العصبية آخر نشر في إعداد الحصين تكشفت مع اختراق الصغرى، والقطب صفيف

الهدف العام من هذا الإجراء هو إدخال عملية كشف الحصين القوارض ووضع مستحضر الأنسجة المسطحة على مجموعة الأقطاب الكهربائية الدقيقة المخترقة للتسجيل. يتم تحقيق ذلك عن طريق عزل الحصين الفأر أولا من نصف دماغه.

الخطوة الثانية هي الكشف عن الهيكل المنحني للحصين باستخدام أدوات مخصصة. بعد ذلك ، يتم نقل الحصين المكشوف إلى غرفة التسجيل ووضعه على مصفوفة التسجيل. الخطوة الأخيرة هي إزالة الحصين المكشوف من المصفوفة بعد التجربة.

في النهاية ، يتم استخدام طريقة رسم خرائط التطبيع الفردية في تحليل البيانات لإظهار انتشار النشاط العصبي المسجل بواسطة مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة المخترقة حسنا ، الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح لنا بتسجيل النشاط العصبي في اتجاهين عرضي وطولي. من أجل رؤية الانتشار الفعلي للنشاط العصبي ، فأنت بحاجة إلى حصين سليم ، وقم بفك الجرار الانبعاج واستلقها بشكل مسطح في غرفة التسجيل ، وسيحدث الانتشار بعد ذلك في الاتجاهين المستعرضين والطوليين.

وتمكنا بعد ذلك من معرفة سرعة تكاثر الأنسجة. كنا من النشاط في الاتجاهين ، وتمكنا من دراسة آليات الانتشار ، على وجه الخصوص ، الآليات غير المتشابكة. تمكنا من رؤية النشاط ينتشر مع هذا الإرسال المشبكي مع تقاطعات الفجوة هذه ، وبسبب السرعة ، نعلم أنه ليس انتشارا.

لذا نحاول الآن إيجاد الآليات الفعلية لهذا الانتشار. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه التقنية بسبب الإجراءات الصعبة المتمثلة في فتح الحصين ووضع مستحضر الأنسجة المسطحة على مجموعة الأقطاب الكهربائية الدقيقة المخترقة هذه دون الإضرار بالأنسجة أو المصفوفة. لبدء هذا الإجراء ، ضع رأس الفأر في السكروز المؤكسج المثلج.

يستخدم السائل الدماغي النخاعي زوجا من المقصات الدقيقة لإزالة جلد الجمجمة. بعد ذلك ، قم بقص الجمجمة على طول خط الوسط والطرفين بالقرب من الفص الصدغي. ثم قشر الجمجمة المقطوعة باتجاه جانبي الرأس.

من أجل فضح الدماغ ، قم بإزالة الدماغ بعناية من الجمجمة باستخدام الملعقة. بعد ذلك ، ضع الدماغ في مرحلة جراحية مثلجة مغطاة بورق ترشيح مبلل. قم بإزالة المخيخ بشفرة مبردة بالثلج.

بعد ذلك افصل نصفي الكرة الأرضية عن طريق قطع خط الوسط للدماغ. ثم ضع نصفي الكرة الأرضية المنفصلين في دورق مليء بالسكروز المثلج. فقاعات السائل الدماغي النخاعي مع 95٪ أكسجين ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

انقل نصف الكرة الأرضية إلى المرحلة الباردة المثلجة المغطاة بورق الترشيح. ضع مناشف ورقية عادية أو أوراق ترشيح حول الدماغ لامتصاص المحلول الإضافي. بعد ذلك ، استخدم ماصتين زجاجيتين مصقولتين للحريق لفصل القشرة عن الجزء المركزي من الدماغ من أجل فضح الحصين.

بعد ذلك ، ضع قطرتين إلى ثلاث قطرات من السائل الدماغي النخاعي على الأنسجة ، وقم بإزالة المحلول الإضافي. قطع الوصلات مع القشرة عند طرفي الحصين. ثم قم بتشريح الحصين من الدماغ باستخدام أدوات الزجاج المصقول بالنار.

بعد ذلك ، افصل الحصين بالكامل بحيث يكون جانبه متجها لأعلى وتوجيه التلم الحصين لأسفل ، ضع سريعا قطرتين إلى ثلاث قطرات من السائل الدماغي النخاعي المثلج على الأنسجة مرة أخرى ، وقم بإزالة المحلول الإضافي حوله. ثم استخدم أداة الزجاج المصقول بالنار لقلب الحصين بالكامل. لفضح التلم ، استخدم شفرة مثلجة لتقليم الأطراف الحاجزية والزمنية للحصين.

إذا لزم الأمر ، أدخل إبرة زجاجية مخصصة في التلم وقم بقص مسار الألياف من DG إلى ca. ثم استخدم حلقة سلكية معدنية لسحب DG وفتح الحصين. عادة ما تستغرق عملية الجراحة بأكملها لمدة دقيقتين تقريبا.

ضع قطرتين إلى ثلاث قطرات أخرى من السكروز المثلج السائل الدماغي النخاعي على الأنسجة وقم بإزالة المحلول الإضافي المحيط به. ثم قم بقص حواف الحصين المكشوفة بشفرة مثلجة. انقل المستحضر إلى غرفة الاسترداد المملوءة بالسائل الدماغي النخاعي العادي والمغطى ب 95٪ أكسجين ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة قبل نقله إلى غرفة التسجيل.

في هذا الإجراء ، املأ زجاجة واحدة بالسائل الدماغي النخاعي العادي وزجاجة أخرى بأربع فقاعات AP A CSF. المحاليل التي تحتوي على 95٪ أكسجين ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون من بداية التجارب. استخدم موصل ثلاثي الصمامات للتحكم في الحل الذي سيتم تحديده أثناء التجربة.

بعد ذلك ، قم بتوصيل أنبوب مفرغ بمخرج الغرفة. لإزالة المحلول في حاوية الغبار ، قم بتسخين خط الأنابيب قبل تسليم المحلول إلى غرفة التسجيل واحتفظ به عند درجة حرارة يتم التحكم فيها بزاوية 35 درجة مئوية. بعد إغلاق مدخل ومخرج غرفة التسجيل ، استخدم قطارة ماصة زجاجية مخصصة لنقل الحصين المكشوف إلى غرفة التسجيل.

تحت موضع المجهر ، يتم فتح الحصين مع جانبه الأفيا متجها لأسفل ، ومنطقة ثلاثية تشير بعيدا ، وحقل واحد يشير إلى الباحث بعناية ، ويستنشق المحلول في الغرفة باستخدام ماصة مفرغة من حافة غرفة التسجيل حتى تجف الغرفة وتقع الأنسجة على المصفوفة. ثم ضع بعناية مرساة أنسجة مخصصة أعلى الأنسجة لتثبيت الحصين المكشوف على المصفوفة. أعد ملء غرفة التسجيل ببضع قطرات من المحلول.

افتح المدخل والمخرج تدريجيا لضبط معدل التدفق إلى حوالي قطرتين في الثانية في غرفة الرحلة الوريدية. احتضان الأنسجة في غرفة التسجيل باستخدام السائل الدماغي النخاعي العادي لمدة دقيقة واحدة تقريبا. ثم قم بتبديل الحلول.

قم بتطبيقه على أربعة نقاط وصول مذابة A CSF واضبط معدل التدفق بشكل صحيح. احتضان الأنسجة في أربعة نقاط وصول مذابة A السائل الدماغي النخاعي لمدة خمس إلى 10 دقائق قبل التسجيل. لإزالة الأنسجة من PMEA، تحكم في مرساة الأنسجة بواسطة مناور دقيق وارفع المرساة تدريجيا من غرفة التسجيل.

قم بإيقاف تشغيل كل من المدخل والمخرج لإيقاف التدفق. في غرفة التسجيل ، استخدم فرشاة رسم صغيرة لرفع زاوية المنديل. إذا لم يكن النسيج يطفو في المحلول ، فاستخدم الأنبوب المفرغ لتجفيف الغرفة بعناية مع بقاء الأنسجة على المصفوفة.

ثم افتح المدخل بعناية لإعادة ملء الغرفة تدريجيا وإغلاق المدخل لإيقاف التدفق. عندما تمتلئ غرفة التسجيل ، استخدم فرشاة الرسم الصغيرة لرفع زاوية المنديل. مرة أخرى. إذا كان النسيج يطفو في المحلول ، فاستخدم الأنبوب المفرغ لامتصاص الأنسجة بعيدا.

افتح التدفق عند المدخل والفراغ عند المخرج. اغسل النظام بالماء المقطر وجففه. هذا مثال على النشاط التلقائي الناجم عن 100 ميكرومولار أربعة AP A CSF المسجلة من أحد الأقطاب الكهربائية الدقيقة الموجودة في المنطقة التغصنية القاعدية بنسبة إشارة إلى ضوضاء تبلغ 34.9 ديسيبل.

وهنا الأنشطة الموسعة في المستطيل الأحمر. هذه هي البيانات الأولية من قطب كهربائي صغير آخر يقع بالقرب من سوماتا مع نسبة إشارة إلى ضوضاء تبلغ 27.2 ديسيبل معروضة. فيما يلي مثال آخر على تسجيل تم الحصول عليه من قطب كهربائي موجود داخل الطبقة الجسدية.

في هذا المثال ، تبلغ نسبة الإشارة إلى الضوضاء 18.53 ديسيبل ، وهنا ضوضاء خط الأساس المسجلة من قطب كهربائي صغير. عادة ما يكون لخط الأساس قيمة ذروة إلى ذروة من 150 إلى 200 ميكروفولت ، وتكون مقاومة قطب كهربائي واحد حوالي واحد إلى اثنين من ميجا أوم. يوضح هذا الفيديو الانتشار العصبي المسجل باستخدام المصفوفة ثم معالجته باستخدام طريقة التطبيع الفردية.

في تحليل البيانات ، يستمر الانتشار الكامل عبر الأنسجة بأكملها حوالي 100 مللي ثانية بعد هذا الإجراء. يمكن أيضا إجراء طرق أخرى مثل التصوير العصبي في الحصين في الجسم الحضيضي من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل حركة البؤر العصبية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية فتح الحصين في مكانه ، وإعداد الأنسجة المسطحة على مجموعة المحاضرات الصغيرة.