة البوبرينورفين قبل الجراحة بمعدل 0.01 ملليغرام لكل كيلوغرام تحت الجلد ، ثم كل ست إلى ثماني ساعات حسب الحاجة.

حافظ على دفء باستخدام وسادة تدفئة. بلل فرو فروة الرأس بالكحول. الحرص على تجنب التعرض للعينين.

تأكد من استخدام الأدوات المعقمة والتقنية المعقمة لتقليل مخاطر الإصابة بعدوى ما بعد الجراحة. بعد ذلك ، ضع خياطة بأربعة أشخاص في الملتحمة الجانبية واربطها بخياطة كافية للسماح بالجر اللطيف. قم بعمل شق تقريبي بطول بوصة واحدة في الجلد الذي يغطي التلال المدارية.

باستخدام مشرط مقاس 10. اسحب الجلد واللفافة الأساسية وقم بتشريح اللفافة بعناية. ضع خياطة واحدة في الجلد المتراجع للسماح بتعرض الكيس الحجاجي العلوي لمنع النزيف المفرط في موقع الجراحة.

تجنب قطع الأوعية الدموية أثناء تشريح اللفافة. مع الجر اللطيف على الملتحمة ، وسحب العين لأسفل وإخراجها من التجويف ، ستظهر العضلة المدارية العلوية. من أجل فضح العصب البصري ، يجب إزالة الدهون خلف الحجاج ، وقطع هذه العضلات.

يمكن التخلص من الدهون ويجب عدم استبدالها بعد الحقن. من هذه النقطة ، يجب أن تكون لفافة العصب البصري مرئية كحزمة من العصب البصري نفسه ، جنبا إلى جنب مع الأوعية الدموية الملفوفة في جافية. لجعل التشريح أعمق ، قم بعمل شق صغير في DRA باستخدام المشرط أو إبرة مشطوفة قياس 31 لجعل الثقب أقل صدمة ، وقد أعدت ماصة زجاجية صغيرة مسحوبة بقطر 50 إلى 100 ميكرون لتوفير الاستقرار.

قم بتركيب الماصة الدقيقة على مناور دقيق وقم بتوصيله بحقنة بلاستيكية سعة 20 سم مكعب. اسحب الخرزات أو الخلايا الجذعية المعاد تكوينها في 0.5 إلى ميكرولتر واحد في الرجوع إلى الوراء ، جنبا إلى جنب مع 0.5 ميكرولتر من محلول الميثيل الأزرق قبل وبعد تحميل الماصة الزجاجية بالصبغة. باستخدام حقنة واحدة سم مكعب وإبرة قياس 30 ، اخفض طرف الماصة الدقيقة على العصب البصري فوق الجافية الممزقة مباشرة.

الحركة الصغيرة ولكن السريعة للطرف الزجاجي إلى العصب البصري إلى أقل ضرر أثناء الضغط البطيء والمستمر على المكبس. يجب أن تبرز صبغة إيفانز الزرقاء منطقة العصب البصري المحقون. يجب أن تظل الصبغة موضعية داخل العصب البصري دون أن تتسرب في الفضاء تحت العنكبوتية.

اتبع الشريط الثاني من Evan's Blue Dye لتحديد وقت اكتمال حقن الخلايا الجذعية. عندما يتم حقن الحجم اللازم في العصب البصري ، اترك المكبس. احتفظ بالماصة الدقيقة داخل العصب البصري لمدة خمس دقائق لمنع القذف بالضغط العالي عند سحب الماصة الدقيقة عند اكتمال الحقن.

قم بإزالة الماصة الدقيقة مع أي أطراف قطنية تستخدم لتوفير الإرقاء. خياطة الجلد ب 3.0 حرير وإزالة خياطة الملتحمة. حافظ على دفء الفئران على وسادة تدفئة حتى تخرج من التخدير.

لا تترك دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الرقيق. إذا ظهرت على علامات الألم ، بما في ذلك الخمول المفرط أو الرنح أو صعوبة التنفس ، فقم بإعطاء التسكين المناسب مع البوبرينورفين العضلي حتى ثلاث مرات يوميا. بعد التجربة ، تم التضحية بالفئران وتزهرها بالبارالديهايد.

تم تشريح الأعصاب البصرية بعناية وتركيبها لتقسيم ناجمد الموضح هنا هو مثال على العصب البصري لثقب الفئران بقوة أقل حيث تم حقن صبغة إيفان الزرقاء. من أجل تصور الموقع ، يحدد السهم الموقع الدقيق للحقن. تم إجراء هذا التشريح في غضون أيام قليلة من الحقن كما يتضح من الانتشار المقيد للصبغة أسفل العصب بعد تطوره.

مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال علم الأعصاب التجديدي لاستكشاف طرق جديدة لتجديد العصب البصري وربما استعادة الرؤية المفقودة في نموذج الفئران هذا من مرض مزيل الميالين.