فحص السريع الدوبامين حيوية مع المسح الضوئي السريع Voltammetry دوري أثناء داخل الفم إدارة منبهة للذوق في الجرذان الصحوة

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس استجابات الدوبامين دون الثانية للطعم الفموي الكثيف. يتم تحقيق ذلك عن طريق إنشاء قسطرة فموية وأقطاب كهربائية مرجعية وأقطاب كهربائية من ألياف الكربون اللازمة للإجراءات الجراحية والتسجيل اللاحق عن طريق القياس عن بعد الدوري الدائري للمسح السريع. الخطوة الثانية هي زرع القسطرة الفموية جراحيا ، والقطب داخل الجمجمة ، والقنية التوجيهية لقطب ألياف الكربون.

بعد أسبوع واحد ، يمكن إنزال القطب الصغير المكون من ألياف الكربون في النواة المتكئة لتسجيل التغيرات في إفراز الدوبامين خارج الخلية استجابة لتوصيل الأذواق داخل الفم. الخطوة الأخيرة بعد التسجيل هي معايرة القطب الكهربائي واستخدام تحليل المكونات الأساسية لعزل البيانات التي تحتوي على معلومات حول الدوبامين. في النهاية ، يتم استخدام الاستخدام المشترك للطعم والتسليم داخل الفم والقياس عن بعد الدوري للمسح السريع لإظهار التغييرات في استجابات الدوبامين دون الثانية إلى taten.

هناك ميزتان رئيسيتان لهذه التقنية المدمجة على الطرق الحالية. أولا ، يتمتع القياس الضوئي السريع بالضبط الضوئي IC بدقة زمنية عالية ، ويقلل التوصيل الثاني داخل الفم من الحركة التي يحتاجها الفئران للحصول على التاتين ويسمح لنا بعزل استجابات الدوبامين بشكل أفضل للتاتين. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة مع تصنيع القسطرة الفموية.

ومع ذلك ، فإن بناء قسطرة فموية جيدة ومدفوعة الأجر سيضمن ملاءمة مريحة للقسطرة بين الخد والأضراس العلوية ، ويزيد من احتمالية نجاح التجربة. لتحضير قطب التسجيل ، قم أولا بشفط ألياف كربونية قطرها سبعة ميكرون T ستة 50 في شعرية زجاجية سليكات بورا بقطر داخلي يبلغ 0.4 ملم. بعد ذلك ، ضع الشعيرات الدموية في قطب قطبي عمودي ، وقم بسحب المبدئي مع ضبط السخان على 55.0 وإيقاف تشغيل المغناطيس ، ثم اضبطه حسب الحاجة.

بعد سحب الماصة تحت المجهر، قم بقص ألياف الكربون المكشوفة بحيث تمتد من 75 إلى 100 ميكرون خارج الزجاج. يجب أن تكون الألياف الموجودة في الزجاج محكمة الغلق ، وإلا تخلص من المستحضر. بعد ذلك ، قم بتجريد العزل من نصف سلك قياس 30 بوصة ، وقم بتطبيق الانكماش الحراري لتأمين القطب الكهربائي على المناور الصغير.

ثم ضع طبقة رقيقة من الطلاء الفضي على السلك بينما لا يزال الطلاء مبللا. أدخل السلك في الطرف المفتوح للقطب الكهربائي وقم بتوصيله بألياف الكربون الموجودة فيه. تحقق من جهة الاتصال هذه تحت المجهر.

خذ القطب الكهربائي في المعالج الصغير وقم بتثبيته بالانكماش الحراري. ضع قطب ألياف الكربون المحضر في IPA لمدة 10 دقائق على الأقل لتنظيف سطح القطب وزيادة الحساسية اللاحقة للدوبامين. بعد إزالة القطب الكهربائي من IPA ، اشطف ألياف الكربون بماء الصنبور لإزالة IPA.

بعد ذلك ، قم بإعداد القطب المرجعي من سلك فضي مقاس 13 ملم بشبكة من الفضة بقطر 0.4 ملم ، وقم بقطع الجزء غير الشبكي من السلك ولحمه بدبوس ذهبي. ثم ضع الايبوكسي على اللحام. ثم اغمس الجزء الشبكي في حمض البوليمر خمس مرات.

اتركه يجف لمدة 30 دقيقة في الهواء بين الانخفاضات بعد الغمس الأخير. اتركه يجف في الهواء طوال الليل. في اليوم التالي.

اخبز الجزء الشبكي من السلك على حرارة 120 درجة مئوية لمدة ساعة. لجعل القسطرة الفموية تقطع أولا. أنابيب البولي إيثيلين 100 في شرائح ستة سنتيمترات.

ثم اصنع قرصا صغيرا مسطحا في أحد أجزاء الأنبوب عن طريق إذابة النهاية والضغط عليها على سطح بارد مستو في وسط القرص. استخدم إبرة قياس 18 لإنشاء ثقب. قم بتوصيل الطرف الآخر من جزء الأنبوب بالطرف الحاد لإبرة قياس 18.

ثم يؤدي استخدام مثقاب الثقب إلى عدة قطع قطرها ستة ملليمترات ، بسمك 3.18 ملم من البولي تترافلورو إيثيلين. ثم في وسط هذه الأقراص ، قم بإنشاء ثقب ، وبالتالي تحويل الأقراص إلى غسالات. قم بقص الغسالة على شكل شبه منحرف للمساعدة في وضعها أثناء الزرع الضريسي.

لإكمال القسطرة ، ادفع إبرة متصلة بأنبوب PE بالكامل من خلال الغسالة ، وحرك الغسالة إلى الأنبوب. يستغرق البروتوكول التالي حوالي 75 دقيقة حتى يكتمل. ابدأ بفأر معد للجراحة وافتح فمه باستخدام قطعة قطن.

ثم ادفع الإبرة الموجودة على قنية في الأنسجة بين الخد والضرس العلوي الأول بحيث تخرج الإبرة خلفها مباشرة والوسطى إلى الأذنين. ثم حرك القنية لأعلى وقم بتثبيت الغسالة على الأضراس لتثبيت القسطرة على الإبرة المكشوفة. انزلق على الغسالة واجعلها مشدودة في الشق.

قم بتثبيت هذه الغسالة في موضعها. قم بقص الأنبوب بحيث يظل سنتيمتران إلى أربعة سنتيمترات مكشوفا فوق رأس الفئران. ثم باستخدام نفس التقنية ، ضع قسطرة في الجانب الآخر من الفم.

بعد ذلك ، ضع الجرذ في إطار تجسيمي وحفر ثلاثة ثقوب للقنيات والأقطاب الكهربائية لعمل تسجيلات في الموضع الأساسي للنواة المتكئة. قنية التوجيه 1.2 ملم أمامي و 1.4 ملم. تورم الورم الجانبي.

اخفض جهاز القنية حتى يتم مسح القاعدة البلاستيكية بالجمجمة. ضع القطب المرجعي في نصف الكرة الأرضية المقابل لقنية التوجيه. اخفض المرجع بحوالي ملليمترين أسفل الجافة.

ثم ضع القطب الكهربائي المحفز ، 5.2 ملم خلف و 1.0 ملم من الورم الجانبي. لاستهداف المنطقة السقيفية البطنية. اخفض القطب الكهربائي المحفز بمقدار 8.0 ملم تحت جافهة.

ثم قم بتأمين المكونات بالبراغي والأسمنت وتوفير رعاية ما بعد الجراحة. قبل إجراء تجربة ، تحقق دائما من سالكية القنية الفموية عن طريق غرس 200 ميكرولتر من الماء وراقب ما إذا كان الجرذ يتذوق الماء ، قم بتنظيف موقع التسجيل عن طريق إزالة القنية الوهمية ، وإضافة قطرتين من 50٪ الهيبارين إليها ثم إعادة وضعها برفق. يجب ألا تكون الدمية على بعد ملليمترين من موقع التسجيل.

الآن قم بتوصيل وتثبيت مرحلة الرأس بالمحفز المزروع في VTA ثم قم بخفض قطب التسجيل في قلب النواة المتكئة. الآن باتباع بروتوكول النص ، قم بإنتاج مجموعة بيانات تدريبية. انتظر دائما دقيقتين على الأقل ، ولكن ما يصل إلى أربع إلى خمس دقائق بين المحفزات للسماح بإعادة التحميل الحويصلي ويجب ذلك.

الخطوة الأكثر أهمية في التجربة هي الحصول على قطب كهربائي عالي الجودة. إذا كانت الخلفية مميزة شكل دائري في مرحلة الارتفاع هو قطب كهربائي جيد. إذا كان الشكل الدائري صغيرا أو يتطابق بشكل وثيق مع شكل الموجة المطبق ، فجرب قطبا كهربائيا مختلفا.

إذا كانت الخلفية في المكان المناسب لإزاحة ، فقم بتطبيق إزاحة إزاحة على شكل الموجة المطبق في اتجاه موجب بزيادات قدرها 0.1 فولت. بمجرد إنشاء مجموعة تدريب في موقع التسجيل ، اجمع البيانات أثناء غرس 200 ميكرولتر من الجرعات من التاتين كل دقيقة إلى ثلاث دقائق لمدة 25 حقنة. ثم انتظر 30 دقيقة على الأقل وقم بغرس المذاق التالي بنفس الطريقة.

تم استخدام FSCV جنبا إلى جنب مع زرع القسطرة داخل الفم لفحص كيف يعدل السكروز و AIT الصاعد من taten إطلاق الدوبامين الطوري في قلب النواة المتكئة قبل التحفيز الكهربائي للتسريب المشار إليه بواسطة الشريط الأحمر ل VTA ينتج زيادات قوية في إطلاق الدوبامين الطوري في قلب النواة المتكئة بعد الحصول على مجموعة التدريب 6.5 ثانية من 200 ميكرولتر من السكروز المشار إليه بالشريط الأحمر الناتج في الارتفاع في التيار المشار إليه بالسهم الأبيض. حدث هذا عند إمكانات أكسدة الدوبامين ، والتي يشار إليها بخط الاندفاعة الأبيض ، مما أدى إلى تحويل البيانات إلى مخطط تركيز مقابل زمني. بعد أن تحققت PCA من أن التيار المتزايد استجابة للطعم هو نتيجة لزيادة تركيز الدوبامين.

تم غرس منثول تاتين آخر أثناء تسجيلات FSCV في نواة المتكئة ، كما لوحظ زيادة تركيز الدوبامين بعد ضخ المنثول بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء الجراحة داخل الفم والقنية المدمجة في 75 دقيقة. يمكن دمج هذه التقنية مع أشكال أخرى من السلوك مثل تكييف بافلوفي وأوبرا تنافسي ومكروض من أجل الإجابة على أسئلة حول إشارات الدوبامين دون الثانية أثناء هذه العمليات.