في وقت واحد تسجيل الكهربية والصغرى، والحقن وكلاء المثبطة في الدماغ القوارض

هنا ، نصنع ماصة زجاجية ذات وظائف مزدوجة: تثبيط هياكل الدماغ العميقة عن طريق الحقن المجهري للأدوية والمراقبة في الوقت الفعلي لآثارها من خلال التسجيلات الفيزيولوجية الكهربية المتزامنة.

الهدف العام من هذا الإجراء هو بناء طريق حقن ميسور التكلفة للحقن الجزئي للناقلات العصبية في القولون العلوي للفئران أثناء مراقبة النشاط العصبي متعدد الوحدات. يتم تحقيق ذلك عن طريق إنشاء ماصة زجاجية أولا باستخدام شعرية زجاجية ومجتذب ماصة صغيرة عمودي. الخطوة الثانية هي إدخال سلك فضي في الشعيرات الدموية مع جزء من السلك بارز من الطرف غير المدبب.

يتم استخدام الغراء التالي لإنشاء ختم محكم بين الماصة الزجاجية وإبرة تحت الجلد. تتمثل الخطوات النهائية في ملء الماصة بمحلول GABA بلون أزرق سماوي في شيكاغو متصل بحقنة صغيرة مملوءة بالزيت المعدني ومثبتة في حاقن صغير. في النهاية ، يمكن استخدام هذا البناء للحقن بأجزاء يمكن الوصول إليها وبأسعار معقولة لتعطيل هياكل الدماغ العميقة أثناء تسجيل النشاط العصبي للمنطقة المعطلة قبل وأثناء وبعد حقن الدواء.

هناك بعض المزايا لهذه التقنية مقارنة بالطرق الأخرى الموجودة مثل نبضات الضغط القائمة على الغاز وأنظمة الحقن الضوئي. واحد هو أنها طريقة فعالة من حيث التكلفة تسمح بالتحكم القائم على الوظيفة على توصيل المخدرات, مما يحد من تلف الأنسجة الناجم عن الإفراط في الحقن. ميزة أخرى يقدمها هذا النظام هي قدرة التسجيل المدمجة ، والتي تسمح بالتحكم الفعال في المكون الزمني لتعطيل التنشيط العصبي.

لتحضير ماصات حقن التسجيل، اسحب أولا شعيرات دموية بقطر خارجي يبلغ قطره ملليمترا واحدا لنموذج رأسي للشرطي. سبعة 20 أو وحدة مماثلة. اضبط السخان على 18 والملف اللولبي على واحد بعد ذلك ، مرتديا القفازات يدويا كسر الطرف لعمل فتحة والتحقق تحت المجهر من أن القطر الداخلي يتراوح بين 30 و 40 ميكرومتر.

قم بقياس ذلك باستخدام مسطرة محددات المنظر. سينتج مقاومة منخفضة نسبيا من 0.3 إلى 0.6 ميجا أوم. ثم من الطرف غير المدبب ، أدخل سلكا فضيا في الماصة بطول حوالي سبعة سنتيمترات ، واترك سنتيمترا إلى سنتيمترين معلقا من الماصة.

ثني هذا السلك الزائد بشكل متعامد إلى الشعيرات الدموية. بعد ذلك ، خذ إبرة تحت الجلد بقياس 30 وقم بتطبيق مادة لاصقة بلاستيكية مرنة على العمود. ثم أدخل الإبرة ببطء في الماصة.

قدر الإمكان. أضف المزيد من المادة اللاصقة لإنشاء مانع تسرب عند التقاطع بين الماصة والإبرة. مع رفع طرف الماصة لأعلى، اترك المجموعة تجف لمدة 12 ساعة تقريبا.

بعد التخدير ووضع الفئران في إطار تجسيمي ، ضع مرهم العيون واحلق رأسه نظيفا. بعد تطبيق مخدر موضعي وتأكيد مستوى التخدير الجراحي ، استمر في شق فروة الرأس على طول الوسيط باستخدام شفرة مشرط رقم 10. سيؤدي ذلك إلى كشف الغرز الإكليلية والسهمية.

ثم باستخدام ملعقة جراحية ، حدد المراجع التشريحية Lambda و bgma. اضبط موضع الرأس بحيث تكون هذه المعالم مستوية في نفس المستوى الأفقي. ثم صفر ، مؤشر صلب دقيق مثل أنبوب زجاجي على bgma.

بعد ذلك ، اضبط موضع الأنبوب على موقع الاهتمام باستخدام إحداثيات من bgma. استخدم الشاربي لرسم مربع حول المنطقة المستهدفة لحج القحف. الآن مع المثقاب الجراحي المعقم ، قم بإزالة العظم ببطء على طول العلامات.

ابدأ باستخدام أقل قدر ممكن من الضغط واستمر في تحريك المثقاب لتجنب تلف الأنسجة الناجم عن الرأس بسبب الاحتكاك عندما يصبح العظم رقيقا ، قم بإزالة القسم المربع بعناية باستخدام الملقط. درة MA لا تحتاج إلى إزالتها لأن الحقن سوف تخترقها للمضي قدما. حافظ على القشرة المكشوفة مروية بالسائل النخاعي الدماغي.

تحضير الحقن عن طريق التعبئة الأولى من خمسة إلى 10 ميكرولتر حقنة بالزيت المعدني. بعد ذلك ، قم بإعداد الدواء المعني بصبغة في محلول ملحي فسيولوجي. هنا يتم خلط 0.5٪ شيكاغو الأزرق السماوي مع 300 ميكرومولار جابا.

الآن املأ ماصة الحقن عن طريق تحميل حقنة سعة مليلتر واحد بمحلول معد ، ثم استخدام المحقنة لتحميل الماصة. عند إزالة المحقنة ، حافظ على الضغط الخفيف على المكبس ، حتى لا يزيل الفراغ المحلول من طريق الحقن. تحقق من تسرب السوائل عند نقاط التسرب المحتملة.

امسح أي سوائل زائدة وأعد التحقق من عدم وجود تسرب. الآن ، قم بتوصيل حقنة micros بالزيت المعدني بطريق الحقن. ثم امسح أي محلول زائد.

مع الشاش. تحقق من طرف الحقن. يجب أن يكون من الممكن تدفق قطرات صغيرة من المحلول من خلاله ، وإلا يتم حظره أو الآن تركيب الحاقن بإحكام على نظام مضخة صغيرة.

ثم حرك موضع طريق الحقن إلى الإحداثيات المستهدفة وقم بخفض القطب الكهربائي إلى الكولوس العلوي ، والذي يمكن تحديده من خلال تسجيل الإمكانات المرئية المستحثة. أثناء خفض القطب ، قم بتطبيق ضغط إيجابي صغير عن طريق تطبيق معدل منخفض من الحقن لتجنب الانسداد. مقاطعة الحقن عند الوصول إلى الهيكل.

بعد إدخال الحقن ، قم بتغطية القشرة المكشوفة بأجار دافئ لمنع الجفاف. بعد التثبيت النهائي للقطب ، انتظر 30 دقيقة للسماح بتثبيت الأنسجة المحيطة بالقطب. ثم حقن 400 إلى 800 نانولتر من المحلول بمعدل 40 نانولتر في الدقيقة حتى تنشيط النشاط العصبي في القولون العلوي ، يجب أن يظهر القطب انخفاضا في المسامير أثناء حقن المحلول المثبط

تم الحصول على الإمكانات المستحثة بصريا في العمود العلوي. بعد وميض 300 مللي ثانية للعين المقابلة عند حقن جابا ، تم قمع نشاط الارتفاع استجابة لتحفيز الفلاش لمدة 45 إلى 60 دقيقة. أثناء حضور هذا الإجراء ، من المهم التحقق من وجود تسرب أثناء التحميل والتحقق من أن محلول الدواء يتدفق بحرية عبر طرف الحقن.