Name: عالية الدقة قياس الزنك النظائر تطبق على الماوس هيئات (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: اكتشف تقنية قياس نسب نظائر الزنك بدقة عالية في أعضاء الفئران باستخدام كروماتوغرافيا التبادل الأيوني ومطياف الكتلة. تساعد هذه الطريقة في فهم آليات نقل الزنك وتشخيص الأمراض المتعلقة باختلال توازنه.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يعترف FM بتمويل من وكالة المخابرات الوطنية من خلال CHAIRE دي التميز آيدكس جامعة السوربون باريس سيتي، وINSU من خلال منحة PNP، المعهد الجامعي فرنسا فضلا عن برنامج Labex UniverEarth في جامعة السوربون باريس سيتي (ANR-10-LABX-0023 وكالة الاستخبارات الوطنية -11-آيدكس-0005-02). نشكر أيضا بتمويل من مجلس البحوث الأوروبي في إطار الجماعة الأوروبية H2020 البرنامج الإطاري / ERC اتفاقية المنحة # 637503 (البكر).

وقد تمت الموافقة على الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة باريس ديدرو: ملاحظة. 1. إعداد المواد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغلي الفرعي تقطير 1 L من الأحماض (HNO 3، دورية هارفارد) من أجل تنقيتها من الشوائب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف الأكواب ومحول طرف في الساخن (~ 100 ° C) تتركز HNO 3 حمام حمض لمدة يومين على الأقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل نصائح ماصة في البرد 3 N HNO 3 حمام لعدة أيام وشطف بشكل فردي ثلاث مرات مع دي المتأينة المياه. </li></ol> إعداد 2. عينة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من الكيتامين وزيلازين. تقييم التخدير من خلال طريقة قرصة أخمص قدميه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الدم عن طريق ثقب في القلب في حضور الهيبارين في 1.5 مل أنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل البلازما من خلايا الدم عن طريق الطرد المركزي (10 دقيقة، 1500 x ج) ونقل البلازما إلى البولي بروبلين جقارورة ryogenic باستخدام نصائح البولي بروبلين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الدم المتبقية من الأجهزة عن طريق قطع الوريد الكبدي وحقن DPBS من خلال القلب. تقييم فاة الماوس عن طريق خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصاد الأجهزة العقيمة مع أدوات الفولاذ المقاوم للصدأ، تحريرهم من الدهون المحيطة بها إن وجدت، والمفاجئة تجميدها في البولي بروبلين قارورة المبردة. </li></ol> 3. الكيميائية تنقية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لأول مرة، ويحل العينات في مزيج من ~ 1 مل من مركز (30٪) H 2 O 2 و ~ 1 مل من المركز (~ 15 M) HNO 3. هل كل هذه الخطوات داخل غطاء الدخان. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الجهاز كله من الفائدة إلى 15 مل تفلون الكأس. ثم، إضافة H 2 O 2 / HNO 3 إلى 5 كوب. الحفاظ على الكأس مفتوحة لبضع دقائق وذلك لتجنب البقع الناجمة عن رد فعل أكسدة المواد العضوية والإفراج عن CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخيرا، وضع الكأس على طبق ساخن في أبوالتحرير 100 درجة مئوية لمدة بضع ساعات أو حتى حل واضح تماما. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الكأس وتجفيف الحل على طبق ساخن في حوالي 100 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة العينة الجافة، إضافة 1 مل من 1.5 N دورية هارفارد للعينات. إغلاق الكأس والسماح لها حل على طبق ساخن عند 100 درجة مئوية لمدة بضع ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي الوقت نفسه إعداد الأعمدة ميكرولتر 500. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 500 ميكرولتر من الراتنج شبكة AG1X8 200-400 إلى العمود ووضعها على الرف العمود مع كوب القمامة تحتها. غسل الراتنج بالتناوب: 5 مل من 18.2 MΩ ⋅ سم ماء، 5 مل من 0،5 N HNO 3، 5 مل من الماء و 5 مل من 0،5 N HNO 3 ثم 5 مل من الماء. حالة الراتنج مع 5 مل من 1،5 N دورية هارفارد. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أكواب من صفيحة ساخنة ووضعها في حمام بالموجات فوق الصوتية لمدة 30 دقيقة، ومن ثم السماح للالأكواب باردة وصولا الى RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم تبريد كوب ويتم غسلها والراتنج، وفتح الكأس. وضع محول طرف لرانه الحقنة، إضافة طرف ماصة. ماصة 1 مل من العينة وتحميله على الراتنج (ببطء شديد حتى لا تستنهض الهمم الراتنج). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يمر كل السائل من خلال العمود، إضافة 5 مل من 1،5 N دورية هارفارد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة في 5 مل من 1،5 N دورية هارفارد تمر عبر العمود، استبدال كوب القمامة مع نظيفة 15 مل دورق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5 مل من 0،5 N HNO 3 2.5 مل في كل مرة. في هذه المرحلة هو مزال على الزنك من الراتنج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة 5 مل من HNO 3 يمر خلال العمود، وإزالة الكأس ووضعها على طبق ساخن عند 100 درجة مئوية حتى المجففة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة عمود من صاحب عمود؛ القمامة الراتنج (استخدام الراتنج جديد لكل عينة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة العينة جافة، كرر بروتوكول مع نفس الحجم من الأحماض على عمود أصغر (100 ميكرولتر) ومن ثم وضعه على طبق ساخن حتى يجف. العينة هي الآن جاهزة للمطياف الكتلة. </li></ol> 4. مطياف الكتلة القياس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل كومبو النظائر الزنكsition على عدة إلى جانب جامع بالحث البلازما مطياف الكتلة (MC-ICP-MS). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المعلمات آلة تلخيصها في الجدول 1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أكواب فاراداي لجمع في الكتلة (م / ض) من 62 النيكل، النحاس 63، 64 الزنك، النحاس 65، 66 الزنك، الزنك 67 و 68 الزنك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير محلول يحتوي على 500 جزء في البليون الزنك في 0.1 M HNO 3 لتحليل النظائر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل حل 500 جزء في البليون من الزنك باستخدام غرفة رذاذ جنبا إلى جنب مع 100 ميكرولتر / دقيقة تفلون البخاخات. لكل عينة، قياس 30 بالاشعة (1 كتلة من 30 دورات) في الوقت الذي دمج كل التفحص 8.389 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصحيح الخلفية من خلال طرح الصفر شدة وعلى الذروة من حل فارغة (0.1 M HNO 3 حل تستخدم لإعادة بحل-العينات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الرقابة والصحيح الممكن 64 ني تدخل إسوي الضغط عن طريق قياس شدة ني الذروة 62.نفترض أن 64 ني / 62 نسبة ني أمر طبيعي (0.2548)، صحيح هذه القيمة من التحيز كتلة فعال، ومن ثم إزالة ني 64 عن كتلة 64 على النحو التالي: 64 الزنك الحقيقي = 64 الزنك قياس - 64 ني = 64 الزنك قياس - (64 ني / 62 ني) الطبيعي × 62 ني قياسها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصحيح التحيز الشامل فعال من قبل بين أقواس كل من العينات مع 500 جزء في البليون حل معيار من المعايير JMC ليون الزنك (أو معيار متاح أخرى مثل IRMM-3702). أداء بين أقواس القياسية بقسمة نسبة الزنك 66 الزنك / 64 من العينة متوسط ​​نسبة الزنك 66 الزنك / 64 من معيارين تقاس قبل وبعد العينة ناقص 1 ومضروبا 1000 (انظر المعادلة 1). الدقة الخارجية نموذجية على مستوى JMC ليون الزنك هو 0.05 permil / اتحاد المغرب العربي (2 الانحراف المعياري، 2 SD). </li></ol>

<ol><li>Marechal, C. N., Telouk, P., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+analysis+of+copper+and+zinc+isotopic+compositions+by+plasma-source+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Precise analysis of copper and zinc isotopic compositions by plasma-source mass spectrometry.</a> Chemical Geology. 156 (1), 251-273 (1999).</li>
<li>Marechal, C. N., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-exchange+fractionation+of+copper+and+zinc+isotopes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Ion-exchange fractionation of copper and zinc isotopes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 66 (9), 1499-1509 (2001).</li>
<li>Weiss, D. J., Mason, T. F. D., Zhao, F. J., Kirk, G. J. D., Coles, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+discrimination+of+zinc+in+higher+plants%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytologist%22%5BJournal%5D)">Isotopic discrimination of zinc in higher plants.</a> New Phytologist. 165 (3), 703-710 (2005).</li>
<li>Jouvin, D., Louvat, P., N, M. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotopic+fractionation%3A+why+organic+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Zinc isotopic fractionation: why organic matters.</a> Environ Sci Technol. 43 (15), 5747-5754 (2009).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+and+transport+mechanisms+of+Zn+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation and transport mechanisms of Zn in plants.</a> Chemical Geology. 267 (3-4), 125-130 (2009).</li>
<li>Moynier, F., Herzog, G., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+composition+of+zinc%2C+copper%2C+and+iron+in+lunar+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Isotopic composition of zinc, copper, and iron in lunar samples.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 70 (24), 6103-6117 (2006).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+of+zinc+in+tektites%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation of zinc in tektites.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 277 (3-4), 482-489 (2009).</li>
<li>Chen, H., Savage, P., Teng, F. Z., Helz, R., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+fractionation+during+magmatic+differentiation+and+the+isotopic+composition+of+the+bulk+Earth%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope fractionation during magmatic differentiation and the isotopic composition of the bulk Earth.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 369-370, 34-42 (2013).</li>
<li>Moeller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calibration+of+the+new+certified+materials+ERM-AE633+and+ERM-AE6447+for+copper+and+IRMM+3702+for+zinc+isotope+amount+ratio+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Geostd.+Geoan.+Res%22%5BJournal%5D)">Calibration of the new certified materials ERM-AE633 and ERM-AE6447 for copper and IRMM 3702 for zinc isotope amount ratio determination.</a> Geostd. Geoan. Res. 36 (2), 177-199 (2012).</li>
<li>Bigeleisen, J., Mayer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+equilibrium+constants+for+isotopic+exchange+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Calculation of equilibrium constants for isotopic exchange reactions.</a> J. Chem. Phys. 15, 261-267 (1947).</li>
<li>Luck, J. M., Ben Othman, D., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+and+Cu+isotopic+variations+in+chondrites+and+iron+meteorites%3A+Early+solar+nebula+reservoirs+and+parent-body+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Zn and Cu isotopic variations in chondrites and iron meteorites: Early solar nebula reservoirs and parent-body processes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 69 (22), 5351-5363 (2005).</li>
<li>Moynier, F., Dauphas, N., Podosek, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Search+for+70Zn+Anomalies+in+Meteorites%5BTitle%5D)+AND+%22Astrophys.+J%22%5BJournal%5D)">A Search for 70Zn Anomalies in Meteorites.</a> Astrophys. J. 700 (2), L92-L95 (2009).</li>
<li>Paniello, R., Day, J., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+isotope+evidence+for+the+origin+of+the+Moon%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Zn isotope evidence for the origin of the Moon.</a> Nature. 490 (7420), 376-380 (2012).</li>
<li>Pichat, S., Douchet, C., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+variations+in+deep-sea+carbonates+from+the+eastern+equatorial+Pacific+over+the+last+175+ka%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+and+Planetary+Science+Letters%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope variations in deep-sea carbonates from the eastern equatorial Pacific over the last 175 ka.</a> Earth and Planetary Science Letters. 210 (1-2), 167-178 (2003).</li>
<li>Moynier, F., Fujii, T., Shaw, A., Le Borgne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+of+natural+Zn+isotopes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous of natural Zn isotopes in mice.</a> Metallomics. 5 (6), 693-699 (2013).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bodily+variability+of+zinc+natural+isotope+abundance+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Com.+Mass.+Spec%22%5BJournal%5D)">Bodily variability of zinc natural isotope abundance in sheep.</a> Rapid Com. Mass. Spec. 24, 605-612 (2010).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+Cu%2C+Fe%2C+and+Zn+isotopic+patterns+in+organs+and+body+fluids+of+mice+and+sheep%2C+with+emphasis+on+cellular+fractionation%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Contrasting Cu, Fe, and Zn isotopic patterns in organs and body fluids of mice and sheep, with emphasis on cellular fractionation.</a> Metallomics. 5 (11), 1470-1482 (2010).</li>
<li>Urgast, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+ratio+imaging+of+rat+brain+thin+sections+from+stable+isotope+tracer+by+LA-MC-ICP-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope ratio imaging of rat brain thin sections from stable isotope tracer by LA-MC-ICP-MS.</a> Metallomics. 4, 1057-1063 (2012).</li>
<li>Marin-Carbonne, J., Rollion-Bard, C., Luais, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-situ+measurements+of+iron+isotopes+by+SIMS%3A+MC-ICP-MS+intercalibration+and+application+to+a+magnetite+crystal+from+the+Gunflint+chert%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Geol%22%5BJournal%5D)">In-situ measurements of iron isotopes by SIMS: MC-ICP-MS intercalibration and application to a magnetite crystal from the Gunflint chert.</a> Chem. Geol. 285 (1-4), 50-61 (2011).</li>
<li>Fietzke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boron+isotope+ratio+determination+in+carbonates+via+LA-MC-ICP-MS+using+soda-lime+glass+standards+as+reference+material%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anal.+Atom.+Spec%22%5BJournal%5D)">Boron isotope ratio determination in carbonates via LA-MC-ICP-MS using soda-lime glass standards as reference material.</a> J. Anal. Atom. Spec. 25, 1953-1957 (2010).</li>
</ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

يتم تقييم استنساخ القياسات من خلال التحليلات تكرارها من نفس العينات التي نفذت خلال جلسات تحليلية مختلفة. على سبيل المثال 6، ونحن قد تتكرر نفس الصخور الأرضية 7 مرات وحصلنا على النتائج المدرجة في الجدول 2. كما هو متوقع من نظرية تجزئة النظائر 10 والتي تقاس في أي مواد النظام الشمسي حتى الآن (على سبيل المثال، نيزك 13/11، 05/03 النباتات والرواسب في أعماق البحار...

قياس درجة عالية من الدقة وكان (أفضل من 100 جزء في المليون / وحدة الكتلة الذرية) الزنك تكوين نظائر مستقرة ممكنا إلا لنحو 15 عاما وذلك بفضل تطور متعددة جامع البلازما المصدر كتلة-الطيف ومنذ ذلك الحين تم تطبيق معظمها في الأرض وعلوم الكواكب. تطبيقات على المجال الطبي هي رواية ولها إمكانات قوية والمؤشرات الحيوية للأمراض التي تعديل التمثيل الغذائي من الزنك (على سبيل المثال، مرض الزهايمر). تقدم هذه الورقة طريقة لقياس بدقة عالية نسب النظائر المستقرة الطبيعية من الزنك في مختلف أجهزة الماوس. والشيء نفسه ينطبق على عينات من الإنسان. يتكون أسلوب حل الأجهزة، وتنقية المواد الكيميائية الزنك من بقية الذرات، ومن ثم تحليل نسبة النظائر على-مطياف الكتلة. جودة القياسات النظائر الزنك تعتمد على نوعية تنقية المواد الكيميائية (نقاء الزنك، وانخفاض شركات فارغةعرب كورب لكمية من الزنك الموجود في العينة، والغلة العالية الكيميائي للإجراءات)، وعلى السيطرة على التحيز فعال. هناك حاجة إلى نقاء عالية من الزنك جزء النهائي لإزالة كل التدخلات إسوي الضغط والتدخل غير إسوي الضغط الذي خلق تأثير المصفوفة. النويدات إسوي الضغط تخلق التدخلات المباشرة (على سبيل المثال، 64 ني). التدخلات غير إسوي الضغط تولد ما يسمى &quot;المصفوفة&quot; تأثير وتغير الدقة التحليلية القياسات عن طريق تغيير حالة التأين مقارنة مع مستوى الزنك النقي الذي يتم مقارنة العينات إلى 1. A منخفض فارغة (&lt;10 نانوغرام) يشير إلى أنه لا يوجد أي تلوث عينات من قبل الزنك الخارجية التي من شأنها أن التحيز تكوين النظائر قياسها. كما النظائر الزنك يمكن مجزأة خلال التبادل الأيوني اللوني 2، وجمع كل ذرات الزنك يضمن أن لا تجزئة النظائر يحدث، وهو ما يعني أنه ينبغي أن يكون الإجراء الكيميائية العائد الكامل. أخيرا، ويتم تصحيح تجزئة النظائر دور فعال خلال قياس مطياف الكتلة عبر برنامج &quot;بين أقواس القياسية&quot; الأسلوب. ولذلك، فإن الصعوبات الرئيسية للحصول على قياسات دقيقة والسيطرة على التلوث الخارجي (أي منخفضة فارغة)، مما ينتج عنه تنقية الكيميائية العائد الكامل الذي هو نظيفة من أي ذرات أو جزيئات أخرى، وتصحيح تجزئة النظائر فعال على-مطياف الكتلة. في هذه الورقة فإننا سوف تصف بروتوكول التحليلي لدينا لفصل الزنك من أجهزة الماوس وكذلك القياسات مطياف الكتلة. ويتم استخراج باستخدام كمية منخفضة من الأحماض المخففة (دورية هارفارد / HNO 3 وسائل الاعلام) على أعمدة صغيرة (0.5 ميكرولتر و 0.1 ميكرولتر) من راتنج أنيون الصرف. أنه يحتوي على العائد الكامل والقياسات لها استنساخ الخارجي أفضل من 50 صفحة في الدقيقة على نسبة الزنك 66 الزنك / 64. ميزة أخرى من المنهجياتالتطوير التنظيمي هو أنه سريع جدا. ولذلك هو الأسلوب تتكيف بشكل جيد للغاية لالعلوم الطبية، في أي واحد يحتاج إلى تحليل عدد كبير من العينات مقارنة مع العلوم الجيولوجية، حيث تم تطوير هذه الأساليب التحليلية.

<table><tbody><tr><td>متعددة المجموعات مقترنة بالحث البلازما كتلة الطيف</td><td>الحرارية فيشر</td><td></td><td></td></tr><tr><td>أنيون تبادل راتنج AG1 X8 200-400</td><td>Bio-Rad</td><td>140-1443-MSDS</td><td></td></tr><tr><td>أكواب تفلون</td><td>Savillex & nbsp ؛</td><td>200-015-12</td><td></td></tr><tr><td>أعمدة تفلون محلية الصنع مصنوعة من التفلون</td><td></td><td></td><td></td> القابل للتقلص</tr></tbody></table>

عالية الدقة قياس الزنك النظائر تطبق على الماوس هيئات

High Precision Zinc Isotopic Measurements Applied to Mouse Organs

نقدم إجراء لقياس بدقة عالية نسب الزنك النظائر في أجهزة الماوس. يتكون الزنك من 5 نظائر مستقرة (64 الزنك، الزنك 66، 67 الزنك، الزنك 68 و 70 الزنك) والتي مجزأة بشكل طبيعي بين أجهزة الماوس. وتبين لنا أولا كيفية حل الأجهزة المختلفة من أجل تحرير ذرات الزنك. يتحقق هذه الخطوة من خلال مزيج من HNO 3 و H 2 O 2. نحن بعد ذلك تنقية ذرات الزنك من جميع العناصر الأخرى، ولا سيما من التدخلات إسوي الضغط (على سبيل المثال، ني)، من خلال أنيون تبادل اللوني في تمييع دورية هارفارد / HNO 3 متوسطة. يتم تنفيذ هذه الخطوات الأولى والثانية في مختبر نظيفة استخدام المواد الكيميائية عالية النقاء. وأخيرا، يتم قياس نسب النظائر باستخدام متعدد جامع إضافة بالحث-البلازما كتلة-مطياف، في دقة منخفضة. يتم حقن العينات باستخدام غرفة الرش وتجزئة النظائر الناجمة عن-مطياف الكتلة هو correcتيد بمقارنة نسبة العينات إلى نسبة معيار (تقنية أقواس القياسية). ينتج هذا الإجراء نموذجي كامل نسبة النظائر مع 50 جزء في المليون (2 SD) التكاثر.

في 1.5 N دورية هارفارد، والأنواع الرئيسية الزنك (ZnBr3-) أشكال المجمعات قوية جدا مع أنيون راتنج التبادل، في حين أن معظم عناصر أخرى لا تتفاعل مع الراتنج. ثم يتم استرداد الزنك عن طريق تغيير على المديين المتوسط ​​وHNO 3 المخفف، وتغيير أنواع جديدة من الزنك لزد 2+ التي يتم تحريرها من 6،7 الراتنج. وعادة ما يتم التعبير عن نسب النظائر كأجزاء في 1000 الانحرافات النسبية في مستوى: <p cla...

نقدم تقنية القياس بدقة عالية نسب نظائر الزنك في أعضاء الفئران.

We present a procedure to measure with high precision zinc isotope ratios in mouse organs. Zinc is composed of 5 stable isotopes (64Zn, 66Zn, 67Zn, 68Zn ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس نسب نظائر الزنك في أعضاء الفئران بدقة عالية. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إذابة الأعضاء المختلفة في الأحماض لتحرير جميع الذرات في المحلول، تليها عملية إزالة الشوائب، ثم يتم إعادة تعليق المادة المجففة في بروميد الهيدروجين. بعد ذلك، يُستخدم الكروماتوغرافيا التبادلية الأيونية لتنقية الزنك من جميع العناصر الأخرى الموجودة في العينة باستخدام عمود جاذبية مهيأ. وأخيراً، يتم استخلاص الزنك من الراتنج باستخدام حمض النتريك.تتمثل الخطوة النهائية في قياس نسب نظائر الزنك باستخدام مطياف الكتلة بالبلازما المقترنة حثياً متعدد التجميع. وفي نهاية المطاف، يُستخدم التركيب النظائري لتشخيص الأمراض التي تعدل توازن الزنك في الجسم من خلال قياس توزيع الاتزان لنظائر الزنك في أعضاء مختلفة. لذا، تم تطوير هذه الطريقة لتوفير رؤية متعمقة حول آليات التوزيع الطبيعي والنقل للزنك بين أعضاء الفأر.يمكن تطبيق هذه الطريقة على أي حيوان، ويمكن استخدامها في نهاية المطاف لتشخيص الأمراض التي تغير توازن الزنك بين الأعضاء، مثل مرض Alzheimer's. ابدأ هذا الإجراء بتجهيز المواد والعينة كما هو مفصل في البروتوكول النصي، مع إجراء أعمال التنقية الكيميائية داخل خزانة استرداد الغازات (fume hood) لتحضير خليط يتكون من 1 ml تقريبًا من hydrogen peroxide بتركيز 30% و1 ml تقريبًا من حمض nitric المركز. ضع العضو المراد دراسته كاملاً في بيكر من Teflon سعة 15 ml.ثم أضف الخليط إلى الكأس. اترك الكأس مفتوحاً لبضع دقائق لتجنب حدوث تطاير ناتج عن تفاعل أكسدة المادة العضوية وانطلاق ثاني أكسيد الكربون. وأخيراً، ضع الكأس على لوح تسخين عند درجة حرارة 100 °C تقريباً لمدة ساعتين أو حتى يصبح المحلول صافياً تماماً.بعد ذلك، افتح الكأس وجفف المحلول على لوح تسخين عند درجة حرارة 100 °C تقريبًا. وبمجرد جفاف العينة، أضف 1 mL من بروميد الهيدروجين إلى العينة. أغلق الكأس واتركها تذوب على لوح تسخين عند 100 °C لعدة ساعات.في هذه الأثناء، قم بتجهيز أعمدة الـ 500 microliter. أضف 500 microliters من راتنج Ag one x 8 200 400 mesh إلى العمود، ثم وضعه على حامل الأعمدة مع وجود بيكر للتخلص من النفايات أسفله. اغسل الراتنج عن طريق التبادل بين 5 milliliters من الماء بنقاوة 18.2 mega ohm centimeter و 5 milliliters من حمض النيتريك بتركيز 0.5 normal مرتين، ثم اغسله بـ 5 milliliters من الماء.أخيرًا، قم بتهيئة الراتنج باستخدام 5 mL من بروميد الهيدروجين. بعد ذلك، ارفع الكأس من على لوح التسخين وضعه في حمام موجات فوق صوتية. اترك الكأس ليبرد حتى يصل إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة تقريبًا. وبمجرد أن يبرد الكأس ويُغسل الراتنج، قم بفتح الكأس.قم بتركيب محول الرأس على المحقنة ثم أضف رأس الماصة. بعد ذلك، اسحب 1 mL من العينة وحملها على الراتنج ببطء شديد لتجنب تحريك الراتنج. وبمجرد مرور كل السائل عبر العمود، أضف 5 mL من بروميد الهيدروجين.اسمح لبروميد الهيدروجين بالمرور عبر العمود، ثم استبدل كأس النفايات بكأس نظيف سعة 15 milliliter. بعد ذلك، أضف خمسة milliliters من حمض النيتريك، بمعدل 2.5 milliliters في المرة الواحدة. في هذه المرحلة، يخرج الزنك من الراتنج.بمجرد مرور حمض النتريك عبر العمود، قم بإزالة الكأس ووضعه على لوح تسخين عند 100 درجة مئوية حتى يجف. قم بإزالة العمود من حامل العمود وتخلص من الراتنج. بمجرد جفاف العينة، كرر البروتوكول باستخدام نفس الحجم من الأحماض على عمود أصغر بسعة 100 µL ثم ضعه على لوح تسخين حتى يجف.أصبحت العينة الآن جاهزة لقياس الطيف الكتلي. قم بتحليل التركيب النظائري للزنك باستخدام مقياس طيف الكتلة ببلازما مقترنة حثياً متعدد المجمعات. قم بإعداد الجهاز باستخدام المعلمات الملخصة في البروتوكول النصي.قم بضبط أكواب فاراداي للتجميع عند نسبة الكتلة إلى الشحنة لكل من النيكل 62، والنحاس 63، والزنك 64، والنحاس 65، والزنك 66، والزنك 67، والزنك 68. بعد ذلك، قم بتحليل محلول من الزنك بتركيز 500 جزء في المليار في حمض النتريك بتركيز 0.1 مولار باستخدام غرفة رذاذ مدمجة مع مرذاذ تيفلون بمعدل تدفق 100 µL في الدقيقة. وبالنسبة لكل عينة، قم بقياس 30 مسحاً يكون زمن تكامل كل مسح فيها 8.389 ثوانٍ.قم بتصحيح الخلفية عن طريق طرح شدة الصفر عند الذروة من محلول تحكم فارغ، وصحح التداخل الإيزوباري المحتمل للنيكل 64. ومن خلال قياس شدة ذروة النيكل 62، افترض أن نسبة النيكل 64 إلى النيكل 62 هي نسبة طبيعية. قم بتصحيح هذه القيمة من انحياز الكتلة الآلي، ثم أزل النيكل 64 من الكتلة 64 كما هو موضح في البروتوكول النصي، وصحح انحياز الكتلة الآلي عن طريق إحاطة كل عينة من الجانبين بمحلول قياسي بتركيز 500 parts per billion من معيار JMC Leon Zinc الموضح.فيما يلي النتائج النموذجية التي تم الحصول عليها باستخدام هذه الطريقة، ممثلة في مخطط ثلاثي النظائر لـ Delta Zinc 68 مقابل Delta Zinc 66. وبالنسبة للأعضاء المختلفة، تقع جميع الأعضاء على خط بميل قدره 2. يوضح هذا أن التجزئة النظيرية تعتمد على الكتلة، وأن أعضاء الفئران متمايزة نظيرياً.ومن المثير للاهتمام أن خلايا الدم الحمراء والعظام تكون غنية بنظير الزنك 66 (delta Zinc 66) عند مقارنتها بالمصل والدماغ والكبد. ويمكن تفسير هذا التجزئة بشكل جيد من خلال توزيع الاتزان للنظائر بين بيئات الترابط المختلفة للزنك في الأعضاء المختلفة. بعد مشاهدة الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية الحصول على قياسات نظيرية عالية الدقة للزنك في أعضاء الفئران.لا تنسَ أن الصعوبة الرئيسية تكمن في تجنب تلوث عينتك بالزنك الخارجي، ومن الضروري للغاية العمل في مختبر نظيف واستخدام مواد كيميائية عالية النقاء.

high-precision-zinc-isotopic-measurements-applied-to-mouse-organs

Research

JoVE Journal

Chemistry

الكيمياء

تتميز &lt; p class = 'jove_content'&gt; ورم خبيث في سرطان المبيض بالعديد من الآفات المنتشرة داخل الصفاق ، بحيث يكون القياس الكمي البصري الدقيق لعبء الورم أمرا صعبا.  نصف هنا طريقة للقياس الكمي في الموقع وخارج الجسم الحي لعبء الورم النقيلي باستخدام الخلايا السرطانية المسماة بالبروتين الفلوري الأحمر (RFP) والتصوير البصري.

الكميات من البينية البريتوني ورم خبيث سرطان المبيض

هنا ، نصف بروتوكولا للوضع الإشعاعي والاختبار في الجسم الحي لمشتقات مخلب التيترازين ثلاثي الأبعاد 99mTC (I) للاستهداف المسبق والكيمياء المتعامدة الحيوية.

إعداد وتقييم<sup&gt; 99m</sup&gt; ح المسمى ثلاثي الشعب يخلب لما قبل استهداف عن طريق Bioorthogonal الكيمياء

ويصف هذا البروتوكول استخدام محلل تكوين الهيئة والأيضية نظام الرصد الحيوانية لتحديد خصائص تكوين الجسم والمعلمات الأيضي في الفئران. يتم استخدام نموذج السمنة الناجمة عن التغذية بالدهون كمثال لتطبيق هذه التقنيات.

تكوين الجسم والتحليل الأيضي حبس في الفئران بنك الاحتياطي الفيدرالي الدهون عالية

ويشيع استخدام خطوط الخلايا الاساسيه أو القائمة المستزرعة لمعالجه المسائل البيولوجية والميكانيكية الاساسيه كنهج اولي قبل استخدام النماذج الحيوانية. يصف هذا البروتوكول كيفيه اعداد مقتطفات الخلايا الكاملة والكسور تحت الخلوية لدراسات الزنك (Zn) والعناصر النزره الأخرى مع الطيفية الامتصاص الذري.

الطيفية الامتصاص الذري لقياس برك الزنك داخل خلايا الثدييات

والهدف من البروتوكول هو إظهار التقنيات المستخدمة للتحقيق في الأمراض الفيروسية عن طريق عزل وقياس فيروس زيكا، من أجهزة متعددة في فأر ة بعد العدوى.

عزل وتقدير كمية لفيروس زيكا من أجهزة متعددة في الماوس

نحن نقدم طريقة قوية وفعالة من حيث التكلفة ومرنة لقياس التغيرات في عدد الكبد وploidy النووية داخل عينات الأنسجة الثابتة / cryopreserved التي لا تتطلب قياس خلايا التدفق. نهجنا يوفر توقيع عينة قوية على نطاق واسع من علم خلايا الكبد مثالية لتتبع تطور إصابات الكبد والمرض.

طريقة عالية الإنتاجية في الموقع لتقدير البليدي النووي الكبدي في الفئران

الراتنج المزدوج الصب التصوير المقطعي المصغر، أو DUCT، تمكن التصور والرقمنة، وتجزئة نظامين أنبوبي في وقت واحد لتسهيل تحليل 3D من بنية الجهاز. DUCT يجمع بين حقن الجسم الحي السابق من اثنين من راتنجات المشعة تليها المسح المقطعي المحوسبة الدقيقة وتجزئة البيانات الطبوغرافية.

DUCT: الصب الراتنج المزدوج تليها التصوير المقطعي المحوسبة الدقيقة لتحليل الكبد 3D

توضح هذه المقالة كيفية تحضير وإدارة الحديد النظيري غير المشع المرتبط بالترانسفيرين لدراسات نقل الحديد في حمل الفئران. كما تم وصف نهج قياس الحديد النظيري في مقصورات الجنين.

تحديد كمية نقل الحديد عبر مشيمة الفأر في الجسم الحي باستخدام نظائر الحديد غير المشعة

تفصل هذه الورقة منهجية وضع العلامات الإشعاعية على جسم مضاد أحادي النسيلة مضاد ل CD19 خاص بالإنسان وكيفية استخدامه لتحديد كمية الخلايا البائية في الجهاز العصبي المركزي والأنسجة المحيطية لنموذج فأر من التصلب المتعدد باستخدام التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني في الجسم الحي ، وعد جاما خارج الجسم الحي ، ونهج التصوير الشعاعي الذاتي.

تصوير خلايا CD19 + B في نموذج فأر تجريبي لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي باستخدام التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني

تصف هذه الورقة التخليق الإشعاعي والصياغة ومراقبة الجودة لمسبار جديد ذو علامات إشعاعية (أي 68جسم نانوي مسمى Ga NM-02) ، واستخدامه لتصوير الصغيرة PET / CT في نموذج xenograft.

التخليق الإشعاعي ومراقبة الجودة والتصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني للحيوانات الصغيرة ل 68جزيئا نانو مسمى Ga

اكتشف تقنية قياس نسب نظائر الزنك بدقة عالية في أعضاء الفئران باستخدام كروماتوغرافيا التبادل الأيوني ومطياف الكتلة. تساعد هذه الطريقة في فهم آليات نقل الزنك وتشخيص الأمراض المتعلقة باختلال توازنه.

عالية الدقة قياس الزنك النظائر تطبق على الماوس هيئات

استكشف المزيد من الفيديوهات