في فيفو التصوير وتتبع التكنيتيوم-99m إعتبر نخاع العظم الوسيطة الخلايا الجذعية في فرسي Tendinopathy

الهدف العام من هذا البروتوكول هو تتبع توزيع ومصائر الخلايا الجذعية الميزنشيمية للنخاع العظمي الموصومة بشكل غير باضع بعد حقنها عن طريق التصوير الومضاني بغاما. إن مصير الخلايا الجذعية بعد الحقن لا يزال غير مفهوم بشكل كافٍ. وتتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها تسمح بتتبع الخلايا الجذعية بشكل غير باضع عبر أعضاء متعددة بعد الإعطاء، كما أن فترة نصف العمر القصيرة لـ A osteo تضمن تخلص الجسم منها في غضون 48 hours.

على الرغم من أن هذا قد قدم رؤى حول استخدام الخلايا الجذعية في علاج اعتلالات الأوتار التي تحدث بشكل طبيعي، إلا أنه يمكن استخدامه أيضاً لاستقصاء علاجات أمراض العظام والقلب. وبشكل عام، تتمثل التحديات التي تواجه الأفراد المبتدئين في هذه الطريقة في تنسيق الخلايا ومجموعة أدوات الوسم وتجهيز المريض. وللتطبيق الفوري للخلايا، ابدأ بوضع هلام التوصيل الصوتي على الطرف المقصوص، واستخدم محول طاقة خطي لمسح منطقة مشط اليد الراحية بالكامل بشكل منهجي للحصول على صور عرضية وطولية متسلسلة لتحديد منطقة الإصابة القصوى.

بعد إعطاء التخدير الموضعي، يتم فرك موقع الزرع بمحلول كلورهيكسيدين الجراحي لمدة خمس دقائق على الأقل، يليه مسح بشاش مبلل بالإيثانول. بعد تجهيز الحيوان، ارتدِ زوجاً من القفازات، ثم قم بترسيب حصة من الخلايا الجذعية الميزنكيمية لنخاع العظم بمقدار 1×10⁷ خلية في 1 mL من طافي نخاع العظم عن طريق الطرد المركزي. بعد ذلك، اسحب الطافي باستخدام سرنجة سعة 2 mL، مزودة بإبرة قياس 18 أو 19، مع ترك حوالي 100 µL من المحلول في الأنبوب.

انقل السائل الطافي إلى أنبوب طرد مركزي دقيق على الثلج، ثم استخدم النقر الخفيف لإعادة تعليق الخلايا في الـ 100 µL المتبقية من السائل الطافي. تأكد من إعادة تعليق الخلايا تماماً وعدم وجود تكتلات نسيجية مرئية. بعد ذلك، اترك الخلايا في درجة حرارة الغرفة.

الآن، اخلط 1 mL من technetium pertechnetate في قارورة من H-M-P-A-O. وبعد مرور خمس دقائق، استخدم محقنة وإبرة سعة 1 mL لمعالجة الخلايا الجذعية الميزنكيمية بكامل الحصة من TECHNETIUM 99 M-H-M-P-A-O. ثم أغلق الأنبوب بالغطاء، واخلط الخلايا عن طريق النقر الخفيف، وضع الأنبوب في درجة حرارة الغرفة خلف درع رصاصي.

بعد مرور 30 دقيقة، افتح الأنبوب باستخدام ملقط واستخدم حقنة ملليلتر مخصصة للأنابيب مزودة بإبرة قياس 21 لإضافة 1 mL من PBS إلى الخلايا. أغلق الأنبوب مجدداً وامزج الخلايا. بعد ذلك، قم بطرد الخلايا مركزياً واستخدم حقنة السعة 2 mL لنقل supernatant بعناية إلى أنبوب محمي ومسمى wash one.

ثم اغسل الراسب في ملليلتر آخر من PBS كما تم توضيحه للتو. انقل الغسلة الثانية إلى أنبوب محمي مسمى W2 بعد إتمام عملية الغسل الثانية. أعد تعليق الخلايا جيداً في الـ PBS المتبقي ثم أضف كمية محددة من طافي نخاع العظم المبرد على الثلج، مع تثبيت المحول بشكل موازٍ للإبرة.

أدخل ببطء إبرة عيار 20 بطول 1.5 أو 2 بوصة في منطقة الإصابة القصوى في مركز الآفة بتوجيه طولي. بعد ذلك، وباستخدام الدرع الواقي المناسب، اسحب الخلايا إلى محقنة لوك سعة 2 مللي لتر مجهزة بإبرة عيار 20، ثم تخلص من الإبرة مع الحرص على عدم فقدان أي سائل. بعد توصيل المحقنة بالإبرة الموضوعة مسبقاً في الوتر، ضع مسبار الموجات فوق الصوتية أسفل الإبرة بحيث يكون مسار الإبرة في النسيج مرئياً بوضوح، ثم احقن الخلايا بوتيرة بطيئة ولكن ثابتة داخل الآفة.

تأكد من أن السائل الذي يتم حقنه في الآفة يظهر في صورة الموجات فوق الصوتية كسائل ناقص الصدى يحتوي على فقاعات هواء عالية الصدى، وعند الانتهاء من إعطاء جميع الخلايا، يتم سحب الإبرة. استخدم خيار "acquire study" وخيارات "bone static" في برنامج المعالجة للحصول على صور ثابتة لمدة 60 ثانية لكل منها. بعد ذلك، قم بالتقاط صور جانبية لمنطقة الآفة، من الرسغ إلى الطرف القاصي، والمنطقة المعادلة في الطرف المقابل، ومجال الرئة اليسرى، والغدة الدرقية اليسرى في الأوقات المحددة.

بعد ذلك، اختر أدوات تحديد المنطقة ذات الأهمية والأشكال البيضاوية وأعد تشكيل قناع التحديد فوق منطقة الآفة حسب الاقتضاء. وأخيراً، اختر خيار إضافة إحصائيتين للحصول على أعداد الخلايا في المنطقة ذات الأهمية. مع الحرص على تسجيل مناطق ذات أهمية متساوية الحجم لكل حيوان في النقاط الزمنية المختلفة.

بعد الحقن داخل الآفة، ستظهر الخلايا كمنطقة إشارة بؤرية مع انتشار محدود للخلايا في أنسجة الوتر المحيطة بمرور الوقت. وفي المقابل، عند إعطاء الخلايا عن طريق التروية الإقليمية عبر وريد بالمر الرقمي، يُلاحظ انخفاض تدريجي في الإشارة عند موقع الحقن. بمرور الوقت، تكون حقول الرئة سلبية عادةً بعد الحقن داخل الآفة، ولكن في بعض الأحيان قد يتم اكتشاف إشارة بؤرية للغاية تصبح أكثر تعميماً بمرور الوقت في النقاط الزمنية المبكرة.

وتظل الغدة الدرقية سلبية عبر مسار الإعطاء هذا أيضاً. كما يُظهر التروية الإقليمية إشارة بؤرية في الرئتين، والتي تصبح أكثر انتشاراً مع مرور الوقت، على الرغم من أن الإشارة تكون أكثر كثافة بشكل ملحوظ مقارنة بتلك الملاحظة عبر المسار داخل الآفة. ومع إظهار الغدة الدرقية أيضاً إشارة بؤرية في كثير من الأحيان، فإن إجمالي العد الإشعاعي الأولي للخلايا عند الزمن صفر قبل الحقن، والعدات من مخطط غاما الأولي في المنطقة المستهدفة.

يمكن استخدام القيمة عند الزمن صفر بعد الحقن لحساب النسبة المئوية للانخفاض في عدد النبضات عند كل نقطة زمنية بعد الحقن، وذلك لتحديد الاضمحلال المتوقع لـ TC 99 M من عدد النبضات الأولي. ويمكن بعد ذلك حساب مدى استمرارية الخلايا المتبقية في موقع الحقن عند كل زمن بعد الحقن. وباتباع هذا الإجراء، يمكن تطبيق طرق أخرى لتوزيع الخلايا للإجابة على أسئلة إضافية حول قدرة الخلايا الجذعية الميزنكيمية على التوجه نحو الهدف بعد تطويرها.

لقد مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الطب الإقليمي لاستكشاف طرق تحسين استبقاء الخلايا داخل إصابات الأوتار. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية وسم الخلايا وتسجيل توزيعها وتركيزها في أنظمة أعضاء مختلفة. لا تنسَ أن العمل بالإشعاعات المؤينة يمكن أن يكون خطيرًا للغاية، لذا فإن الاحتياطات مثل معدات الوقاية الشخصية، وأجهزة مراقبة الإشعاع، والدروع الرصاصية، والتخلص السليم من النفايات الملوثة هي أمور أساسية أثناء تنفيذ هذا الإجراء.