الفئران نموذج الضوئية التي يسببها الخلفي الإقفارية العصبي البصري

الهدف من هذا الفيديو هو إظهار نموذج مستحث كيميائيا ضوئيا للاعتلال العصبي البصري الإقفاري الخلفي وتقييم آثاره مع الخاصرة الرجعية للخلايا العقدية الشبكية في المرضى الذين تزيد أعمارهم عن 50 عاما. الاعتلال العصبي البصري الإقفاري هو أكثر أنواع الاعتلال العصبي البصري الحاد انتشارا. يمكن أن تظهر الحالة كواحد من نوعين فرعيين وفقا لمصدر إمدادات الدم المحددة المتأثرة والعرض السريري ، أو الاعتلال العصبي البصري الإقفاري الأمامي أو الاعتلال العصبي البصري الإقفاري الخلفي.

في حين أن التسبب في الاعتلال العصبي البصري الإقفاري الأمامي قد تمت دراسته على نطاق واسع ، إلا أن الاعتلال العصبي البصري الإقفاري الخلفي ظل غير مفهوم جيدا بسبب انتشاره المنخفض وعرضه المتغير ومعايير التشخيص غير المحددة بشكل جيد. علاوة على ذلك ، لم يثبت أي علاج أنه يمنع أو يعكس فقدان البصر بشكل فعال من الاعتلال العصبي البصري الإقفاري الأمامي أو الخلفي. لذلك ، فإن النموذج الحيواني القابل للتكرار والموثوق به للاعتلال العصبي البصري الإقفاري الخلفي له قيمة كبيرة لدراسة عملية المرض في الجسم الحي واختبار أنظمة علاجية جديدة للحماية العصبية وتجديد المحور العصبي للإصابة الإقفارية المستحثة كيميائيا بالأوعية الدموية الدقيقة مما يؤدي إلى وذمة وعائية وتجلط الدم بشكل فعال يخلق نقص تروية الأنسجة الإقليمية.

ينتشر الضرر الإقفاري إلى المناطق المجاورة ويتفاقم بسبب ضغط الأوعية الدموية الدقيقة بسبب الوذمة الوعائية المصاحبة. لقد قمنا بشكل انتقائي بتحفيز هذا النوع من نقص التروية من خلال مدير العصب البصري Bbar لعكس الضرر الناجم عن الاعتلال العصبي البصري الإقفاري الخلفي. هنا y Wang و Dale Brown يقدم عرضا توضيحيا خطوة بخطوة للإجراء.

على حد علمنا ، تم تطوير نموذج الإصابة الإقفارية في العصب البصري الخلفي حتى الآن حيث ينتج هذا النموذج نقص تروية مع تجنب الصدمات الجسدية. لذلك يمكن تقليد العمليات الفسيولوجية للاعتلال العصبي البصري الإقفاري الخلفي بشكل أفضل. في هذا الفيديو ، سنوضح الإجراء الكامل لنموذج مندوبنا للاعتلال العصبي البصري الإقفاري الخلفي بعد التعرض الجراحي للنحلة الحربية للعصب البصري الخلفي.

يتم حقن صبغة حساسة للصور عن طريق الوريد ويركز شعاع الليزر على سطح العصب البصري. يؤدي التفاعل الكيميائي الضوئي بين eryri B والليزر أثناء الإشعاع I إلى إتلاف بطانة الأوعية الدموية مما يؤدي إلى انسداد الأوعية الدموية الدقيقة بوساطة تجلط الصفائح الدموية والضغط الصوتي. تؤدي الإصابة الإقفارية الناتجة عن موت الخلايا العقدية الشبكية تدريجيا ولكن واضحا بسبب فقدان المدخلات المحورية ، والإصابة الناجمة عن بعد والنتيجة ذات الصلة سريريا.

يعمل ليزر YA بقوة 532 نانومتر و 300 مللي واط كحد أقصى. التالي هو مروحية شعاع تعمل بسرعة 250 هرتز ، والتي تستخدم لتقليل متوسط الطاقة إلى 7.5٪ من ذروة قوتها. لدينا مصراع شعاع مغلق ENC عادة مع ثقب صغير قطره 100 ميكرون محفور فيه لإنتاج شعاع تصويب ضعيف عند إغلاقه.

التالي هو عدسة محدبة بطول بؤري 25 سم ، وأخيرا ، منشور بزاوية حمراء لتوجيه الشعاع لأسفل على العصب البصري. بعد أن ينشأ شعاع الليزر من مصدره ، يمر عبر المروحية ، مما يقلل من متوسط الطاقة إلى 7.5٪ من ذروته. ثم يتم اعتراض شعاع التقطيع بواسطة المصراع ، والذي عند إغلاقه ينتج شعاع تصويب ضعيف جدا عن طريق تصفية الشعاع مكانيا من خلال فتحة قطرها 100 ميكرون.

ثم يتم تركيز هذا الشعاع الضعيف بواسطة العدسة وإعادة توجيهه لأسفل من خلال الزاوية الصحيحة. المنشور على العصب البصري الخلفي المكشوف الأول يبدأ الإشعاع عن طريق تبديل مرشح الأمان إلى المسار البصري لمجهر التشغيل ، متبوعا بفتح مصراع الشعاع بعد تأخير ثانية واحدة. في هذه المرحلة ، يتم تركيز شعاع الفرم الكامل وتوجيهه لأسفل على العصب البصري المكشوف.

عند التفاعل بين الشعاع والنحلة العرقية الذائبة في مجرى الدم ، يتم امتصاص ضوء الليزر الأخضر 5 32 نانومتر بكفاءة بواسطة الدائرة وصبغة B والفلور عبارة عن أكسجين جزيئي أصفر يصطدم بجزيء صبغة الحالة الثلاثية ، ويقبل طاقته من الإثارة لتصبح أكسجين أحادي الحالة ، وهو شديد التفاعل. ثم يقوم الأكسجين المقطعي المحوسب مباشرة بأكسدة بطانة الأوعية الدموية ويسبب أضرارا متنقعة للحاجز ، مما يجذب الصفائح الدموية على وجه التحديد ويسهل أيضا تسرب البلازما إلى الحمة. وبالتالي تؤدي عملية الضرر هذه إلى انسداد الأوعية الدموية بسبب تجلط الدم وكذلك عن طريق الوذمة الوعائية بسبب ضغط الأوعية الدموية الدقيقة ، يتسبب السلم في تمدد الآفة إلى ما وراء عمق اختراق ضوء الليزر.

إذا تم إجراء هذه التقنية بشكل صحيح ، فلن يحتوي ثرومبين الصفائح الدموية على ألياف. وبالتالي تمييز هذه الطريقة في عملية تخثر القدم المعتمدة على الحرارة الأقل كفاءة. يعزز تشغيل طاقة الذروة العالية عمق الاختراق الفعال في العصب البصري اللامع مع تقليل متوسط الطاقة إلى 7.5٪ عبر الحزمة.

يساعد التقطيع على التأكد من أن عملية القدم الكيميائية وليست الحرارية تسبب إصابة الأنسجة في الفئران المخدرة لدينا عن طريق الحقن داخل الصفاق من الكيتامين دياز في الكوكتيل. بمجرد التخدير ، يضع اللسان برفق للأمام لمنع الاختناق ، ويحلق المواقع الجراحية وتطبيق التكرار ، ويزيده على كلتا العينين لمنع سحب القرنية أثناء الجراحة. قم بتقييم خطوات التخدير للتأكد من أن لن يشعر بأي ألم أثناء الجراحة.

ابدأ بقسطرة الوريد الفخذي. قبل العمليات الجراحية ، قم بإرفاق طول أنبوب معقم ومالح بحقنة ML واحدة تحتوي على محلول Ereri B مقاس مسبقا. بجرعة 20 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم ، قم بتركيب المحقنة في مضخة تسريب مضبوطة بمعدل 600 ميكرولتر في الدقيقة.

نظف موقع الجراحة عن طريق مسح المنطقة باليود 10٪ بوفيدون ، متبوعا بنسبة 70٪ إيثانول. قم بعمل شق في قاعدة الفخذ الأيمن باستخدام شفرة رقم 15. قطع وانتشار من خلال الغشاء بالمقص وفصل العضلات بالملقط حتى يصبح فرع الوريد الفخذي مرئيا.

استمر في التشريح لأسفل بالمقص والملقط حسب الضرورة لفصل الوعاء عن الأنسجة المحيطة حسب الضرورة. نظف منطقة الجراحة باستخدام BSS المعقم البارد لتسهيل رؤية الوريد. افصل بعناية الغمد المحيط بالوريد والشريان والعصب عن الأنسجة الأساسية.

ثم عزل الوريد مع تشريح حاد على جانبيه. قم بتمرير قائمتين من خيوط النايلون تحت الوريد عن طريق رفع الوعاء بعناية ، ووضع ملقط ذو طرف رفيع تحتها والإمساك بها وسحبها. اربط الوريد البعيد بإحكام وقم بعمل عقدة فضفاضة حول الوريد القريب.

قم بعمل قطع جزئي للوريد بالقرب من الربط البعيد وقم بتوسيعها حسب الضرورة باستخدام ملقط يثبت جدار الوريد عند القطع ، أدخل بعناية أنبوب تدفق المحلول الملحي في الوعاء. ثم شد العقدة القريبة الفضفاضة حول الأنبوب. قم بتثبيت الأنبوب في مكانه عن طريق ربطه بالخياطة البعيدة.

بعد التحقق من جودة القسطرة والتأكد من خلوها من العوائق أو التسريبات ، أغلق الشق مؤقتا بالخيوط لحماية القسطرة والأنسجة. جهز موقع الجراحة بمحلول منظف اليود 10٪ بون و 70٪ إيثانول. قم بعمل شق على طول الجلد خلف العين بشفرة رقم 15 ، ثم قم بقطع النسيج الضام باستخدام مقص التواء البندقية.

استمر في تشريح النسيج الضام على طول الزينة العلوية للعظم البصري. احرص على تجنب تعطيل الأوعية الدموية المحلية. تشريح من خلال الأنسجة البصرية حتى يتم تصور العضلة المستقيمة العلوية.

يقع العصب البصري تحته. يسحب سديلة الجلد والنسيج الضام بشكل جانبي وهبوطي. سوف تدور العين للأمام والخارج.

أدخل بعناية زوجا من الملقط الحاد وقم بتوسيعه بالتوازي مع العصب من أجل كشفه. سيتم استهداف شبكة الأوعية الصغيرة التي تغذيها أثناء تشعيع الليزر. تأكد من ارتداء نظارات السلامة ذات اللون البرتقالي في جميع الأوقات أثناء تشغيل جهاز تشعيع الليزر لحماية نفسك من ضوء الليزر.

قم بتشغيل الليزر واضبط ذروة ومتوسط القوى لعدة دقائق. قبل جميع إجراءات التشعيع. ضع برفق على الجهاز وضعه بحيث يضيء شعاع التصويب بالقرب من موقع التعرض للعصب البصري.

ثم أعد كشف طول العصب البصري بعناية باستخدام ملقط طرف رفيع. قم بإجراء تعديلات صغيرة في تحديد المواقع بحيث يضرب شعاع التصويب العصب البصري بين ثلاثة وأربعة ملليمترات خلف رأس العصب البصري. حقن محلول 2٪ من الصنوبري B عن طريق تنشيط مضخة التسريب واتركه يدور لبضع ثوان خلال هذا الوقت عند قطرة صغيرة من BSS لترطيب سطح العصب البصري.

بعد التحقق من موضع شعاع التصويب ، ابدأ مرشح الأمان الذي يتم التحكم فيه بمفتاح القدم متبوعا بتشعيع الليزر والتشعيع لمدة 90 ثانية. يجب ملاحظة التألق الأصفر الذي يظهر باللون البرتقالي من خلال المرشح من السطح العلوي للعصب ، ويجب أن يكون التألق موحدا عبر العصب البصري. مع تعديلات موضعية طفيفة للفأر ، سيتم فتح مرشح الأمان تلقائيا بعد التشعيع.

في بعض الحالات ، يمكن ملاحظة نزيف دقيق ، وتخفيف الجر على عضلات العين الزائدة ، وإعادة العين إلى وضع محايد وإغلاق الشق بالخيوط المتقطعة. اقطع الغرز التي تحمل قسطرة الوريد الفخذي واسحب الأنبوب بعناية. اربط الوريد الفخذي القريب بإحكام لمنع التسرب وأغلق الشق بالخيوط المتقطعة.

ضع مرهم المضادات الحيوية على كلا الشقوق وتحقق من سلامة الأوعية الدموية في الوريد الشبكي المركزي والشريان. أعد إلى قفص نظيف ساخن للتعافي ، وقم بإدارة المسكنات بعد الجراحة ورعاية. اتباع إرشادات رعاية المؤسسية.

افحص ما بعد الجراحة بشكل متكرر للتأكد من أن موقع الشق نظيف وخالي من العدوى ، وتقييم الألم وتوفير مسكنات الألم الكافية ومراقبة التغذية المناسبة والسلوكيات الأخرى. يمكن استخدام التصوير متحد البؤر لأشهر الشبكية المسطحة لتحديد بقاء خلايا الألعاب في الشبكية بعد تحريض الاعتلال العصبي البصري الإقفاري الخلفي باستخدام الشفة الرجعية للمتوهجة مقارنة بحيوانات التحكم. يوجد عدد أقل بكثير من خلايا الماعز الزهرية في بعد أسبوعين من تحريض PI واحد.

لم يلاحظ فرق كبير بين عدد الخلايا العقدية الشبكية في السيطرة على الوهمية. يشير هذا إلى أن فقدان خلايا عصابة الشبكية يتم استنباضه عن طريق الجمع بين B وإشعاع الليزر بدلا من الطاقة الحرارية من الليزر وحده. الجزء الأكثر أهمية في الإجراء هو التعرض للعصب البصري وتشعيعه.

التشريح الدقيق ضروري من أجل منع تلف العصب بواسطة ملقط القرش ذو الطرف الدقيق أو عن طريق التمدد في شريان العين. أدخل العصب البصري على بعد حوالي ملليمتر واحد من رأس العصب البصري. إذا كان الإشعاع على بعد ثلاثة إلى أربعة ملليمترات من رأس العصب البصري مهما لتقييد نقص التروية في الإمداد الشعري الذي يغذي العصب بدلا من الشرايين وأي من فروعه التي تغذي الشبكية الداخلية ، فإن الفحص بالمنظار ضروري لضمان سلامة الأوعية الدموية للشريان الشبكي المركزي والوريد بعد الإجراء مع معلمات محددة مسبقا لإشعاع الليزر.

يحتوي هذا النموذج على مسار زمني قابل للتكرار لموت الخلايا حيث أن ذروة الشدة ومدة التشعيع هما محددان للضرر الإقفاري. يمكن إجراء تعديل شدة لهذه المعلمات لضبط شدة النتيجة لتلف خلايا العقد الشبكية لأهداف الدراسة المختلفة مع مزيد من التحسين. يوفر هذا النموذج منصة جديدة للبحث في التسبب في المرض والتغيرات الجزيئية للاعتلال العصبي البصري الإقفاري الخلفي ويمكن استخدامه لفحص الأدوية العلاجية لهذا وغيره من الأمراض الإقفارية في الجهاز العصبي المركزي.