باستخدام مخطط كهربية لتقييم وظيفة في القوارض الشبكية وتأثيرات واقية من بعيد الاطراف الدماغية شروط مسبقة

الهدف العام من هذا الإجراء هو اختبار الوظيفة البصرية في الجرذان السليمة، وتلك المصابة بإصابة ضوئية، والجرذان التي خضعت للتهيئة مسبقاً بنقص تروية بعيد ثم إصابتها بضياع ضوئي، وذلك باستخدام تخطيط كهربية الشبكية (ERG)، وبالتالي إثبات التأثيرات الحمائية لنقص تروية الطرف البعيد على الشبكية. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تكييف الجرذان على الظلام لمدة 12 ساعة. وتتمثل الخطوة الثانية في تسجيل خط الأساس لتخطيط كهربية الشبكية المتكيف مع الظلام باستخدام محفزات ضوئية من نوع LED ومضخم رقمي.

بعد ذلك، يتم تعريض الجرذان لإجهاد شبكي عن طريق تعريضها لضوء مستمر ساطع. وتتمثل الخطوة النهائية في مقارنة تسجيلات تخطيط كهربائية الشبكية (ERG) للجرذان التي تعرضت لتلف ضوئي وتلك التي خضعت لتهيئة مسبقة عن طريق نقص تروية الطرف البعيد، وقياس استجابات المستقبلات الضوئية كما تظهر في الموجة A واستجابات الشبكية الداخلية كما تظهر في الموجة B. وفي النهاية، يُستخدم تخطيط كهربائية الشبكية (ERG) المتكيف مع الظلام لتقييم الوظيفة البصرية في الظروف العاتمة (scotopic).

وبذلك يمكن لهذه الطريقة أن توفر رؤى حول الحماية العصبية القائمة على نقص التروية عن بُعد. كما يمكن تطبيقها على أشكال أخرى من إصابات وأمراض الشبكية لاختبار العقاقير الدوائية، ولفرز الحيوانات التي تعاني من عيوب بصرية. لبدء هذا الإجراء، قم بتكييف الجرذ في الظلام لمدة 12 ساعة، ثم خدره عن طريق حقن خليط ketamine xylazine.

بمجرد أن يصبح الحيوان غائباً عن الوعي، تحقق من عمق التخدير عن طريق قرص قدمه قليلاً للتأكد من غياب الاستجابة الانعكاسية. بعد ذلك، ضع قطرة من atropin وقطرة من prox methane على القرنية. قص خيطاً أسود بطول 10 centimeters.

بعد ذلك، اصنع عروة بالخيط ومررها فوق خط استواء العين، بحيث تكون مشدودة قليلاً لسحب مقلة العين إلى الأمام قليلاً وإبقاء القرنية خالية من الجفن. بعد ذلك، ضع قطرات كارمر (carmer) في القرنيات. ضع الجرذ على الفرشة الماصة فوق المنصة المسخنة، مع وضع رأسه في فتحة الغانزفيلد (ganzfeld).

بعد ذلك، أدخل مسبار درجة الحرارة الداخلي في المستقيم لضمان الحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 °C، وثبّت مسبار درجة الحرارة في موضعه عن طريق لصق سلكه بذيل الجرذ. بعد ذلك، أدخل القطب المرجعي تحت الجلد في الطرف الخلفي. ضع القطب السالب بإحكام في الفم لمنع القطب من الانزلاق خارج الفم.

ثبّت سلك التوصيل على سطح مستقر. بعد ذلك، ضع القطب الموجب فوق مركز القرنية وتأكد من ملامسته للقرنية برفق باستخدام ملقط ميكروميتر (micromanipulator). وبمجرد استقرار الأقطاب في مكانها، غطِّ تجهيزات الثقب، بما في ذلك جهاز الجانزفيلد (ganzfeld) والحيوان، بمادة معتمة للحفاظ على التكيف مع الظلام.

في برنامج الاستحواذ، اضبط معدل أخذ العينات على 2 kHz مع تحديد 5 ms لأخذ عينات ما قبل الجمع، وزمن جمع يتراوح من 100 إلى 1000 ms. بعد ذلك، اضبط مرشحات تمرير النطاق على 1 إلى 1000 Hz، وتأكد من تفعيل أخذ العينات لفترة قدرها 100 ms تلي الومضة.

الآن، تحقق من خط الأساس للتسجيل. يجب أن يكون خالياً من الضوضاء الخارجية، ولكن يجب أن يظهر ضوضاء المضخم والتذبذب التنفسي. بعد ذلك، قم بإجراء ومضة اختبار.

هذا شكل موجي نموذجي لتخطيط كهربائية الشبكية (ERG) استجابةً للوميض الاختبارِي. عند الانتهاء، اترك الحيوان يتكيف مجدداً مع الظلام لمدة 10 دقائق، ثم تحقق مرة أخرى من الخط القاعدي لضمان استقرار الإشارة.

بعد ذلك، ابدأ التسجيل. وفي نهاية جلسة التسجيل، تحقق من استقرار درجة حرارة جسم الحيوان. قم بإزالة الأقطاب الكهربائية، ثم أعد وضع بوليمر الكارمر على القرنيات. بعد ذلك، اترك الحيوان ليتعافى على وسادة حرارية حتى يستعيد قدرته الكاملة على الحركة والنشاط قبل إعادته إلى مسكن الحيوانات.

يوضح هذا الشكل قياس موجة a وموجة B من تخطيط كهربائية الشبكية (ERG) للتكيف المظلم. تم تسجيل المخطط الموضح هنا من قرنية عين متكيفة مع الظلام استجابةً لومضة ضوئية ساطعة أُعطيت في الوقت الموضح كـ T zero. يتم قياس سعة الموجة a من الخط القاعدي إلى أول قاع.

يتم قياس سعة الموجة B من قاع الموجة A إلى القمة الموجبة التالية. ويقاس زمن الكمون من أثر التحفيز إلى النقطة المطلوبة في المخطط، مثل قاع الموجة A. وتزداد إشارة تخطيط كهربائية الشبكية (ERG) الخام المهيمنة مع زيادة التحفيز الضوئي.

تظهر موجة عند حوالي 0.4 logs scotopic candela seconds per meter squared، وقد استُخدم نموذج الومضة المزدوجة لفصل إشارة ERG المختلطة إلى استجابات المخاريط والعصي. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في غضون 30 دقيقة.