طرق لمقارنة العناصر الغذائية في خبز النحل الذي أدلى به Africanized والعسل النحل الأوروبي والتأثيرات على التتر البروتين الدملمف

الهدف العام من التجربة التالية هو تحديد العناصر الغذائية في حبوب اللقاح وخبز النحل ، المصنوع من نوعين فرعيين من نحل العسل وقياس استهلاك عيارات البروتين. يتم تحقيق ذلك من خلال تقديم النحل الأوروبي والأفريقي مع نفس مصدر حبوب اللقاح في منطقة محصورة والسماح للنحل بتخزين حبوب اللقاح في مستعمراتهم كخبز نحل. بعد ذلك ، يتم تغذية خبز النحل للنحل الأوروبي والأفريقي الناشئة حديثا في أقفاص.

ثم يتم أخذ عينات من النحل في الأقفاص بعد أربعة وسبعة و 11 يوما من الرضاعة ، ويتم قياس كمية خبز النحل المتبقية في كل قفص لتقدير الاستهلاك. أخيرا ، يتم قياس تركيز العناصر الغذائية ، بما في ذلك البروتين والأحماض الأمينية في حبوب اللقاح وخبز النحل الذي يصنعه النحل الأوروبي والأفريقي ومقارنته بين أجناس النحل. تظهر النتائج أن خبز النحل يختلف عن حبوب اللقاح في البروتين وبعض تركيزات الأحماض الأمينية ، وكذلك عيار بروتين الهيموليمف.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في دراسات تغذية نحل العسل ، مثل دور مصدر حبوب اللقاح على العناصر الغذائية الموجودة في خبز النحل وكيف يكتسب النحل هذه العناصر الغذائية من أنواع فرعية مختلفة من الأقواس والأنماط الجينية. تظهر التقنيات إميلي واتكينز دي يونغ ، وهي فنية طلابية في مختبري للبدء بعد وضع مصائد حبوب اللقاح على مستعمرات نحل العسل ، وجمع حبوب اللقاح ، واستخدام مطحنة القهوة لطحن حبوب اللقاح إلى مسحوق ناعم ، وإنشاء خمس مستعمرات ، كل من نحل العسل الأفريقي أو نحل العسل الأوروبي HB ، أو EHB في منطقة طيران مغلقة أو EFA ، بحيث يتغذى النحل فقط على حبوب اللقاح المتوفرة لمنع العمال من الانجراف بين مستعمرات EHB و A HB. قسم EFA إلى أقسام منفصلة حتى لا يتمكن النحل من العبور بينهما إلى كل قسم من EFA ضع مستعمرات EHB فردية أو HB مع 3 ، 500 إلى 4، 000 مشط شمع نحل عامل مع عسل الرحيق ، وحضنة غير ناضجة ، ومشط فارغ يغذي حبوب اللقاح الأرضية إلى المستعمرات عن طريق وضع صينية في كل قسم من EFA ونشر ما يقرب من 60 جراما من حبوب اللقاح على الصواني.

بهذه الطريقة ، يمكن للنحل المطروق جمع حبوب اللقاح كأحمال مناهج دراسية وتخزينها في مستعمراتها كخبز نحل لإطعام النحل في أقفاص. ضع إطارات حضنة العامل المختومة من مستعمرات HB و EHB في أقفاص ظهور منفصلة في غرفة بيئية محددة عند 32 إلى 24 درجة مئوية و 40٪ رطوبة نسبية. عندما يظهر العمال في عمر 24 ساعة تقريبا ، أنشأوا 12 قفصا للمقايسة الحيوية من زجاج شبكي وأضافوا إما 100 نحل EHB أو عامل HB ظهر حديثا إلى كل قفص ، ضع قسما من المشط بعدد معروف من خبز BBR أو EBB أو خبز B الأفريقي أو خلايا A B ، B في كل قفص لتوليد ظروف العلاج التالية.

يتم تغذية HB A-B-B-E-H-B التي تغذى على A B ، BAHB Fed EBB و EHB Fed. تضيف EBB قوارير من الماء ومحلول سكروز بنسبة 30٪ تمت صياغته حسب الحجم لكل قفص. استبدل شراب السكر وقوارير الماء يوميا لمدة 11 يوما من الدراسة.

العينة 10 ، EHB الناشئة حديثا ، وعمال A HB قبل وضعهم في الأقفاص. قم بالإشارة إليها على أنها يوم صفر Bs واجعلها بمثابة خط أساس لتركيزات بروتين الهيموليمف. قم بإزالة 10 نحل من كل قفص بعد إطعامه على EBB أو A B و B لمدة أربعة وسبعة و 11 يوما.

ضع النحل الحي على أنابيب الصقر الفردية وضعها على أكياس ثلج. حدد العينة الفرعية المكونة من أربعة نحل لتحليل تركيز بروتين الهيموليمف بعد أخذ عينات من النحل في اليوم 11 ، احسب عدد خلايا المشط التي لا تزال تحتوي على خبز النحل. قم بإزالة خبز النحل المتبقي من الخلايا الموجودة في كل قفص وتخزينه في أنابيب طرد مركزي دقيقة منفصلة عن طريق القفص.

احتفظ بعينات BBR عند سالب 80 درجة مئوية حتى يتم تحليلها لتركيز البروتين القابل للذوبان في الأس الهيدروجيني ومحتوى الأحماض الأمينية. لإجراء تحليل البروتين ، خذ ست عينات من حبوب اللقاح وعينة من EBB و A BB من كل قفص. امزج 20 ملليغرام من حبوب اللقاح أو bbr مع مليلتر واحد من دوامة PBS 0.1 مولار إلى الخليط لمدة 10 ثوان وجهاز طرد مركزي عند 571.2 جم لمدة دقيقة واحدة.

قم بإزالة عينة سعة 25 ميكرولتر من المادة الطافية S وضعها في بئر من قاع مسطح 96 بئر ، صفيحة البوليسترين E-I-A-R-I-A. كرر كل عينة في ثلاثة آبار. قم بتسخين نهاية أنبوب شعري سعة 20 ميكرولتر واسحب الجزء الساخن حتى تتشكل نقطة تشبه الإبرة.

ثم ارسم الهيموليمف من النحل الذي تم جمعه من كل قفص عن طريق إدخال الأنبوب الشعري في الجزء الجانبي الأيمن من الصدر بالقرب من نقطة مرفق الجناح. اجمع ليمفاوية إضافية إذا لزم الأمر عن طريق إدخال نفس الأنبوب في الغشاء بين أدلة البطن. أضف ميكرولتر واحد من الهيموليمف إلى تسعة ميكرولتر من 0.1 مولي PBS.

استخدم مجموعة فحص البروتين برادفورد واتبع تعليمات الشركة المصنعة لتحديد إجمالي البروتين القابل للذوبان. تقوم التركيزات بتحليل الأحماض الأمينية وفقا لبروتوكول النص كما هو موضح في هذه الرسوم البيانية ، وكان كل من قيمة الأس الهيدروجيني وتركيز البروتين أقل في BBR منه في حبوب اللقاح. استهلك كل من EHB و A HB A BB أكثر من EBB كما هو موضح هنا.

كانت مستويات البروتين القابل للذوبان في الهيموليمف ل A HB أعلى بكثير من EHB بغض النظر عن نوع BBR الذي استهلكوه. حدثت هذه الاختلافات في مستويات بروتين الهيموليمف على الرغم من أن EHB و A HB استهلكاها كميات مماثلة من كل نوع من أنواع bbr. من بين 10 أحماض أمينية ضرورية لنحل العسل ، تم اكتشاف جميع الأحماض الأمينية باستثناء الهيستامين في حبوب اللقاح.

في معظم الحالات ، كانت تركيزات الأحماض الأمينية المقاسة في خبز النحل أعلى منها في حبوب اللقاح. على سبيل المثال ، كانت تركيزات الليوسين والثيونين أعلى بحوالي 60٪ في BBR مقارنة بحبوب اللقاح وكانت تركيزات الفالين أعلى بحوالي 25٪. كانت مستويات الجلوتامين حمض الأسبارتيك ألانين أعلى في BBR منها في حبوب اللقاح.

تؤجل تركيزات الأحماض الأمينية بشكل كبير بين A و B و B و EBB باستثناء فينيل ألانين والسيستين. كانت مستويات فينيل ألانين أعلى بمرتين في A BB مقارنة ب EBB أو حبوب اللقاح. كانت تركيزات السيستين أقل في EBB مقارنة ب A أو B أو B أو حبوب اللقاح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقييم تركيزات البروتين في خبز النحل وحبوب اللقاح وهيموليمف نحل العسل. باستخدام هذه التقنيات ، يمكنك تحديد ما إذا كان تخزين الطعام واستهلاكه وتركيزات بروتين الهيموليمف تتأثر بالعوامل الوراثية أو البيئية.