المحافظة على الكبد وظيفية الإنسان والاسترداد من قبل وسائل Subnormothermic آلة الإرواء

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء آلة موضوعية دون الطبيعة ، نضح الكبد البشري للحفاظ على العضو وتعافيه وتقييمه. في بيئة البحث قبل السريرية ، يتم تحقيق ذلك عن طريق إعداد الكبد أولا للاتصال بالجهاز. في الخطوة الثانية ، يتم تحضير نظام التروية الآلي ، ويتم توصيل الكبد ، ويبدأ التروية في الخطوة النهائية.

سيصبح الكبد المتدفق بالآلة نشطا وظيفيا في حالة حرارية دون الطبيعة ، وينتج الصفراء. في النهاية ، يمكن تحليل العينات التي تم جمعها من الكبد أثناء الوفرة لدراسة الانتعاش الأيضي ووظيفة العضو. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على طرق الحفظ الحالية مثل الوفرة الباردة والوفرة الحرارية الطبيعية ، هي أن وفرة الآلة غير الطبيعية تسمح بالتعافي الوظيفي وتقييم صلاحية الكبد ، مع عدم الحاجة إلى تلبية متطلبات التمثيل الغذائي العالية لتروية درجة حرارة الجسم.

تتطلب العديد من جوانب هذه التقنية خبرة أو عرضا توضيحيا لإكمالها بنجاح. على سبيل المثال ، يمكن أن يكون العرض التوضيحي لكيفية إجراء تحضير الطاولة الخلفية للكبد ، والذي يتضمن تشريح الوريد الشرياني وقناة الصمام ، مفيدا للباحثين الذين ليس لديهم تدريب جراحي مسبق عند استلام الكبد ، ضع وعاءا مملوءا بالثلج على سطح ملفوف معقم وقم بإزالة الكبد من صندوق النقل ، تركها مغمورة في الغالب في كيس محلول الحفظ البارد. بعد ذلك ، استخدم مقص بلسم Metzen للكشف عن الفروع المختلفة على طول إمداد الشرايين بالكبد من الشريان الأورطي إلى الشريان الكبدي المناسب.

ثم قم بتشريح باقي الشريان بعناية لمنع قطع أي أوعية تغذي الكبد دون قطع أو ربط الفروع التي ليس لها نهاية مرئية. عندما يتم عزل الشريان ، استخدم خيوط حريرية من الحجم صفر إلى أربع خيوط حريرية لربط جميع الفروع الشريانية التي لا تغذي الكبد. ربط وقطع الشرايين الطحالية والمعدة بالقرب من أصلها على جذع الاضطرابات الهضمية.

قطع رقعة الأبهر حول جذع الاضطرابات الهضمية. ثم استخدم قنية الشرايين الوفيرة لقنية جذع الاضطرابات الهضمية. الآن قم بتشريح الوريد البابي خاليا من الوريد ، وقم بربط أي فروع أو خياطة ثقوب في الوريد وقم بتعليته باستخدام قنية نضح الوريد البابي.

قم بإزالة أجزاء من الحجاب الحاجز من الوريد الأجوف فوق الكبدي دون قطع الوريد نفسه. ثم قم بقطع عينتين إلى ثلاثة ملم من الأنسجة المحيطية الكاملة من نهاية القناة الصفراوية المشتركة. يجب التعامل مع العينات بدقة.

بتجميد عينة واحدة والنيتروجين السائل للتخزين عند سالب 80 درجة مئوية ، وقم بتخزين الأخرى في فورمين مخزن مؤقت بنسبة 10٪. ثم قم بتقطيع القناة الصفراوية المشتركة بقنية وعاء وقم بتوصيل أنبوب تصريف مصنوع من أنابيب ذات قطر صغير. بعد ذلك ، قم بربط القناة الكيسية بربطة عنق حريرية صفرية.

قم بتوصيل مجموعة الأنابيب المتدفقة بأكياس مثلجة باردة من محلول الرنين المرضع وقم بتجهيز الأنبوب لإزالة الهواء. اضبط منظم التدفق على أنبوب التدفق على قطرة بطيئة وقم بإغلاق الوريد البابي عند النقير لإزالة أي هواء في الوعاء. الآن املأ القنية في الوريد بمحلول دافق لإزالة الهواء من الوريد البابي ، مع الحرص على عدم رفع الكيس أكثر من 20 سم فوق ارتفاع الكبد لتجنب الضغط المفرط على الوريد.

ثم اغسل الكبد بما مجموعه لترين من محلول الرنين اللعاب على البارد ICEC. أثناء التدفق ، قم بإغلاق الوريد البابي لفترة وجيزة عند أدنى نقطة للتحقق من وجود تسريبات ، ثم كرر التدفق للشريان الكبدي مع لتر واحد من المحلول كما هو موضح للتو أثناء تنظيف الكبد ، قم بتجهيز نظام الوفرة بإضافة لترين من درجة حرارة الغرفة ثمانية غزيرة إلى وعاء العضو وابدأ تشغيل الجهاز لتجهيز الأنبوب. اضبط درجة الحرارة على 21 درجة مئوية.

ثم اضبط ضغطا قدره ثلاثة ملليمترات ، والزئبق على الوريد البابي و 30 ملم زئبق على الشريان الكبدي. افتح خزان غاز الكربوجين واضبطه على تدفق ثلاثة لترات في الدقيقة. بعد ذلك ، اسحب عينة من غازات الدم من منافذ عينة تدفق الوريد البابي والشريان الكبدي ، وقم بتشغيل العينات في آلة تحليل غازات الدم وفقا لتعليمات الشركة المصنعة لتأكيد الأكسجين الكافي ودرجة الحموضة.

استخدم بيكربونات الصوديوم أو كلوريد الهيدروجين لتصحيح الرقم الهيدروجيني حسب الضرورة. ثم قبل توصيل الكبد ، اجمع عينة سعة مليلتر واحد من البيرفو ثمانية كقياس مضروبا في الصفر وقم بتخزينها عند سالب 80 درجة مئوية. استخدم شفرة فولاذية ذات حافة واحدة لقطع خزعتين إسفيتين بحوالي 250 ملليغرام من الكبد في هذا الوقت أيضا.

بتجميد عينة واحدة في النيتروجين السائل لتخزين سالب 80 درجة مئوية وتثبيت الأخرى في الفورمالين المخزن بنسبة 10٪. قبل البدء في الوفرة ، قم بوزن الكبد ، ثم انقل العضو إلى حجرة العضو بالجهاز وقم بإزالة الهواء من القنيات. أظهر للتو.

عندما يتم عمل القنيات ، قم بتوصيل الوريد البابي وتدفقات الشريان الكبدي بالقنيات المناسبة. ابدأ الوفرة تأكد من غمر الكبد بواسطة ثمانية ، تغطي أي أسطح جافة ، بما في ذلك أوعية التدفق بشاش معقم مبلل. لمنع الجفاف ، اترك الأنابيب الصفراوية تستنزف في حاوية التجميع.

الحرص على أن تكون فتحة استنزاف الصفراء على مستوى الكبد أو أقل للسماح للصفراء بالجري بحرية. بمجرد تسخين الكبد إلى 21 درجة مئوية ، استهدف معدلات التدفق عند 275 إلى 325 و 50 إلى 100 مل في الدقيقة لكل كيلوغرام للوريد البابي والشريان الكبدي على التوالي. أثناء التروية ، خذ عينات من أنسجة الكبد المنفخة والصفراء حسب الاقتضاء.

استمر في التروية لمدة ثلاث ساعات ، ومراقبة درجة الحموضة للضغط والأكسجين وضبط الرقم الهيدروجيني باستخدام بيكربونات الصوديوم حسب الضرورة. في نهاية التروية ، اجمع العينات النهائية ، وافصل الكبد وقم بإزالة قنية القناة الصفراوية. أخيرا ، اجمع عينتين من أنسجة القناة الصفراوية بعد الوفرة كما هو موضح للتو وتخلص من الكبد البشري.

اتباع الإرشادات المناسبة للتخلص من المخاطر البيولوجية. يبدأ التدفق منخفضا نتيجة لمقاومة أعلى في الكبد البارد باستخدام ضغط قدره ثلاثة ملليمترات ، والزئبق على الوريد البابي و 30 ملم زئبق على الشريان الكبدي. يمكن تحقيق التدفقات المستهدفة بشكل عام بمجرد ارتفاع درجة حرارة الكبد إلى 21 درجة مئوية بعد 60 دقيقة من التروية ، والقياس المتكرر للنفخ الثماني عن طريق تحليل غازات الدم ضروري للأغراض التجريبية وكذلك للحفاظ على ظروف التروية المناسبة.

على سبيل المثال ، يجب أن يكون الضغط الجزئي للأكسجين المذاب أكبر من 700 ملم زئبق عند تدفق كل من الوريد البابي والشريان الكبدي. في حين أن ضغط الأكسجين الخارج المقاس في الوريد الأجوف يجب أن ينخفض بشكل عام مع التروية الأطول التي تعكس زيادة امتصاص الأكسجين. يمكن أيضا قياس الترانساميناسات الكبدية في PERFU ثمانية ، على سبيل المثال.

لوحظت زيادة في الألانين أو الترانساميناز أو LT بشكل عام في أول 30 دقيقة من التروية مع زيادة طفيفة أخرى خلال بقية التروية. يكشف التقييم الإضافي لإنتاج TP في الكبد المنفوع آليا عن زيادة بمقدار 2.8 ضعفا في محتوى A TP في الكبد مما يعكس حالة الطاقة المستعادة. علاوة على ذلك ، يكشف التحليل النسيجي h و e عن عدم حدوث إصابات إضافية أثناء العملية.

يسمح اتباع هذا الإجراء بتحليل شامل للكبد المعزول مما يوفر رؤى فريدة في فسيولوجيا الكبد وعلم الأمراض. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية الحفاظ على الكبد البشري أثناء نضح الجهاز تحت الأرض لتسهيل تقييم وظيفته خارج الجسم.