الوجه Axotomy العصب في الفئران: نموذج لدراسة الاستجابة العصبون الحركي للإصابة

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخراج العصب الوجهي لدراسة تلف الأعصاب الطرفية. ينشأ العصب الوجهي في جسر جذع الدماغ ويخرج من الجمجمة عبر الثقبة الإبرية الخشائية، ثم يتفرع العصب بعد ذلك إلى مكوناته الرئيسية.

بمجرد الكشف عنه، يتم بتر العصب عند مخرجه من الثقبة الإبرية الخاطمية. هناك علامتان رئيسيتان تساعدان في تحديد موقع العصب الوجهي؛ الأولى هي القناة السمعية، والتي تتكون من صفائح غضروفية بيضاء لؤلؤية متصلة بغشاء رقيق.

أما العضلة الأخرى فهي البطن الأمامي للعضلة ذات البطنين، والتي تقع فوق العصب وموضع خروجه من الثقبة الإبرية الخشائية. بعد إصابة العصب الوجهي، يمكن للعالم دراسة عوامل متعددة مثل موت العصبونات الحركية أو التعبير الجيني. ويُعد نموذج إصابة العصب الوجهي أحد أكثر نماذج إصابة الأعصاب الطرفية توصيفاً.

تتمثل مزايا هذه التقنية في بساطتها، وقابليتها العالية للتكرار، وعدم تأثيرها على الوظائف الحيوية الناتجة عن الشلل الوجهي اللاحق. بالإضافة إلى ذلك، ونظراً للطبيعة المتماثلة للغاية للجهاز العصبي، يمكن أن يعمل الجانب غير المصاب كضابط داخلي مقترن لتجاربك. وللحفاظ على استخدام التقنيات المعقمة طوال هذا الإجراء، تأكد من تعقيم جميع الأدوات باستخدام الموصدة (autoclave) وتجهيز جهاز تعقيم بالخرز الزجاجي لتعقيم الأدوات بين العمليات.

قم بتجهيز منضدة الجراحة بوضع وسادة امتصاص فوق وسادة تدفئة، وإعداد المجهر وتثبيت القمع الأنفي بالشريط اللاصق بحيث يتوافق مع حافة المجال البصري. بعد تخدير الفأر، تأكد من عدم وجود أي استجابة جسدية لدى الفأر للمناورات، بما في ذلك قرصة إصبع القدم. بعد ذلك، قم بتحويل تدفق الغاز من غرفة التخدير إلى القمع الأنفي وضع مرهم off thalamic.

ضع الفأر على جانبه الأيسر فوق وسادات جراحية مع وجود وسادة تدفئة بالأسفل. راقب تنفس الحيوان باستمرار واضبط تدفق ISO fluorine حسب الحاجة للحفاظ على التخدير. بعد ذلك، ومن أجل كشف الموقع الجراحي، قم بتثبيت الأذن اليمنى بالشريط اللاصق إلى المخروط الأنفي.

يجب أن يظهر الوريد خلف الأذني وهو يمر عبر الأذن. بعد ذلك، بلل الفراء بـ 70%ethanol ثم احلق المنطقة. بعد إزالة الفراء، نظف الجلد بثلاث عمليات فرك متبادلة من اليود و70%ethanol حتى يتم تنظيف المنطقة تماماً.

ابدأ في إجراء الجراحة. تأكد من وضع الفم بشكل مربع على جانبه بحيث يمتد الوريد الأذني أفقيًا، حيث سيسهل ذلك عملية تحديد العصب الوجهي.

لتحديد موقع الشق الأول، تتبع الوريد الأذني الخلفي من صيوان الأذن وصولاً إلى المنطقة الخلفية للبروز الأذني. ثم وباستخدام مقصات زنبركية، قم بعمل شق بطول 4 mm، على بُعد 2 إلى 3 mm خلف البروز لأغراض تعليمية. سيتم توسيع هذا الشق للكشف عن التشريح الكامن تحته.

قم الآن بإجراء تشريح كليل للدهون تحت الجلد واللفافة. يمكن أن تتضرر الأوعية الدموية والعضلات بسهولة بواسطة المقص. في حال حدوث نزيف.

قم بالضغط باستخدام مسحة قطنية معقمة لمدة 30 ثانية على الأقل. في حال حدوث فقدان كبير للسوائل، احقن ما يصل إلى نصف ملليلتر من المحلول الملحي داخل الصفاق باستخدام إبرة قياس 25 أو 27. الآن، حدد موقع العصب الوجهي باستخدام العلامات التشريحية الرئيسية.

يكون العصب الإضافي الشوكي سطحيًا بالنسبة للعصب الوجهي، ويمكن رؤيته وهو يمتد من الجزء القذالي للجمجمة. ولتنوير العضلة شبه المنحرفة، حدد القناة السمعية الغضروفية؛ حيث تظهر بلون أبيض لؤلؤي وتكون موجودة في الجهة الرأسية بالنسبة للعصب الوجهي.

يلتف العصب الوجهي حول الجزء الإنسي من القناة السمعية. ثم حدد بطن العضلة ذات البطنين الأمامية التي تقع فوق العصب الوجهي وإلى الجهة الإنسية منه. قم بتشريح ما تحت هذا التركيب للكشف عن العصب الوجهي.

إنه هيكل أبيض صلب، ملتصق بطبقة من اللفافة الأساسية. حدد الفروع الرئيسية للعصب الوجهي. تتبعها ظهرياً وصولاً إلى منشأها من الثقبة الإبرية الخشائية.

استخدم ملاقط دقيقة لإبقاء الموقع مفتوحاً بينما تستخدم طرف مقص الزنبرك للتشريح على طول مسار العصب الوجهي. يمكن تحسس النتوء الخشائي العظمي بواسطة الملاقط. الآن، حدد الجذع الرئيسي للعصب الوجهي لسحق العصب.

اضغط عليها باستخدام ملقط دقيق لمدة 30 ثانية مع تطبيق ضغط مستمر؛ سيؤدي ذلك إلى قطع جميع المحاور العصبية. بعد ذلك، كرر عملية الضغط بزاوية عمودية لمدة 30 ثانية أخرى.

حافظ على ثبات الضغط بين التجارب. والآن بعد تحديد المعالم التشريحية ذات الصلة، سأقوم بتوضيح التقنية الجراحية الأكثر دقة. باستخدام شق أصغر، تتبع الوريد خلف الأذني من صوان الأذن وصولاً إلى المنطقة الواقعة خلف البروز الأذني، ثم قم بإجراء شق بطول 4 mm، على بُعد 2 إلى 3 mm خلف البروز.

الآن وبشكل مباشر، قم بتشريح الدهون تحت الجلد واللفافة باستخدام العلامات المرجعية الثلاث: العصب الإضافي الشوكي، وقناة الأذن، والبطن الأمامي للعضلة ذات البطنين. اكشف عن العصب الوجهي. تتبع العصب الوجهي رجوعاً باتجاه الثقبة الستالاوية الخشائية للوصول إلى جذع العصب الوجهي لقطعه، مع تثبيته برفق باستخدام ملقط دقيق والقص بالمقص.

تجنب تطبيق شد مفرط على العصب، وإلا فقد ينسل من جذع الدماغ. ثم باعد بين الطرفين المقطوعين أو أزل جزءاً من العصب لضمان عدم حدوث أي إعادة اتصال. وأخيراً، افحص العصب بعناية وتأكد من قطعه بالكامل.

بعد عملية الاستئصال، أعد جميع الدهون والعضلات إلى مواقعها التقريبية. ثم أغلق الجرح باستخدام غرز جراحية بحجم 7.5 مليمتر، أو مشابك جراحية، أو غراء السيانوأكريليت. إذا لزم الأمر، قم بتطبيق المسكنات في هذا الوقت، وأوقف التخدير وأعد الفأر إلى قفص فارغ بدون فرش.

أثناء فترة تعافي الحيوان، افحصه بحثاً عن علامات الشلل الوجهي، حيث تكون الشوارب مشلولة. فإذا كانت مائلة للخلف باتجاه الخد، سيبدو الأنف منحرفاً ولن ترمش العين استجابةً لنفخة هواء. والآن، إذا كان الحيوان أنثى، فيجب إسكانها مع أنثى أخرى.

ولكن إذا ظل الذكر بمفرده حتى تعود وظيفة رمش العين، يتم تطبيق مرهم ثلاميكي يومياً لمنع مضاعفات القرنية. وفي هذه الأثناء، تتم مراقبة الفأر بحثاً عن علامات العدوى أو المضاعفات الأخرى حتى يلتئم موقع الجراحة. هناك تباين ملحوظ في فقدان العصبونات الحركية بعد استئصال العين بناءً على العمر والخلفية الوراثية للفئران في الحيوانات من النوع البري التي تخضع لقطع العصب الوجهي في عمر ثمانية أسابيع.

تبقى حوالي 86% من العصبونات الحركية بعد 28 يوماً من عملية استئصال القرنية. وقد لوحظ فقدان للخلايا بشكل ملحوظ في نموذج الفأر SOD one لداء التصلب الجانبي الضموري، وكذلك في نموذج الفأر المصاب بنقص المناعة والناقص في الجين الثاني المنشط لإعادة التركيب (recombination activating gene two knockout) من خلال الالتقاط بالليزر.

استُخدم التشريح المجهري لعزل المواد من نواة العصب الوجهي الحركية. وكان من الممكن التقاط نواة العصب الوجهي الحركية بأكملها، أو بدلاً من ذلك، يمكن جمع النوى الفرعية بشكل منفصل.

تتميز هذه التقنية بدقة عالية، حيث يمكن التقاط العصبونات الحركية بشكل فردي، كما يمكن جمع ما تبقى من الحبة العصبية لتحليلها لاحقاً. تم استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (Quantitative PCR) لفحص التعبير الجيني في عينات النوى الفرعية للنواة البطنية الإنسية، الممثلة بالخط المقطع، والنواة البطنية الوحشية، الممثلة بالخط المتصل، حيث تم قياس التعبير لأربعة جينات مرتبطة باستجابة تجديد الأعصاب.

تم العثور على بعض الاختلافات بين النوى الفرعية لهذه الأجزاء. وأظهر تعبير Gap 43 أكبر اختلاف بين النوى الفرعية. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن إتمام الجراحة في غضون دقيقتين فقط.

من المهم تذكر وضع الحيوان بشكل صحيح، وإجراء الشق في الموقع الصحيح، واستخدام المعالم التشريحية لتحديد موقع العصب الوجهي. ومن السهل فقدان الاتجاه في منطقة الرأس والرقبة، لذا إذا شعرت بذلك، قم فقط بتحديد موقع القناة السمعية الغضروفية وتتبعها خلفياً للعثور على العصب الوجهي.