اختبار لرائحة التمييز والتعويد في الفئران

الهدف العام من هذا الإجراء هو توفير طريقة لبحث قدرة الفئران على اكتشاف الروائح الجديدة والاجتماعية، والتعود عليها، ثم فقدان هذا التعود. يتم تحقيق ذلك أولاً من خلال تحضير سلسلة من الروائح الجديدة غير الاجتماعية، مثل مستخلصات الفواكه والمكسرات، وروائح اجتماعية، مثل فرش القفص. وتتمثل الخطوة الثانية في تقديم هذه الروائح للفئران، بدءاً بثلاث روائح جديدة، تليها رائحتان اجتماعيتان مختلفتان.

خلال كل تجربة، يتم تقييم وتسجيل سلوك الشم لدى الفئران. وفي النهاية، يُستخدم اختبار الرائحة والتمييز والتعود للشم لدى الفئران لإثبات قدرة الحيوان على الاستجابة لرائحة جديدة، والتعود عليها، ثم إظهار القدرة على فقدان التعود تجاه هذه الرائحة عند تقديمه لرائحة جديدة أخرى أو رائحة اجتماعية. ويمكن استخدام هذه الطريقة للإجابة على أسئلة جوهرية في مجال العلوم العصبية، مثل ما إذا كان عدم استجابة الحيوان لحيوان جديد أو محفز جديد يعود إلى عدم قدرة ذلك الحيوان على اكتشاف الرائحة.

ابدأ في تحضير الروائح غير الاجتماعية من خلال ارتداء القفازات وملء ثلاثة أنابيب مخروطية سعة 15 milliliter بـ 10 milliliter من الماء. استخدم الماصة لنقل 100 microliters من مستخلص اللوز إلى الأنبوب الأول، و 100 microliters من مستخلص الموز إلى الأنبوب الثاني، واترك الأنبوب الثالث يحتوي على الماء فقط لاستخدامه كمجموعة ضابطة. بعد ذلك، احصل على قفصين مختلفين من الفئران لم يتم تنظيفهما لمدة ثلاثة أيام على الأقل، ويحتويان على أعداد متساوية من الفئران من نفس جنس موضوعات الاختبار.

استخدم مسحة قطنية لمسح الجزء السفلي من القفص المتسخ بحركة متعرجة. قم بنفض أي مواد فرش ملتصقة بالمسحة، ثم ضعها بحيث يكون الجانب المستخدم للأسفل داخل جرة زجاجية كبيرة ذات غطاء محكم الإغلاق. كرر هذه العملية حتى يتم الحصول على ثلاث مسحات من كلا القفصين لكل فأر سيخضع للاختبار.

تُحفظ البرطمانات في درجة حرارة الغرفة، وتُستخدم المسحات في غضون أربع إلى ست ساعات. وللحفاظ على رائحة قوية ومتسقة، تُنقل أقفاص عينات الرائحة إلى غرفة خارج منطقة الاختبار في يوم التجربة. يجب عدم استخدام العطور أو المستحضرات ذات الرائحة، وتجنب تناول أي شيء ذو رائحة قوية.

ضع الروائح الاجتماعية وغير الاجتماعية المُحضرة في غرفة الاختبار، إلى جانب شريط لاصق مخبري، ومسحات قطنية نظيفة، وزجاجة نفايات بغطاء، ومؤقتين زمنيين مباشرة قبل بدء إجراء الاختبار. ارتدِ قفازات نظيفة وقم بوزن الفأر الأول. بعد ذلك، انقل الفأر إلى قفص نظيف مزود بغطاء سلكي وبدون زجاجة ماء.

ضع القفص في منطقة خالية من الروائح أو الضوضاء غير المعتادة، واترك الفأر يتأقلم مع القفص الجديد لمدة 45 دقيقة. في نهاية فترة التأقلم، انقل الفأر داخل قفصه إلى منطقة الاختبار وابدأ في تأقلم فأر آخر. ضع قفص الفأر المتأقلم على الطاولة بارتفاع مريح للمشاهدة أثناء الجلوس.

بعد ذلك، قم بتحضير إحدى الروائح وفقاً للترتيب الموضح في البروتوكول النصي للروائح غير الاجتماعية بوضع 100 µL من العطر على طرف مسحة جديدة، وذلك مباشرة قبل الاستخدام. أما بالنسبة للروائح الاجتماعية، فقم بإزالة واستخدام إحدى المسحات المحضرة مسبقاً من الجرار الخاصة بها.

ارفع الغطاء السلكي للقفص وأدخل الطرف غير المعطر من مسحة القطن في فتحة زجاجة الماء من الجهة السفلية للغطاء السلكي. تجنب ملامسة طرف القطن لأي شيء، بما في ذلك الأصابع، لتفادي التلوث بالروائح. عندما يتبقى حوالي بوصة واحدة من مسحة الرائحة داخل القفص، قم بتثبيت الطرف الخشبي للمسحة في الجهة السفلية من القفص باستخدام شريط لاصق مختبري.

ثم أنزل الغطاء برفق مرة أخرى فوق القفص. ولتجنب إزعاج الفأر الخاضع للاختبار، ابدأ في حساب الوقت فوراً لمدة دقيقتين. وباستخدام المؤقت الأول مع ساعة الإيقاف الثانية، سجل الوقت التراكمي الذي يقضيه الفأر الخاضع للاختبار في شم الرائحة.

يُعرَّف الشم النشط بأنه توجيه الفأر لأنفه نحو مسحة القطن عندما يكون على مسافة سنتيمترين أو أقل من المسحة. عند انتهاء التجربة، ارفع الغطاء السلكي وأخرج مسحة القطن بعناية عن طريق سحبها للأسفل من خلال الجزء السفلي من الغطاء. ولتجنب ملامسة الغطاء للطرف المحتوي على الرائحة من المسحة، ضع المسحة المستخدمة في زجاجة النفايات مع ترك الفأر يستريح لمدة دقيقة واحدة، ثم قم بتجهيز مسحة المانح التالية.

قدم كل رائحة ثلاث مرات متتالية لمدة دقيقتين. وعند اكتمال جميع التجارب، أفرغ زجاجة النفايات التي تحتوي على مسحات القطن المستخدمة في سلة المهملات خارج غرفة الاختبار، ثم أعد الفأر إلى قفصه الأصلي. تم تقديم كل مادة عطرية أولاً للفئران من سلالة C 57 black six J من خلال تقديمات متتالية لكل رائحة.

قضت الفئران وقتاً أقل في استقصاء الرائحة التي تشير إلى السكن. ويمكن ملاحظة نمط السكن والتمييز ذاته مع الروائح الاجتماعية كما هو الحال مع الروائح غير الاجتماعية. ومع ذلك، قضت الفئران وقتاً أطول في استقصاء الروائح الاجتماعية.

عندما عُرِضت الروائح غير الاجتماعية ذاتها على ذكر من سلالة FVB ذات الخلفية المختلطة، لوحظ نمط مماثل من التعود. فقد قوبلت كل رائحة جديدة يتم تقديمها بزيادة في الشم النشط، والذي انخفض مع كل عرض لنفس الرائحة. ومع ذلك، أظهرت فئران FVB نمطاً مختلفاً مع الروائح الاجتماعية، حيث لم يحدث انخفاض ملحوظ في الوقت الذي استغرقه الشم مع التعرض المتكرر.

تشير البيانات إلى أن الفئران لا تعتاد على العرض المتكرر لرائحتين اجتماعيتين. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية اختبار قدرة الفأر على اكتشاف رائحة جديدة أو اجتماعية، والتعود على تلك الرائحة، ثم إلغاء التعود على تلك الرائحة عند تقديم رائحة جديدة.