Name: عزل خلايا وحيدات النوى من الجهاز العصبي المركزي مع الجرذان EAE (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: تعلم عزل الخلايا وحيدات النوى من الجهاز العصبي المركزي لجرذان EAE باستخدام التروية القلبية وتدرج بيركول. تُستخدم هذه الطريقة في دراسات المناعة العصبية وتحليل الخلايا المناعية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير عميق الفئران. رذاذ مع الايثانول 70 ٪ والقيام التروية القلبية مع برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة لإزالة الخلايا من الأوعية الدموية (قطع الأذين الأيمن ويروي من خلال البطين الأيسر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المخ والحبل الشوكي ووضعه في أنبوب 50 مل تحتوي على الجليد الباردة برنامج تلفزيوني. قطع الدماغ والحبل الشوكي في مصفاة الخلية 70 ملم وضعت في طبق بتري 10 سم تحتوي على 10 مل من الجليد الباردة برنامج تلفزيوني. اضغط على كل قطعة من الجهاز من خلال مصفاة الخلية باستخدام الجزء الخلفي من المحاقن المعقمة الغواص 1 مل. جمع تعليق خلية واحدة في أنبوب 50 مل على الجليد. غسل الخلايا مصفاة مع برنامج تلفزيوني وإضافة إلى أنبوب حتى حل واضح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي لمدة 8-10 دقيقة على 390 غرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الخلايا في 20 Percoll PBS مل + 30 ٪ وتراكب على 10 مل من Percoll PBS + 70 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي في 390 غرام عن 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الدهون على رأس الأنبوب. جمع الخلايا من واجهة ويغسل مرتين مع برنامج تلفزيوني. العد. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

هذا الإجراء ، وجميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات الحية ، لا بد من استخدام الحيوانات التي وافقت عليها المؤسسة لديك ولجنة الرعاية. نوصي بأن طبيب بيطري أو فني بيطري يكون حاضرا عند تنفيذ perfusions first القلب لضمان مستوى كاف من التخدير وتعطى للحيوان قبل وأثناء الإجراء ، وأن الحيوانات لا يخضع لا لزوم لها الألم أو الضيق.

<table><tbody><tr><td>محلول PBS، تركيز 1x، معقم</td><td>كاشف</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>مصفاة خلايا، 70 um</td><td>أداة</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>كاشف</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

عزل خلايا وحيدات النوى من الجهاز العصبي المركزي مع الجرذان eae

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

يدرس ما إذا كان أحد أمراض المناعة الذاتية الموجهة إلى الجهاز العصبي المركزي (CNS) ، مثل التهاب الدماغ و النخاع الذاتية التجريبية (EAE ، 1) ، أو الاستجابة المناعية للعدوى تصيب الجهاز العصبي المركزي ، مثل شلل الأطفال ، وneuroborreliosis لايم ، أو العصبي ، غالبا ما يكون اللازمة لعزل خلايا الجهاز العصبي المركزي ، تسلل المناعي. في هذا البروتوكول عن طريق الفيديو ونحن لشرح كيفية عزل خلايا وحيدات النوى (الشركات المتعددة الجنسيات) من الجهاز العصبي المركزي من الفئران مع EAE. الخطوة الأولى من هذا الإجراء يتطلب التروية القلبية من القوارض بمحلول ملحي لضمان عدم الدم يبقى في الأوعية الدموية للجهاز العصبي المركزي لري. فإن أي زيادة تلوث الدم بشكل مصطنع عدد من الشركات المتعددة الجنسيات ، CNS تسلل واضح ، وربما يغير من تركيبة واضحة لاختراق جهاز المناعة. ثم نظهر كيفية إزالة المخ والحبل الشوكي للفئران لتفتيت لاحقة لإعداد تعليق وحيد الخلية. يتم فصل هذا التعليق على التدرج Percoll طبقتين لعزل الشركات المتعددة الجنسيات. بعد الغسيل ، وهذه الخلايا بعد ذلك جاهزة للخضوع لأية إجراءات مطلوبة. الخلايا وحيدة النواة معزولة باستخدام هذا الإجراء هي قابلة للتطبيق ويمكن استخدامها لالكهربية والتدفق الخلوي (FACS) ، أو الكيمياء الحيوية. إذا تم تنفيذ هذه التقنية يمكن تحت ظروف معقمة (باستخدام أدوات معقمة في نسيج الثقافة هود) أيضا الخلايا أن تنمو في المتوسط ​​زراعة الأنسجة. ويمكن لسكان الخلية نظرا المنقى مزيد من الإجراءات باستخدام مغناطيس أو FACS ملف.

نحن في هذا الفيديو لشرح كيفية عزل الخلايا وحيدة النواة من الجهاز العصبي المركزي من الدماغ و النخاع الذاتية مع الفئران المختبرية.

عزل خلايا وحيدات النوى من الجهاز العصبي المركزي مع الجرذان EAE

سواء كانت الدراسة تتناول مرضاً مناعياً ذاتياً يستهدف الجهاز العصبي المركزي (CNS)، مثل التهاب الدماغ والنخاع المناعي التجريبي (EAE, 1)، أو...

حسناً. مرحباً، أنا كريستين بيتون، باحثة مساعدة في مختبر جورج تشن في قسم الفسيولوجيا والفيزياء الحيوية بجامعة كاليفورنيا إيرفاين. وسأوضح لكم اليوم كيفية عزل الخلايا وحيدة النواة من الجهاز العصبي المركزي للجرذان.تتضمن هذه العملية تخدير الجرذ تخديرًا عميقًا لإجراء تروية قلبية، وذلك لضمان عدم وجود أي دم ملوث في الجهاز العص신 المركزي. عند استخراج العضو، سنقوم بإزالة الدماغ والنخاع الشوكي لتحضير معلق من الخلايا المفردة باستخدام مصفاة الخلايا، ومن ثم سنقوم بعزل الخلايا وحيدة النواة باستخدام تدرج مزدوج الطبقة من مادة percoll. لنبدأ الآن.أنا الآن مستعدة لإجراء التروية القلبية، لذا سأعرض جميع المواد التي أحتاجها لذلك. أول شيء نحتاجه هو وعاء بل (Bell jar)، وقد وضعنا هنا في الأسفل مناشف ورقية مشبعة بمخدر متطاير. يمكنك استخدام halothane أو isoflurane.الشيء التالي الذي نحتاجه هو أداة لتثبيت الجرذ وأداة أخرى لجمع الدم. لذا، لدينا هذا التجهيز المؤقت لإجراء عملية التروية للجرذان. ستستخدم إبرة قياس 21 gauge، وسنقوم بتروية محلول ملحي يتم تغذيته بالجاذبية عبر نظام تروية وريدي IV.إذا لم يكن لديك إمكانية الوصول إلى أحد هذه الأنظمة، يمكنك أيضاً ملء عدة محاقن بالمحلول الملحي وإجراء التروية يدوياً. ولكن هذه الطريقة أسهل بكثير. وما نحتاجه أيضاً هو أسطوانة محقنة سعة 10 mil وضعنا فيها مناديل Kim wipes.وسأقوم بوضع بعض من المخدر فيه لوضعه على أنف الجرذ لضمان بقائه تحت تأثير التخدير العميق أثناء الإجراء. وبالطبع، ستحتاج إلى أدوات؛ لذا لن أقوم اليوم بإجراء تعقيمي لأنني لن أضع الخلايا في المزرعة.إن جميع الأدوات التي أستخدمها ليست معقمة. ولكن بالطبع، إذا كنت ترغب في وضع خلاياك في مزرعة خلوية، فقد تود استخدام أدوات معقمة. ولأغراض هذا الفيديو، سأستخدم جرذًا نافقًا بالفعل.لذا، سأقوم بتنفيذ الإجراء ببطء لأعرضه لكم خطوة بخطوة. وبالطبع، في الإجراء الفعلي، ستحتاجون إلى جرذ تحت تأثير تخدير عميق، ولكن ليس ميتاً؛ إذ يجب أن يظل القلب ينبض.لنبدأ الآن مع هذا الجرذ. لقد وضعت الجرذ على ظهره بحيث يكون وجهه بعيدًا عني، ووضعت مناديل مبللة بمادة التريكلورو إيثيلين فوق أنفه. وأول شيء سأقوم به هو التحقق من أن الجرذ في حالة تخدير عميقة.لذا يجب عليك القيام بذلك قبل كل إجراء من هذه الإجراءات. لذا، آخذ الملقط وأقرص الجرذ، ولا يكون هناك أي رد فعل على الإطلاق. إذا حدث أي رد فعل، فيجب عليك إعادة الجرذ إلى جهاز التخدير للتأكد من تخديره بعمق.بعد ذلك، سأستخدم ethanol بتركيز 70% لنقع النصف العلوي من الجرذ. ثم سأقوم بفتح التجويف الصدري؛ لذا سأبدأ أولاً بقطع الجلد وفتحه من الجانب.بعد ذلك سأقوم بفتح التجويف نفسه. هذه الكتلة هنا هي القلب. وهنا يمكنك رؤية الأذين الأيمن.هذا هو الجزء الذي سأقوم بقصه للسماح للدم بالتدفق إلى الخارج. ومن ثم، لتروية الجسم بالكامل، أحتاج إلى إدخال الإبرة في البطين الأيسر. لذا سأقوم بإدخال الإبرة هنا تماماً.وبمجرد إدخال الإبرة، سأقوم بفتح أنبوب الوريد للسماح بتدفق المحلول الملحي، وسأتركه لمدة تتراوح من 5 إلى 10 دقائق. إذا كان التروية جيدة، ستلاحظ تغير لون النبض الأحمر والأنف الأحمر وعيون الجرذ بالطبع، مما يشير إلى خروج الدم من جسم الجرذ. وهذا يعني أن عملية التروية يجب أن تكون جيدة.إليك الجرذ بعد التروية القلبية. وكما تلاحظ، فإن أنف هذا الجرذ وأذنيه وعينيه لم تعد وردية أو حمراء، بل أصبحت بيضاء تماماً، مما يشير إلى أن التروية تمت بنجاح.لقد غادر معظم الدم أو كلّه بقع الجرذ. والآن، بعد أن تم إجراء التروية القلبية للجرذ، أحتاج إلى قطع رأسه؛ أي يجب عليّ فصل رأس الجرذ.وسأستخدم من أجل ذلك أدوات المختبر العادية. والآن سأقوم بإزالة الدماغ من الجرذ؛ لذا سأقوم بغمر كل الفراء بـ 70% ethanol فقط لتجنب تطاير الفراء في كل مكان.بعد ذلك، سأقوم بإزالة الجلد أولاً. وبما أنني لن أستخدم الدماغ في الفحص النسيجي، وسأقوم بتقطيعه إلى قطع صغيرة، فلن أكون حذرًا للغاية في إخراجه بشكل نظيف. كقطعة واحدة، سأقوم بإدخال المقص عند قاعدة الجمجمة حيث يتصل الدماغ بالنخاع الشوكي هنا تمامًا.وسأقوم بقص العظم من كل جانب، ثم سأزيل الجزء العلوي. وسأكرر هذه العملية مراراً وتكراراً. وهكذا أصبح الدماغ مكشوفاً بالكامل.وكما تلاحظون، فقد تمت عملية التروية بنجاح لأن الدماغ يبدو صافياً تماماً. ففي الحيوان غير المروي، ستجدون أن الطبقة العلوية من الدماغ مغطاة بالكامل بالشعيرات الدموية الحمراء، ولكن بما أنكم لا ترونها على الإطلاق، فهذا يعني أن التروية قد تمت بشكل جيد. والآن سأقوم بإخراج الدماغ، مع الحرص على عدم ترك البصلة الشمية، وسأضعه في أنبوب يحتوي على PBS مبرد على الثلج.والآن، دون القلق الشديد بشأن الحفاظ عليه سليماً، سأضع الدماغ في أنبوب يحتوي على PBS، وسأقوم بقطع الأعصاب البصرية، ثم باستخدام ملعقة مسطحة (spatula)، سيخرج الدماغ بسهولة تامة. والآن سأقوم بإزالة الحبل الشوكي من ذات الجرذ. وهنا أيضاً، بما أننا سنقوم بتقطيعه إلى قطع صغيرة، لن أكون حريصاً جداً على إخراجه بدقة فائقة، طالما أنني استخرجت الحبل الشوكي بالكامل.قمت أولاً بقص الجلد على طول العمود الفقري، والعمود الفقري ظاهر هنا. بعد ذلك، سأقوم بإزالة اللحم من هنا بحيث ينكشف العمود الفقري على طوله. ويمكنكم رؤية النخاع الشوكي هنا تماماً.لذا في الفأر، يمكنك قطع كلا الطرفين وحقن PBS باستخدام المحقنة، وسيخرج النخاع الشوكي كقطعة واحدة تقريباً. ولكن في الجرذان، الأمر ليس بهذه السهولة؛ حيث يتعين عليّ فتحه واستخراج النخاع الشوكي يدوياً.أقوم الآن بالقص على كلا الجانبين، وكما فعلت مع الدماغ، أقوم بالقص وإزالة العظم بحيث أكشف الحبل الشوكي. وكما هو الحال بالنسبة للدماغ، فإن الحبل الشوكي أبيض تماماً، مما يدل على أن التروية القلبية قد تمت بنجاح. وسأقوم بذلك على طول العمود الفقري بالكامل.أهبط إلى مستوى الوركين الأيمنين، وهو هنا تماماً. ثم سأستخدم الملقط، ورغم أن هذه العملية ليست دقيقة للغاية، إلا أنني سأقوم بسحب الحبل الشوكي ووضعه في الأنبوب مع الدماغ. الآن، لدي في الأنبوب كل من الدماغ والحبل الشوكي للجرذ، وأنا مستعد الآن لتحضير معلق الخلايا المفردة.أنا الآن مستعدة لتحضير معلق خلوي أحادي من جهازي العصبي المركزي. وللقيام بذلك، سأحتاج إلى طبق بتري بحجم 10 سنتيمتر، سأضع بداخله مصفاة خلايا بمسامية 70 ميكرون. سأستخدم أيضاً مكبس سرنجة سعة 1 مل، كما أحتاج إلى ملاقط ومقص.سأقوم بوضع عينتي في مصفاة الخلايا والتأكد من عدم بقاء أي شيء في الأنبوب. بعد ذلك، سأقوم بتقطيعها إلى قطع صغيرة، مع خلط الدماغ والنخاع الشوكي معاً. وبمجرد فرم كل شيء تماماً، سأستخدم مكبس حقنة oneill للضغط عليها ودفعها من خلال المصفاة.وستلاحظ تدريجياً أن محلول PBS خارج مصفاة الخلايا سيصبح أكثر عكارة مع مرور الخلايا المفردة. وبالطبع، إذا كنت أرغب في تعقيم معلق الخلايا، سأقوم بذلك داخل غطاء زراعة الأنسجة ولن أضع أصابعي فيه. والآن، بما أن محلول PBS أصبح عكراً، سأقوم بجمعه للمرة الأولى ووضعه في أنبوب سعة 50 mil.لكنني سأستمر في المراقبة، وسأقوم بإضافة المزيد من PBS إلى مصفاة الخلايا، ثم سأقوم بالضغط عليها. وبما أن الجهاز العصبي المركزي (CNS) يحتوي على كمية كبيرة من الدهون، فإنه يعد أحد أكثر الأعضاء التي أجد صعوبة في تحضير معلق خلوي منها باستخدام هذه التقنية. لذا، فقد قمت بضغط كل أنسجة الجهاز العصبي المركزي عبر مصفاة الخلايا عدة مرات، وجمعت كل معلق الخلايا المفردة.وهنا الأنبوب الذي ملأته حتى 50 mL باستخدام PBS يحتوي على معلق الخلايا المفردة المُعد من الجهاز العصبي المركزي (CNS) للجانب الأيمن. والآن، سأقوم بطرد هذا الأنبوب مركزياً لتجهيزه للتدرج، وقد انتهت عملية الطرد الآن. لدينا راسب حالياً، لذا سأقوم بالتخلص من السائل العلوي وسأعيد تعليق خلاياي في 20 mL من Percoll بنسبة 30% في PBS.سأقوم بإضافة ذلك فوق 10 mL من 70% Percoll في PBS لإجراء عملية الفصل بالهجرة. لذا سأتخلص من السائل العلوي. ثم أقوم بتفكيك الراسب للتأكد من أن الخلايا في حالة تعليق أحادي وليست متكتلة في الراسب.لقد حصلت الآن على معلق من خلايا الجهاز العصبي المركزي في شكل معلق خلوي مفرد. سأقوم بتعليق هذه الخلايا في 20 mls من Percoll بنسبة 30% في PBS، ثم سأضع هذه الـ 20 mls فوق 10 mls من Percoll بنسبة 70% في PBS. بعد ذلك، سأقوم بطردها مركزياً.سأقوم الآن بأخذ 20 mL من معلق الجهاز العصبي المركزي (CNS)، وسأضعه ببطء فوق طبقة Percoll بتركيز 70% لتسهيل العملية. يمكنك أيضاً إضافة صبغة مثل الأحمر الفينولي (phenol red) في إحدى الطبقات، ولكنني لست متأكداً تماماً مما تفعله بالخلايا إن كانت تؤثر عليها، لذا أحاول تجنب استخدامها.يجب أن تتم العملية ببطء كافٍ لضمان عدم اختلاط الطبقتين، لذا يجب تجنب حدوث أي اضطراب كبير في الطبقة السفلية. ومعما تزداد سماكة الطبقة العلوية، يمكن زيادة السرعة. والآن، قمت بإضافة الخلايا إلى التدرج.إذًا، الطبقة الشفافة الموجودة في الأسفل هي طبقة perkel بتركيز 70%، والطبقة العكرة في الأعلى هي طبقة perkel بتركيز 30% والتي تحتوي على معلق الخلايا المفردة الخاص بي. سأقوم الآن بوضع هذا الأنبوب في جهاز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة، وسأتمكن من رؤية طبقة الخلايا وحيدة النواة إذا تمت العملية بشكل صحيح. الآن، انتهينا من عملية تدوير التدرج.لذلك، وكما هو معتاد، يتم إجراء عملية الطرد المركزي المتدرج، مع الحرص الشديد على إيقاف تشغيل المكبح حتى لا يتسبب في تخريب التدرج عن طريق التباطؤ بسرعة كبيرة. والآن أصبح لدينا الطبقات؛ حيث توجد طبقة من الدهون فوق التدرج، وسأقوم بإزالتها لتجنب تلوث معلق الخلايا الخاص بي.وعند الواجهة بين طبقتي البيركيل 30% و70%، تلاحظون أن الواجهة ليست حادة بل ضبابية، وهنا تتواجد الخلايا. وبمجرد قيامي بإزالة الخلايا، ستلاحظون أن الواجهة ستصبح أكثر حدة بكثير. لذا، سأقوم فقط بإزالة الجزء الأكبر من الدهون من الطبقة العلوية ووضعها في النفايات.ليس من الضروري إزالة كل الكمية، ولكن أريد إزالة قدر كافٍ بحيث لا تغطي المادة الماصة بالكامل عند النزول لسحب خلايا المونوكول. والآن، سأستخدم ماصة نقل أخرى للوصول إلى مستوى السطح الفاصل وسأقوم بجمع الخلايا. وهكذا، قمت الآن بجمع عدة مليلترات من السطح الفاصل.لذا، فمن المحتمل أنني حصلت على جميع الخلايا التي يمكنني استخلاصها من هناك. لقد كان عدد الخلايا أحادية النواة في ذلك الجهاز العصبي المركزي صغيراً جداً. والآن، أصبحت الخلايا أحادية النواة موجودة في الأنبوب.سأقوم بملء هذا الأنبوب حتى 50 mL باستخدام PBS، ثم سأقوم بطرد الخلايا مركزياً لترسيبها، مما سيؤدي إلى غسل perle. وأوصي بغسلها مرتين على الأقل باستخدام أنبوب كامل من PBS للتأكد من التخلص من جميع الـ perle. وبعد ذلك، تصبح الخلايا جاهزة لأي إجراء ترغب في القيام به بها.لقد أوضحت لكم اليوم كيفية عزل الخلايا وحيدة النواة من الجهاز العصبي المركزي للجرذان. وبالطبع، بمجرد الحصول على هذه الخلايا وحيدة النواة، يمكنكم تنقيتها بشكل أكبر لعزل الخلايا اللمفاوية T، على سبيل المثال، من هذه المجموعة. وما سأقوم به باستخدام هذه الخلايا هو إجراء تحليل قياس التدفق الخلوي للكشف عن المجموعات الخلوية التي كانت موجودة في الدماغ.مع تمنياتنا لكم بالتوفيق في عملية عزل الخلايا.

isolation-mononuclear-cells-from-central-nervous-system-rats-with

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

المقالة الحالية يصف بروتوكول السريع لعزل خلايا وحيدات النوى بكفاءة من أنسجة الحبل الشوكي والدماغ التي يمكن استخدامها بشكل فعال لتحليل تدفق cytometric.

عزل خلايا الدماغ والحبل الشوكي وحيدات النوى Percoll باستخدام التدرجات

في هذا الفيديو ، نقوم بعزل الخلايا أحادية النواة من دماغ الفأر باستخدام الطرد المركزي المتدرج للكثافة. يمكن استخدام تعليق الخلية أحادية النواة المعزول لمزيد من التحليل النهائي.

عزل الخلايا أحادية النواة عن دماغ الفأر: تقنية الطرد المركزي المتدرج للكثافة لعزل الخلايا أحادية النواة المقيمة في الدماغ

تصف هذه المخطوطة طرق تحريض وتسجيل نموذج التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE) ، جنبا إلى جنب مع تقييم توزيع الخلايا المناعية ومستويات السيتوكين mRNA في الغدد الليمفاوية والطحال والدم والحبل الشوكي باستخدام قياس التدفق الخلوي وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي ، على التوالي ، في مراحل مرضية مختلفة.

تحريض التجريبية المناعة الذاتية التهاب الدماغ في الفئران وتقييم توزيع الأمراض التي تعتمد على خلايا المناعة في الأنسجة المختلفة

قد أعيقت الجهود المبذولة لفهم الدالة ميكروجليال بالتفصيل بعدم وجود نماذج الثقافة ميكروجليال أن الخص خصائص ناضجة في فيفو microglia. ويصف هذا البروتوكول نهج العزلة والثقافة تهدف إلى المحافظة على بقاء قوية من microglia الفئران الناضجة متشعب جداً في ظل الظروف المحددة والمتوسطة.

العزلة وثقافة Microglia القوارض تعزيز دينامية تتفرع مورفولوجيا في المتوسط خالية من المصل

والهدف من هذا البروتوكول هو عزل الاوعيه المجهرية من مناطق متعددة من الجهاز العصبي المركزي لفقاريات السسينسيفريك والفقريات.

عزل يمكن الاعتماد عليه من الاوعيه المجهرية للجهاز العصبي المركزي عبر خمس مجموعات فقاري

نحن نقدم بروتوكولا لعزل الخلايا الصغيرة من المناطق تشريح مختلفه من نصف الكره الدماغ الفار الكبار ، تليها اعداد المكتبة شبه المؤتمتة لعمق خليه واحده الحمض الريبي النيبالي تسلسل كامل طول الكتابات النصية. ستساعد هذه الطريقة علي توضيح التغاير الوظيفي للدبقيه الصغيرة في الصحة والمرض.

عزل ميكروليا الخاصة بالمنطقة من واحد الكبار الفار الدماغ نصف الكره لعمق خليه واحده التسلسل RNA

تقدم هذه المخطوطة بروتوكولاً للحث على التهاب الدماغ المناعي الذاتي التجريبي النشط (EAE) في الفئران. كما يتم تقديم طريقة لعزل وتوصيف الخلايا الليمفاوية المتسللة في الجهاز العصبي المركزي (CNS) لإظهار كيفية مشاركة الخلايا الليمفاوية في تطور مرض المناعة الذاتية للجهاز العصبي المركزي.

تحليل تدفق Cytometric لتسلل الخلايا اللمفاوية في الجهاز العصبي المركزي أثناء التهاب الدماغ المناعي الذاتي التجريبي

تقدم هذه الورقة بروتوكولين محسنين لفحص الخلايا المناعية المقيمة والمشتقة من المحيط داخل الجهاز العصبي المركزي ، بما في ذلك الدماغ والحبل الشوكي والسحايا. يساعد كل من هذه البروتوكولات على التأكد من وظيفة وتكوين الخلايا التي تشغل هذه المقصورات في ظل حالة مستقرة وظروف التهابية.

عزل أنسجة الجهاز العصبي المركزي والسحايا المرتبطة به لتحليل المصب للخلايا المناعية

يتم تقديم طريقة لعزل الخلايا الجذعية العصبية والخلايا السلفية oligodendrocyte من أدمغة الفئران الحية هنا بالتفصيل التجريبي. يسمح بمجموعات متعددة من هذه الخلايا من نفس دون المساس برفاههم.

طريقة "حلب الدماغ" لعزل الخلايا الجذعية العصبية والخلايا السلفية قليلة التغصن من الفئران الحية

يحدد هذا البحث تقنيتين لعزل مصائد العدلات خارج الخلية الوفيرة (NETs) من نخاع عظم الفئران. تجمع إحدى الطرق بين مجموعة عزل العدلات التجارية والطرد المركزي المتدرج للكثافة ، بينما تستخدم الطريقة الأخرى الطرد المركزي المتدرج للكثافة فقط. كلا النهجين يتمخضان عن شبكات وظيفية تفوق تلك الموجودة في العدلات الدموية المحيطية.

نهج فريد لعزل العدلات نخاع عظم الفئران بسعة مماثلة

حتى الآن ، تعد بروتوكولات العزل المتزامن لجميع أنواع الخلايا الرئيسية المقيمة في الجهاز العصبي المركزي من نفس الفأر طلبا غير ملباة. يظهر البروتوكول إجراء قابلا للتطبيق في الفئران الساذجة والتجريبية لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي للتحقيق في الشبكات الخلوية المعقدة أثناء الالتهاب العصبي وتقليل أعداد الفئران المطلوبة في نفس الوقت.

العزل المتزامن لأنواع الخلايا المقيمة في الجهاز العصبي المركزي الرئيسي من الفئران المصابة بالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي للبالغين

تعلم عزل الخلايا وحيدات النوى من الجهاز العصبي المركزي لجرذان EAE باستخدام التروية القلبية وتدرج بيركول. تُستخدم هذه الطريقة في دراسات المناعة العصبية وتحليل الخلايا المناعية.

عزل خلايا وحيدات النوى من الجهاز العصبي المركزي مع الجرذان EAE

استكشف المزيد من الفيديوهات