نموذج الفأر من منيع للمستضد الخيفي الناجم عن رفض الأوعية الدموية وزراعة تصلب الشرايين

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء عملية تطعيم شرياني أبهري بين طرفين في الفئران لدراسة الرفض الوعائي وتصلب الشرايين الناتج عن الزرع. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق استئصال قطعة من الأبهر البطني من الفأر المانح، ثم يتم تطعيم هذه القطعة في موضعها التشريحي الصحيح داخل الشريان الأبهر الكلوي لفأر مستقبل خيفي يختلف جينياً عن المانح.

في الخطوة النهائية، يتم استئصال قطعة الوعاء الدموي المزروعة وتحليلها للكشف عن تطور تصلب الشرايين في الطعم. وفي النهاية، يمكن تقييم مدى تصلب الشرايين في الطعم والرفض الوعائي للطعم الخيفي بوساطة مناعية من خلال قياس سماكة الطبقة الباطنة وتضيق اللمعة، بالإضافة إلى التحليل المناعي الكيميائي النسيجي للأنسجة للكشف عن تراكم الخلايا المناعية.

بشكل عام، يحتاج الأشخاص المبتدئون في هذا الإجراء إلى وقت للتمكن من تقنية الجراحة المجهرية لأنها تتطلب مستوى عالٍ من المهارة اليدوية والممارسة لإتقانها. ومع ذلك، يجب أن تكون الطريقة قابلة للتحقيق لمعظم الباحثين مع الممارسة والاجتهاد في المرضى. لذا، يتم استعراض الإجراء بمساعدة الدكتورة Winnie، وهي جراحة أعصاب موهوبة، وآدام Roso، طالب دكتوراه موهوب في مختبري. ابدأ بوضع الفأر المتبرع في وضعية الاستلقاء على ظهرِه فوق لوح بليكسي غلاس نظيف ورقيق ملفوف بغطاء معقم تحت المجهر الجراحي بتكبير 8.30x.

بعد التأكد من كفاية التخدير الجراحي عن طريق قرص إصبع القدم، استخدم مقصاً معقماً لإجراء شق واحد في الخط الناصف من منطقة العانة إلى النتوء ZipID. بعد ذلك، استخدم مباعدة صغيرة لفتح جدران البطن وكشف التجويف البطني. ثم استخدم مسحات قطنية معقمة لإزاحة الأمعاء برفق نحو الأعلى وإلى يسار الحيوان.

غطِ النسيج بشاش مبلل بمحلول ملحي، وحرك الأعضاء التناسلية نحو الأسفل لتحديد موقع الأبهر تحت الكلوي والوريد الأجوف السفلي أو IVC. استخدم الآن ملقطاً طبياً مقاس 5 لفصل الأبهر عن الوريد الأجوف السفلي عند الشريان الكلوي الأيسر بالقرب من منطقة التشعب. ثم استخدم خيوط جراحية من البولي أميد أحادي الخيط مقاس 10 zero لربط الفروع الصغيرة القريبة من الأبهر.

عندما يتم فصل الأبهر والوريد الأجوف السفلي للمانح، قم بتشبيع الوعاء بمحلول ملحي، وغطِّ التجويف المكشوف بشاش مبلل وضع المانح جانباً في منطقة معقمة. الآن، ضع فأر المستقبل تحت المجهر وافصل أبهر المستقبل عن الوريد الأجوف السفلي كما تم توضيحه للتو. ثم ضع مشبكين للأوعية الدقيقة بحجم أربعة مليمتر، أحدهما قريب والآخر بعيد عن الجزء المراد دراسته، بمسافة تقريبية تبلغ خمسة مليمتر بينهما.

بعد ذلك، وباستخدام مقصات دقيقة من نوع vanous tube engine، قم بإجراء شق أفقي واحد في الأبهر، واستأصل ما لا يزيد عن 0.5 millimeters من الأبهر البطني لاستيعاب الطعم الأبهر المتبرع به. أعد المتبرع إلى المجهر واقطع قطعة من الطعم بطول ثلاثة إلى أربعة millimeters كما تم توضيحه للتو. ثم استخدم إبرة قياس 25 gauge وطول خمسة أثمان لغسل الأبهر المستأصل بمحلول ملحي يحتوي على الهيبارين.

مع الحرص على عدم ملامسة طرف الإبرة للوعاء، يوضع الوعاء في حاوية تحتوي على محلول ملحي مبرد بالهيبارين فوق الثلج. وفي غضون 30 دقيقة من عملية الاستئصال، يتم وضع طعم الشريان الأورطي المتبرع به في الموضع المتجانس في المستقبل، مع مطابقة التوجه التشريحي للطعم مع التوجه الخاص بالمستقبل. بعد ذلك، يتم الإمساك بلطف بالغلالة الخارجية للوعاء واستخدام ملقط رقم 5 لإزاحتها قليلاً.

استخدم الآن الملقط لدفع إبرة متصلة بخيط جراحي من البولي أميد أحادي الشعيرة قياس 10 zero عبر كامل سماكة جدار الوعاء الدموي لتثبيت رقعة الشريان الأبهر المانحة بالوعاء المستأصل للمستقبل تمهيداً لوضع الغرز المستمرة. ثبّت غرز التثبيت (Stay sutures) عند موضع الساعة التاسعة في كلا الطرفين العلوي والسفلي للرقعة. ثم ابدأ من الطرف العلوي للرقعة من موضع الساعة الثالثة لإجراء عملية المفاغرة.

يتم خياطة النهايات المستأصلة بغرزتين مستمرتين وتثبيت الغرزة بغرزة التثبيت. ثم يتم قلب الطعم ومواصلة الغرزة المستمرة وصولاً إلى الجزء الظهري من الوعاء، بحيث تلتقي عند نقطة الأصل.

ثبّت الغرزة. أحكم ربط الغرزة دون الضغط بقوة على الوعاء الدموي، وكرر عملية الخياطة للمفاغرة السفلية. بمجرد اكتمال المفاغرة.

قم بتحرير مشبك الأوعية الدقيقة القاصي للسماح بتدفق الدم الراجع عبر الوعاء. إذا لم يتم ملاحظة أي نزيف، قم بتحرير المشبك الداني. وإذا لم تلاحظ أي انسدادات دموية، استخدم ملقطاً للإمساك برفق بأحد طرفي خيوط التثبيت وإزاحة الوعاء قليلاً لفحص الجدار الخلفي للوعاء.

لا ينبغي ملاحظة أي تجعد؛ في حال لوحظ نمط نبضي قوي في كل من الأوعية المانحة والمستقبلة، استخدم مسحات قطنية لإعادة الأمعاء إلى التجويف البطني. وأخيراً، استخدم حامل إبر وملقط Grof لإغلاق جدار البطن بغرز بولي بروبيلين 5/0 وبخياطة مستمرة. قم بإغلاق طبقة الجلد باستخدام الغرز نفسها عن طريق الإغلاق تحت الجلد.

يمكن ملاحظة الوظيفة الحركية للأطراف الخلفية لتقييم نجاح العملية الجراحية. ويتم فحص مقدار الضرر الوعائي في الطعم الخيفي بوساطة الجهاز المناعي، مع تقدير كمية تسمك الغلالة الباطنة وتضيق اللمعة في مقاطع الأبهر المزروعة في اليوم 30 بعد عملية الزرع.

وكما لوحظ بالفعل، طورت قطع الشرايين المطعومة خلوياً تضخماً ملحوظاً في الطبقة الباطنة وانسداداً في اللمعة، بينما لم تُلاحظ أي تغيرات في قطع الشرايين الضابطة المطعومة بـ ISO. علاوة على ذلك، يمكن تقييم استقطاب الكريات البيضاء إلى الشريان المطعوم من خلال فحص تراكم الخلايا التائية الموجبة لـ CD4 وCD8 والبلعميات بواسطة الكيمياء النسيجية المناعية. وكما كان متوقعاً، تم اكتشاف الأنواع الثلاثة من الخلايا المناعية داخل الطبقة الباطنة للأنسجة الشريانية المانحة بعد التطور.

مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال النقل لاستكشاف التضيق الوعائي بوساطة المناعة الخيفية وتصلب الشرايين في الأعضاء المزروعة.