ورم الابتدائي وMEF عزل الخلايا لدراسة الرئة الانبثاث

الهدف العام من هذا الإجراء هو دراسة عدم تكوين ورم سرطان الثدي في الفئران. أولا ، يتم عرض تحضير الخلايا الأولية من أورام ثدي الفئران. بعد ذلك ، يتم تقديم كيفية استخراج رئة الفأر لتصور ورم خبيث في الرئة.

أخيرا ، يظهر تحضير الخلايا الليفية الجنينية للفأر من أجنة الفئران في النهاية ، حيث توضح هذه الطرق أن الفئران المعدلة وراثيا لفيروس ورم الثدي في الفأر يمكن استخدام مستضد T الأوسط للتحقيق في عدم تكوين ورم سرطان الثدي. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لسرطان الثدي ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على التحقيق في الأورام الصلبة الأخرى. يعد العرض البصري لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية ، حيث من المهم عزل الأورام فقط الكثير من الأنسجة الأخرى أثناء خطوات علاج الورم ابدأ باستخدام المقص لفتح الجلد من فتحة مجرى البول إلى عنق الفأر فيروس ورم الثدي ورم الورم الأوسط T المستضد الفأر المعدل وراثيا.

ثم قم بتثبيت الجلد وعزل ورم الثدي الثديي. اغسل الورم في الموقع باستخدام PBS البارد وضع الورم في صفيحة زراعة أنسجة معقمة بطول 10 سم. بعد ذلك ، انقل اللوحة إلى غطاء تدفق رقائقي معقم واستخدم شفرة حلاقة معقمة ومقص لتقطيع الورم إلى قطع ملليمتر مكعب واحد.

احتضن القطع بالكولاجيناز على كرسي هزاز عند 37 درجة مئوية. بعد ساعتين ، قم بتدوير تعليق أنسجة الورم الناتج. اغسل الحبيبات ثلاث مرات أخرى في PBS Resus ، مع تعليق الحبيبات في ملليلترين من tripsin EDTA بعد الغسيل الأخير لمدة خمس دقائق عند 37 درجة مئوية مع التحور.

ثم اغسل الخلايا ثلاث مرات أخرى وأعد تعليقها في وسط النمو الطبيعي. أخيرا ، احتضان الخلايا على طبق زراعة أنسجة يبلغ طوله 10 سم ، وقم بتغيير الوسائط كل يوم خلال الأيام الثلاثة التالية حتى يتم الحصول على رقم الخلية المطلوب. قبل استخراج الرئة ، قم بإزالة الكبد والحجاب الحاجز وإزالة الأضلاع.

ثم افتح الجزء العلوي من القصبة الهوائية ، بالقرب من الوريد الوداجي واستخدم قسطرة لحقن العامل المناسب من خلال القصبة الهوائية لملء الرئتين ، وإزالة الرئتين ، ثم في حالة استخدام Z fix ، قم بتضمين الأنسجة في البارافين. إذا كنت تستخدم الحبر الهندي تحتجز محلول الأنسجة لمدة خمس دقائق ، فستظهر أنسجة الرئة الطبيعية باللون الأسود بينما ستظهر عقيدات الورم. يصنف الأبيض أي عقيدات ورمية يتم تصورها في المواقع الثانوية التي يزيد قطرها عن أو يساوي 0.5 ملم على أنها نقائل لتوليد الخلايا الليفية الجنينية للفأر.

أولا ، افتح جلد الفأر الحامل من فتحة مجرى البول إلى الرقبة كما هو موضح للتو مع الحرص على عدم إزعاج الأجنة. بعد ذلك ، قم بإزالة قرون الرحم وشطفها في PBS معقمة. ثم افصل الأجنة بعناية عن المشيمة وواحدة تلو الأخرى.

ضع كل جنين في طبق استزراع 10 سم يحتوي على PBS مثلج. بعد إزالة الرأس والكبد والأمعاء ، اشطف الجزء المتبقي من الجنين في بئر واحد من صفيحة زراعة أنسجة 12 بئر تحتوي على PBS ، قم بتقطيع الجسم إلى قطع ملليمتر مكعب واحد. انقله إلى بئر آخر يحتوي على خمسة ملليلتر من التريبسين في EDTA واحتضان الأنسجة عند 37 درجة مئوية.

بعد خمس دقائق ، أضف ملليلتر واحد من FBS لتعطيل عملية الهضم. ثم قم بتدوير تعليق الخلية الناتج وأعد تعليق الحبيبات. في مليلتر واحد من DMEM الدافئ ، انقل الخلايا أخيرا إلى طبق استزراع 10 سم يحتوي على 10 مل من DMEM المكمل بالمضادات الحيوية وزرع الخلايا حتى يتم الحصول على رقم الخلية المطلوب.

مرحلة تطور الورم التي يتم فيها التضحية بالحيوان على الدراسة الخاصة وإرشادات I-A-C-U-C. على سبيل المثال ، تم التضحية بهذا الفأر FVB البالغ من العمر 100 يوم مع فيروس ورم الثدي الفأر الورم الأوسط T المستضد في ثلاثة أشهر بعد عزل الورم كما أظهر للتو ثدي الفأر. تم الحصول على الخلايا السرطانية الأولية.

نظرا لأن العديد من الجينات تتوسط ورم خبيث لسرطان الثدي إلى الرئة ، فقد تم استخراج الرئتين أيضا كما هو موضح للتو لدراسة العملية النقيلية. ثم تم نفخ الرئتين بإصلاح Z وتلطيخهما بحبر الهند لتصور عقيدات الورم. هنا ، يتم عرض الخلايا الليفية الجنينية للفأر ، المعزولة من أجنة الفئران من سلالة FVB.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك معرفة جيدة بكيفية عزل الخلايا السرطانية الأولية للفأر والخلايا الليفية الجنينية للفأر ، واستخراج رئة الفأر. لا تنس أن العمل باستخدام فلور ISO يمكن أن يكون خطيرا للغاية في ظل هذه الاحتياطات ، مثل العمل باستخدام غطاء F كيميائي يجب أن يهاجم دائما أثناء تنفيذ هذا الإجراء.