موريس المياه متاهة الاختبار: الأمثل للماوس الانفعال والبيئة اختبار

الهدف من هذا الإجراء هو تحديد العجز المعرفي في نموذج الفأر لمرض الزهايمر من خلال استخدام بروتوكول متاهة Morris Water ، المصمم للاستخدام مع سلالة الخلفية 1 2 9 6 FBB. يتم تحقيق ذلك عن طريق تأقلم الفئران أولا مع مهمة التخفيف من عجز الأداء الناجم عن الإجهاد. الخطوة الثانية هي استخدام مهمة النظام الأساسي المرئي حيث يتم رفع المنصة بوصة واحدة فوق خط الماء لتقييم الأداء البصري والحركي.

بعد ذلك ، يتم إجراء تجارب المنصة المخفية حيث يتم غمر المنصة على بعد خمسة ملليمترات تحت سطح الماء. تتمثل الخطوة الأخيرة في استخدام تجارب المسبار حيث تتم إزالة المنصة لتقييم الذاكرة المرجعية المكانية وتحديد نوع استراتيجية البحث المستخدمة. في النهاية ، يسمح إجراء MAs المائي المخصص هذا بتقييم التعلم المكاني والذاكرة في نموذج فأر شائع الاستخدام لمرض الزهايمر.

بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة بسبب ضرورة تحسين إجراءات الاختبار ، مثل عدد التجارب التدريبية والمجسات المستخدمة بناء على إجهاد خلفية خط الفأر والبيئة التي يتم فيها اختبار الفئران. هذا الجزء من الإجراء يتأقلم مع الفئران لسحب الدخول والإزالة. أولا ، ضع الصندوق بحيث يتم رفعه إلى ارتفاع مريح واملأه بلترين من الماء عند درجة حرارة 21 درجة مئوية وإلى مستوى سنتيمتر واحد تقريبا.

بعد إحضار الفئران إلى غرفة الاختبار ، قم بإزالة موضوع من القفص ، وتحقق من تحديد هوية الموضوع ، ثم ضع علامة على الذيل بعلامة دائمة غير سامة لتمييزه عن الفئران التي لم تخضع لهذا الإجراء. ضع الماوس في دورق النقل لمدة خمس ثوان تقريبا. ثم اسكب الماوس برفق من الدورق في وقت المسبح قبل المناولة ، ووقت الماوس في المسبح لمدة 20 ثانية.

بعد انقضاء الوقت ، ضع مغرفة برفق أمام الماوس دون أن تمحوره. اسمح للماوس بالدخول واستكشاف المغرفة إذا لزم الأمر ، شجع الماوس على الصعود إلى المغرفة عن طريق تحريك المغرفة برفق أسفل الماوس أثناء الرفع ببطء. احرص على عدم تخويف الفئران بالمجرفة.

كرر هذه الإجراءات لكل فأر في القفص مرة واحدة يوميا لمدة 10 أيام. بعد كل ، التقط البراز والفراش من المسبح ، باستخدام شبكة كونها دورق النقل بين الأقفاص. قم بإجراء تدريب مرئي في أيام الاختبار الأول والثاني والثالث مع ست تجارب كل يوم وحوالي 10 دقائق بين كل تجربة.

أولا ، قم بإعداد برنامج تتبع أداء الماوس وإنشاء أوراق التشغيل وفقا للإرشادات الموجودة في الجزء النصي من البروتوكول. بمجرد تكوين البرنامج ، قم بإعداد الغرفة عن طريق تعليق الستائر أولا بحيث يتم حجب أي إشارات مكانية. بعد ذلك ، قم بإعداد الحوض عن طريق ملء ماء الصنبور عند 21 درجة مئوية.

استخدم مقياس حرارة للتأكد من بقاء درجة حرارة الماء في حدود درجة واحدة من درجة الحرارة هذه. طوال فترة الاختبار. ضع المنصة التي تحتوي على علم مثبت يصل ارتفاعه إلى 13 سم ويبلغ ارتفاعه 4.5 × 4.5 سم مع نقش حرف جريء على شكل حرف S في أول موقع محدد مسبقا للحوض بحيث يرتفع حوالي بوصة واحدة فوق سطح الماء.

الآن خذ الماوس الأول من القفص. تحقق من تحديد الموضوع ، وقم بتمييز الذيل باستخدام علامة دائمة للون الصحيح ، وضعه في دورق نقل. ضع الماوس برفق في الحوض.

ابدأ المؤقت وتأكد من أن برنامج التتبع يتتبع. اسمح للماوس لمدة تصل إلى دقيقتين لتحديد موقع النظام الأساسي. بمجرد أن يحدد الماوس موقع النظام الأساسي ، اسمح للماوس ب 20 ثانية على المنصة.

إذا فشل في العثور على المنصة في فترة الدقيقتين ، فقم بغرف الماوس وضعه على المنصة لمدة 20 ثانية. بعد 20 ثانية على المنصة ، قم بإزالة الماوس من المنصة كما هو الحال في التدريب على التأقلم ، وضعه في قفص ساخن مبطن بمناشف ورقية وقم بتسخينه إلى حوالي 31 درجة مئوية بواسطة وسادة تسخين ومصباح حراري لمدة 30 ثانية. ثم انقل الماوس إلى قفص الاحتجاز باستخدام وسادة تدفئة فقط ، ولكن بدون مصباح حراري للتعافي بين التجارب.

بعد تنظيف حوض الحطام بشبكة ، كرر هذه الخطوات لكل فأر في المجموعة. عند اكتمال كل ماوس ، التجربة الأولى ، انقل النظام الأساسي إلى الموقع الثاني المحدد مسبقا. قم بإجراء تدريب على المنصة المخفية من الأيام الرابعة إلى العاشرة بعد تعليق الستائر.

كما كان من قبل ، ضع الإشارات بشكل استراتيجي على الستائر. تأكد من أن الإشارات كبيرة وتحتوي على ألوان متباينة لتحسين الرؤية ، ويتم ضبطها على المسافة والارتفاع حيث تكون مرئية للفئران من داخل الحوض. قم بتكوين البرنامج وفقا للإرشادات الواردة في الجزء المكتوب من البروتوكول.

ثم قم بإعداد الحوض عن طريق ملئه بالماء أولا بحيث تكون المنصة حوالي خمسة ملليمترات تحت سطح الماء. ضع المنصة في الموقع المحدد مسبقا. سيظل موقع النظام الأساسي كما هو ليتم اختباره تقريبا طوال الأيام والتجارب.

It.It الضروري لتغيير موقع البداية حتى لا تطور استراتيجية حركية غير مكانية وغير حصينية. لحل المتاهة ، استخدم الطلاء الأبيض المعتدل غير السام لجعل الماء معتما. افعل ذلك للتأكد من أن الجزء العلوي من المنصة غير مرئي من مستوى عين أثناء السباحة.

بعد تحديد الماوس ووضع علامة عليه من قبل ، اسكب الماوس برفق في المتاهة ، بحيث يواجه الأنف والأذن والحنجرة الحائط. سيتم وضع كل ماوس في نفس موقع البداية للحصول على نسخة تجريبية فريدة. عند التحرير الأولي للماوس ، ابدأ المؤقت واقف في منطقة لا يمكن فيها رؤية جهاز الاختبار بسهولة للفئران.

بمجرد وصول إلى المنصة ، اسمح له بالبقاء على المنصة لمدة 15 ثانية لتوجيه موقعه المكاني داخل الغرفة. إذا لم يحدد الماوس موقع المنصة في غضون 60 ثانية ، فقم بغرف الماوس برفق وضعه على المنصة. بعد 15 ثانية على المنصة ، قم بإزالة الماوس من المتاهة وإعادته إلى القفص الساخن.

بعد تنظيف متاهة الحطام من قبل ، كرر هذه الإجراءات للفئران المتبقية في المجموعة. وبالتالي ، بالنسبة لأيام الاختبار من الرابع إلى التاسع ، قم بإجراء أربع تجارب للتدريب على المنصة المخفية يوميا مع حوالي 20 دقيقة بين كل تجربة. قم بإجراء تجارب التحقيق قبل تدريب المنصة في اليوم السادس والسابع والثامن ، وتجربة المسبار النهائية.

في اليوم العاشر ، قم بإجراء تجارب التحقيق بطريقة مشابهة للتدريب على المنصة المخفية باستثناء عدم وجود منصة في المتاهة. حرر الماوس من نقطة تحرير محددة مسبقا واسمح للفأر بالسباحة لمدة 60 ثانية في المتاهة بعد تجربة المسبار في اليوم 10 ، لا توجد تجارب إضافية أجريت أثناء تجارب المسبار. استخدم برنامج تتبع لتتبع طول مسار ، والنسبة المئوية للوقت الذي يقضيه في كل ربع من المتاهة ، وعدد المرات التي يسبح فيها فوق المنطقة التي تم وضعها سابقا.

افتح علامة تبويب القائمة التجريبية واحصل على القياسات من علامة تبويب تحليل البيانات وعلامة التبويب متاهة المياه. قم بالتصدير مباشرة إلى جدول بيانات Excel. ثم قم بتحليل البيانات وفقا للتعليمات الواردة في الجزء المكتوب من البروتوكول.

تم اختبار 41 TP 3 0 1 L الفئران التي تحتوي على جين P البشري P 3 0 1 LTL و 46 ضابطا باستخدام هذا البروتوكول في عمر 6.5 أشهر تقريبا. يمثل هذا ثلاثة أشهر من تعبير Tau P 3 0 1 L في الجينات المعدلة وراثيا. احتوت كل مجموعة على أعداد متساوية تقريبا من طول مسار الذكور والإناث.

لم يختلف تدريب المنصة غير المرئية بين الضوابط والفئران TP 3 0 1 L. يشير هذا النقص في الاختلاف إلى أن التحكم و tau P 3 0 1 LM لا يختلفان في القدرة البصرية أو الحركية ، وبالتالي يمكن أن يعزى عجز الأداء في الاختبار التجريبي الخفي إلى ضعف الذاكرة. ومع ذلك ، أثناء التدريب على المنصة المخفية ، أظهر TP 3 0 1 LM أطوال مسارات أطول بكثير عبر جميع كتل التدريب.

أخيرا ، تحسنت الضوابط عبر تجارب المسبار الأربع. في حين أن الفئران Tau P 3 0 1 L لم تتحكم في الفئران ، كانت أكثر قدرة على استخدام استراتيجية مكانية لحل المهمة وتعلمت بشكل أفضل توطين المنصة في المنطقة المستهدفة. عند تكييف هذا الإجراء للاستخدام مع خطوط الفأر الأخرى ، من المهم تقييم معدل تعلم الضوابط ، وتحديد عدد تجارب التدريب على الضرب المطلوبة ، وتحديد متى يجب إدخال تجربة المسبار الأولى.