Simple Method for Fluorescence DNA <em>In Situ</em> Hybridization to Squashed Chromosomes

Amanda M. Larracuente; Patrick M. Ferree

doi:10.3791/52288

طريقة بسيطة لDNA الإسفار في الموقع التهجين لسحق الكروموسومات

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

طريقة بسيطة لDNA الإسفار في الموقع التهجين لسحق الكروموسومات

Full Text

18,878 Views

11:36 min

January 6, 2015

DOI: 10.3791/52288-v

Amanda M. Larracuente¹, Patrick M. Ferree²

¹Department of Biology,University of Rochester, ²W. M. Keck Science Department,Claremont McKenna, Pitzer, and Scripps Colleges

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

هنا ، نقدم طريقة بسيطة لإجراء التهجين الموضعي للحمض النووي الفلوري (DNA ISH) لتصور التسلسلات غير المتجانسة المتكررة على الكروموسومات المثبتة على الشريحة. تتطلب الطريقة الحد الأدنى من الكواشف وهي متعددة الاستخدامات للاستخدام مع المجسات القصيرة أو الطويلة ، والأنسجة المختلفة ، والكشف عن الإشارات الفلورية أو غير الفلورية.

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام تهجين الحمض النووي في الموقع لتعيين التسلسلات اللونية غير المتجانسة إلى الكروموسومات الانقسامية. يتم تحقيق ذلك عن طريق تشريح أدمغة الثلث في يرقات ذبابة الفاكهة النجمية ، أو أي نسيج آخر ذي أهمية. الخطوة الثانية هي إصلاح الأنسجة على زلة الغطاء.

بعد ذلك ، يتم سحق الأنسجة بين زلة الغطاء والانزلاق. لتحضير الكروموسومات للتهجين ، فإن الخطوة الأخيرة هي تهجين مجسات oligo القصيرة المركبة إلى الأنسجة المسحوقة. في النهاية ، يتم استخدام الفحص المجهري الفلوري لإظهار توطين التسلسلات المكملة لمسبارات oligo على الكروموسومات.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos