Name: مما اثار رد الفعل دباق في فيفو من الدماغ الأمامي الطعنة الإصابات (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: تعلم إحداث التهاب النجمة العصبية التفاعلي في الدماغ الأمامي للفأر البالغ باستخدام إصابة طعنية. تُظهر النتائج زيادة كبيرة في تعبير GFAP وتكاثر الخلايا النجمية التفاعلية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

نشكر كاثرين كلارك على المساعدة الفنية. يتم تمويل A.D.R.G. جزئيا بواسطة 5K01MH097957-03

واستخدمت الكبار (3-4 أشهر من العمر) ذكور الفئران على مختلطة C57BL / 6 الخلفية في هذا البروتوكول. تم الاحتفاظ الحيوانات على 12 ساعة ضوء / دورة الظلام، وسمح حرية الوصول إلى الغذاء والماء. أجريت جميع الإجراءات المتبعة في هذا البروتوكول وفقا لبروتوكولات وافقت عليها اللجنة دريكسل جامعة المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام. 1. إعداد المنطقة الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير الجدول الجراحية مع 70٪ من الإيثانول، ثم تغطية على مقاعد البدلاء الجراحية كامل مع منصات ماصة وترتيب الأدوات الجراحية المتاخمة لالتجسيمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نصب المعدات التجسيمي دون الذراع مناور. ترتيب سادة التدفئة على التجسيمي وتعيين إلى 37 درجة مئوية. تجنب الانهاك الحيوان عن طريق وضع قطعة صغيرة من منشفة ورقية أو وسادة الجراحية بين الحيوان وسادة التدفئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيمها باستخدام مقص، وقطع قطعة صغيرة من جلفوم تعقيمها في طبق بتري معقمة تحتوي على محلول ملحي معقم بنسبة 0.9٪ حتى الجرميةدى للاستخدام. ملاحظة: الحفاظ على بيئة عمل معقمة باستخدام أدوات تعقيمها والمستلزمات الجراحية المعقمة. إعادة تعقيم الأدوات الجراحية أثناء إجراء أو بين الحيوانات عن طريق غمس في التعقيم حبة لمدة 10-15 ثانية، حسب الحاجة. الحفاظ على قفازات نظيفة في جميع أنحاء الداخلي عن طريق فرك اليدين مع الايثانول 70٪، حسب الحاجة، لتطهير. </li></ol> 2. الإستعداد ماوس لجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الماوس من قفص المنزل وتزن (ز). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الماوس إلى الأيزوفلورين غرفة الاستقراء ووضع الأكسجين إلى 2 لتر / دقيقة والمرذاذ الأيزوفلورين إلى 5 للحث على متن طائرة من التخدير الجراحي، حوالي 3-5 دقائق. مراقبة التنفس تباطؤ والشلل. تأكد من أن الفأر هو تخدير كامل باستخدام منعكس قرصة أخمص قدميه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند مخدرا الماوس بشكل كامل، ووضع في إطار التجسيمي، تأمين الأنف في مخروط الأنف، وهو يعلق مع أنابيب إلى الأيزوفلورين. إدراج أشرطة الأذن في قناة الأذن وتشديد، وضمان رأس غير مستقر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحلق رأسه من الأذن إلى الأذن، ومن بين العينين إلى خلف الأذنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم الجلد مع مناديل بالتناوب من ايزوبروبيل وحل betadine اليود، 3 مرات لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق الدموع الاصطناعية لكلتا العينين لمنعهم من الجفاف أثناء إجراء العمليات الجراحية. </li></ol> 3. إجراء العمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد عمق التخدير بواسطة معسر إصبع القدم أو الذيل. الفأر هو في الطائرة الجراحية المناسبة عندما لا يكون هناك استجابة، وتنفس بطيء وحتى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق الجلد مجاور للسهمي من خلف العينين إلى ما يقرب من بين الأذنين في واحدة، والحركة حازمة واحد باستخدام رقم 11 شفرة المشرط. نقل الجلد جانبا ومقطع الجانب الأيمن مع مرقئ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجمجمة واضحة من الغشاء المغطي باستخدام الجانب مملة من مشرط رقم 11 و القطن يميل تطبيقها. اختياريا، ومسح الجمجمة مع القطن يميل قضيب انخفض بنسبة 0.9٪ في محلول ملحي. السماح ليجف تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لناجي مسطرة صغيرة، بمناسبة الحافة الأمامية من حج القحف في 1 ملم الذيلية إلى الدرز الإكليلي، والحافة اليسرى من حج القحف في 1 مم الوحشي للخياطة السهمي (الشكل 1)، مع علامة دائمة. ثم وضع علامة الحق والحدود الذيلية من حج القحف في 4 ملم من الغرز السهمي والإكليلي، على التوالي (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام 0.5 مم مثقاب، والبدء في جعل حج القحف عن طريق حفر ببطء بعد مخطط علامة دائمة. تأكد من عدم اختراق الجمجمة تماما. اضغط بلطف على قطعة معزولة من العظم الجداري مع رقم 5 ملقط، مواطن الضعف وتفسح المجال للضغوط. عندما العظام ضعيفة ضعيفة بما فيه الكفاية في جميع أنحاء محيط، وقطعة عظم جاهز للإزالة. ملاحظة: إذا كانت صعوبة الخبرات محقق إزالة العظام في قطعة واحدة، وهذا يشير إلى أن العظام لم ضعيفة بما فيه الكفاية أثناء الحفر. النظر في حفر الجمجمة كذلك في الحيوانات اللاحقة لfacilitaإزالة سهلة الشركة المصرية للاتصالات للقطعة عظم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام حقنة 10 مل مزودة G 23 إبرة، وتطبيق كمية صغيرة من المياه المالحة 0.9٪ لامتصاص العظم معزولة ومنطقة حفر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق الذراع مناور لمعدات التجسيمي. إرفاق الجديدة رقم 11 شفرة مشرط لصاحب التحقيق مع الجانب حاد النصل تواجه rostrally. ملاحظة: على الرغم من أن الأنسجة منقاري والذيلية تجربة حواف حادة وحادة النصل، على التوالي، والأضرار الميكانيكية الناجمة عن الإصابة اختراق يماثل في جميع أنحاء مدى الآفة. نلاحظ عدم وجود فروق ملموسة في السمات الرئيسية لدباق رد الفعل بما في ذلك upregulation من التعبير GFAP أو الانتشار، بين أقسام منقاري والذيلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حفظ الذراع مناور للخروج من الطريق، ورفع بعناية العظام معزولة باستخدام ملقط 5/45 الزاوية. إدراج غيض من ملقط إلى جانب العظام معزولة ورفع، وذلك باستخدام النفوذ لسحب قبالة قطعة من العظام تركت وراءها في واحد فولل حركة. ملاحظة: يجب الحرص على عدم طعن الدماغ أو تعكير صفو الجافية تحت الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ قطعة صغيرة من الرغوة جل امتصاص غارقة ووضع على الدماغ المكشوف لمنعها من الجفاف وامتصاص أي دم التي قد تكون موجودة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة الرغوة جل في مكان، تأرجح الذراع تتلاعب في مكانه وضبط نصل إلى مركز حج القحف على رغوة جل. إزالة الرغوة جل وخفض النصل حتى يلمس طرف الجافية دون ثقب الجافية. علامة ظهري / بطني الإحداثيات باستخدام مقياس رنيه على ذراع العمودي للالتجسيمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الذراع مناور، وانخفاض ببطء شفرة بدقة 3 مم في الدماغ. ويتحقق ذلك باستخدام علامات نطاق رنيه على الذراع مناور. السماح نصل إلى البقاء في المكان لمدة 5-10 ثانية. تحريك الذراع التجسيمي مع مرفق شفرة منقاري إلى الذيلية ثلاث مرات مما يتيح للشفرة للوصول إلى حدود منقاري والذيلية من حج القحف قبل أن ينتقل إلى opposiالشركة المصرية للاتصالات نهاية. ملاحظة: لا يتم إزالة الجافية قبل إدخال شفرة. وعلى النقيض من الجافية الفئران، وهو ~ 80 ميكرون في سمك 7، الجافية الماوس هو أرق بكثير (فقط عدد قليل من طبقات الخلايا سميكة) و لا تنتج مقاومة لا يستهان بها لنصل مشرط خلال الإدراج. استخدام شفرة مشرط جديدة لكل الماوس للتأكد من أن كل حيوان يتلقى إصابة مماثلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع ببطء الذراع التجسيمي، وإزالة شفرة من الدماغ. بعد إزالة شفرة، ووضع على الفور قطعة أخرى من جلفوم على سطح الدماغ لامتصاص أي الدم الزائد أو السائل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي الوقت نفسه، إزالة الذراع التجسيمي والتخلص من شفرة مشرط رقم 11. بمجرد أن توقف النزيف، وإزالة جلفوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجرح عن طريق خياطة الجلد مع خياطة غير قابل للامتصاص، مثل ethilon أو البرولين. يجب إزالة الغرز 9-10 أيام بعد الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عودة الماوس إلى قفص وطنه، والسماح الماوس لاستعادة ببطء على اتسخينز وسادة ورصد أية علامات على الضيق. التعافي من التخدير التي يسببها isofluorane يحدث عادة خلال 2-5 دقيقة بعد إزالة من isofluorane. لا تترك الحيوان غير المراقب حتى استعادتها الإستلقاء القصية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة 0.5-1 مل من أفرز اللبن تحت الجلد حل قارع الأجراس لضمان الترطيب. </li></ol> 4. العناية ما بعد العمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عن كثب مراقبة الحيوانات بعد العملية حتى الشفاء من التخدير قبل أن تعود إلى المستعمرة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحد من الألم وعدم الراحة بعد العملية، إدارة ،05-0،1 ملغم / كغم البوبرينورفين عن طريق الحقن الملكية الفكرية باتباع الإجراء فورا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الحيوانات لمدة 2-3 أيام بعد العملية عن علامات شديدة من الضيق مثل الحركات المحظورة، وعدم النظافة الشخصية، أو فقدان الوزن. الموت ببطء الحيوانات يدل أي من هذه العلامات الشدة وإزالته من الدراسة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لدراسة التشريح للأنسجة المصابين، الموت ببطء الحيوانات عن طريق ستاننضح intracardial دارد. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باختصار، تخدير الحيوانات مع جرعة زائدة من الكيتامين / زيلازين، ثم perfused لintracardially مع 15-20 مل من 0.9٪ كلوريد الصوديوم، أو حتى يتم مسح الكبد من الدم، تليها 60 مل من 4٪ لامتصاص العرق في ختام التجربة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح أدمغة وبعد الإصلاح، لمدة 2-4 ساعة في 4٪ امتصاص العرق قبل ان ينتقل الى 30٪ محلول السكروز. أدمغة القسم على ناظم البرد في 40-60 ميكرومتر، والعملية من خلال إجراءات النسيجية أو المناعى القياسية، أو كما هو موضح في جارسيا 8،9. </li></ol>

<ol><li>Hamby, M. E., Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+astrocytes+as+therapeutic+targets+for+CNS+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Reactive astrocytes as therapeutic targets for CNS disorders.</a> Neurotherapeutics. 7 (4), 494-506 (2010).</li>
<li>Bush, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+infiltration%2C+neuronal+degeneration%2C+and+neurite+outgrowth+after+ablation+of+scar-forming%2C+reactive+astrocytes+in+adult+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Leukocyte infiltration, neuronal degeneration, and neurite outgrowth after ablation of scar-forming, reactive astrocytes in adult transgenic mice.</a> Neuron. 23 (2), 297-308 (1999).</li>
<li>Faulkner, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+astrocytes+protect+tissue+and+preserve+function+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reactive astrocytes protect tissue and preserve function after spinal cord injury.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 24 (9), 2143-2155 (2004).</li>
<li>Okada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+ablation+of+Stat3+or+Socs3+discloses+a+dual+role+for+reactive+astrocytes+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Conditional ablation of Stat3 or Socs3 discloses a dual role for reactive astrocytes after spinal cord injury.</a> Nature Medicine. 12 (7), 829-834 (2006).</li>
<li>Voskuhl, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+Astrocytes+Form+Scar-Like+Perivascular+Barriers+to+Leukocytes+during+Adaptive+Immune+Inflammation+of+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reactive Astrocytes Form Scar-Like Perivascular Barriers to Leukocytes during Adaptive Immune Inflammation of the CNS.</a> Journal of Neuroscience. 29 (37), 11511-11522 (2009).</li>
<li>Burda, J. E., Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+Gliosis+and+the+Multicellular+Response+to+CNS+Damage+and+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Reactive Gliosis and the Multicellular Response to CNS Damage and Disease.</a> Neuron. 81 (2), 229-248 (2014).</li>
<li>Maikos, J. T., Elias, R. A., Shreiber, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+dura+mater+from+the+rat+brain+and+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of dura mater from the rat brain and spinal cord.</a> Journal of neurotrauma. 25 (1), 38-51 (2008).</li>
<li>Garcia, A. D., Doan, N. B., Imura, T., Bush, T. G., Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFAP-expressing+progenitors+are+the+principal+source+of+constitutive+neurogenesis+in+adult+mouse+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GFAP-expressing progenitors are the principal source of constitutive neurogenesis in adult mouse forebrain.</a> Nat Neurosci. 7 (11), 1233-1241 (2004).</li>
<li>Garcia, A. D., Petrova, R., Eng, L., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+hedgehog+regulates+discrete+populations+of+astrocytes+in+the+adult+mouse+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sonic hedgehog regulates discrete populations of astrocytes in the adult mouse forebrain.</a> J Neurosci. 30 (41), 13597-13608 (2010).</li>
<li>Amat, J. A., Ishiguro, H., Nakamura, K., Norton, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+diversity+and+kinetics+of+proliferating+microglia+and+astrocytes+following+cortical+stab+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Phenotypic diversity and kinetics of proliferating microglia and astrocytes following cortical stab wounds.</a> Glia. 16 (4), 368-382 (1996).</li>
<li>Hozumi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+prosaposin+ameliorates+spatial+learning+disturbance+and+reduces+cavity+formation+following+stab+wounds+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Administration of prosaposin ameliorates spatial learning disturbance and reduces cavity formation following stab wounds in rat brain.</a> Neuroscience letters. 267 (1), 73-76 (1999).</li>
<li>Ness, R., David, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptomeningeal+cells+modulate+the+neurite+growth+promoting+properties+of+astrocytes+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Leptomeningeal cells modulate the neurite growth promoting properties of astrocytes in vitro.</a> Glia. 19 (1), 47-57 (1997).</li>
<li>Byrnes, K. R., Fricke, S. T., Faden, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathological+differences+between+rats+and+mice+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+magnetic+resonance+imaging+%3A+JMRI%22%5BJournal%5D)">Neuropathological differences between rats and mice after spinal cord injury.</a> Journal of magnetic resonance imaging : JMRI. 32 (4), 836-846 (2010).</li>
<li>Steward, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+approaches+to+neurotrauma+research%3A+opportunities+and+potential+pitfalls+of+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">Genetic approaches to neurotrauma research: opportunities and potential pitfalls of murine models.</a> Experimental neurology. 157 (1), 19-42 (1999).</li>
<li>Davalos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+mediates+rapid+microglial+response+to+local+brain+injury+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo.</a> Nature neuroscience. 8 (6), 752-758 (2005).</li>
<li>Hanisch, U. -K., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%3A+active+sensor+and+versatile+effector+cells+in+the+normal+and+pathologic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Microglia: active sensor and versatile effector cells in the normal and pathologic brain.</a> Nature neuroscience. 10 (11), 1387-1394 (2007).</li>
<li>Neumann, H., Kotter, M. R., Franklin, R. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Debris+clearance+by+microglia%3A+an+essential+link+between+degeneration+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Debris clearance by microglia: an essential link between degeneration and regeneration.</a> Brain. 132 (2), 288-295 (2008).</li>
<li>Nimmerjahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+Microglial+Cells+Are+Highly+Dynamic+Surveillants+of+Brain+Parenchyma+in+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resting Microglial Cells Are Highly Dynamic Surveillants of Brain Parenchyma in Vivo.</a> Science. 308 (5726), 1314-1318 (2005).</li>
<li>Horn, K. P., Busch, S. A., Hawthorne, A. L., van Rooijen, N., Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Another+Barrier+to+Regeneration+in+the+CNS%3A+Activated+Macrophages+Induce+Extensive+Retraction+of+Dystrophic+Axons+through+Direct+Physical+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Another Barrier to Regeneration in the CNS: Activated Macrophages Induce Extensive Retraction of Dystrophic Axons through Direct Physical Interactions.</a> Journal of Neuroscience. 28 (38), 9330-9341 (2008).</li>
<li>Ip, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Cells+Contribute+to+Myelin+Degeneration+and+Axonopathic+Changes+in+Mice+Overexpressing+Proteolipid+Protein+in+Oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Immune Cells Contribute to Myelin Degeneration and Axonopathic Changes in Mice Overexpressing Proteolipid Protein in Oligodendrocytes.</a> Journal of Neuroscience. 26 (31), 8206-8216 (2006).</li>
<li>Perry, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+systemic+inflammation+to+chronic+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Contribution of systemic inflammation to chronic neurodegeneration.</a> Acta neuropathologica. 120 (3), 277-286 (2010).</li>
<li>McKeon, R. J., Jurynec, M. J., Buck, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chondroitin+sulfate+proteoglycans+neurocan+and+phosphacan+are+expressed+by+reactive+astrocytes+in+the+chronic+CNS+glial+scar%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The chondroitin sulfate proteoglycans neurocan and phosphacan are expressed by reactive astrocytes in the chronic CNS glial scar.</a> Journal of Neuroscience. 19 (24), 10778-10788 (1999).</li>
<li>Silver, J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+beyond+the+glial+scar%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Regeneration beyond the glial scar.</a> Nature reviews. Neuroscience. 5 (2), 146-156 (2004).</li>
<li>Zamanian, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+analysis+of+reactive+astrogliosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genomic analysis of reactive astrogliosis.</a> J Neurosci. 32 (18), 6391-6410 (2012).</li>
<li>Buffo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+progeny+of+reactive+gliosis%3A+A+source+of+multipotent+cells+in+the+injured+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Origin and progeny of reactive gliosis: A source of multipotent cells in the injured brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (9), 3581-3586 (2008).</li>
<li>Sirko, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+glia+in+the+injured+brain+acquire+stem+cell+properties+in+response+to+sonic+hedgehog.+%5Bcorrected%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Reactive glia in the injured brain acquire stem cell properties in response to sonic hedgehog. [corrected].</a> Cell stem cell. 12 (4), 426-439 (2013).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

فمن الأهمية بمكان أن الجمجمة أو الجافية الأساسية لا تلف أثناء الحفر. استخدام الضغط الخفيف أثناء الحفر لضمان الجمجمة لم يتم ثقب. بالإضافة إلى ذلك، يجب توخي الحذر في حين رفع قطعة الجمجمة لضمان الجافية لا انطلق مع العظم. إصابة الدماغ الأمامي طعنة وصفت هنا نماذج من اصابة في اختراق إلى الجهاز العصبي المركزي. وإن كان أقل للترجمة سريريا من النماذج المصرف التجاري العراقي مثل FPI أو CCI، يخدم نموذج آفة الدماغ الأمامي طعنة...

التحدي الرئيسي لتطوير علاجات ناجحة لعلاج الجهاز العصبي المركزي المصاب هو الفهم غير الكامل للأحداث المعقدة متعددة الخلايا التي تسببها الصدمة. تكتسب الخلايا النجمية التفاعلية اعترافا متزايدا كهدف واعد للعلاجات الجديدة1. على الرغم من اعتبارها تاريخيا معادية للإصلاح العصبي ، إلا أن الخلايا النجمية التفاعلية معترف بها الآن كمكونات حاسمة لاستجابة وقائية عصبية معقدة ومتعددة الخلايا تتضمن توهين العمليات الالتهابية والحد من الضرر الثانوي والتنكس العصبي2-6. على الرغم من أن الخصائص العصبية المرضية للداء الدبقي التفاعلي قد تم تحديدها جيدا منذ فترة طويلة ، إلا أن الآليات الخلوية والجزيئية التي تنظم الدبق التفاعلي ، ومجموعة متنوعة من العواقب النهائية لا تزال غير مفهومة جيدا. يعد فهم الآليات التي تدفع الدبقي التفاعلي ، بالإضافة إلى الأحداث الخلوية والجزيئية اللاحقة ، خطوة مهمة نحو تطوير استراتيجيات تهدف إلى تعزيز الخصائص العصبية للدبقي التفاعلي ، مع تخفيف الآثار الضارة. 
 نوضح هنا طريقة للحث على الداء الفلكي التفاعلي الشديد في الدماغ الأمامي للفئران البالغة باستخدام إصابة طعنة. على عكس نماذج إصابات الدماغ الرضحية الأخرى (TBI) ، مثل التأثير القشري المتحكم فيه (CCI) أو إصابة الإيقاع السائل (FPI) ، والتي تتطلب معدات متخصصة لإحداث إصابة ، فإن طعنة الدماغ الأمامي لا تتطلب سوى جهاز تجسيمي لتثبيت الرأس وشفرة مشرط رقم 11. وبالتالي ، فإن نموذج آفة طعنة الدماغ الأمامي متاح على نطاق أوسع لمجموعة واسعة من المختبرات التي لا يمكنها الوصول إلى الأجهزة المتخصصة اللازمة لإنشاء إصابة FPI أو CCI. تمكن الطريقة الموضحة هنا الباحثين من تحفيز استجابة دبقية قوية بشكل موثوق ومتكرر للتحقيق في الأحداث الخلوية والجزيئية اللاحقة. بمجرد التعافي من الجراحة ، يمكن للحيوانات التي تعرضت لإصابة طعنة في الدماغ الأمامي البقاء على قيد الحياة لفترات طويلة دون الحاجة إلى رعاية متخصصة ويمكن إعادتها إلى المستعمرة لإجراء دراسات حادة أو متوسطة أو مزمنة. على الرغم من أنها أقل قابلية للترجمة سريريا من نماذج FPI أو CCI لإصابات الدماغ الرضية ، إلا أن آفة الدماغ الأمامي الناتجة عن إصابة طعنة تعمل كنموذج تجريبي بسيط ولكنه مفيد للتحقيق في الآليات البيولوجية الأساسية الكامنة وراء الدبقية التفاعلية والأحداث العصبية المرضية الأخرى بعد صدمة الجهاز العصبي المركزي.

<table><tbody><tr><td>Stereotax</td><td>Harvard Apparatus</td><td>726049</td><td></td></tr><tr><td>مثقاب صغير عالي السرعة</td><td>جهاز هارفارد</td><td>724950</td><td></td></tr><tr><td>شفرة مشرط من الفولاذ المقاوم للصدأ ، # 11</td><td>MedVet</td><td>JOR581S</td><td></td></tr><tr><td>5/45 ملقط بزاوية</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>إسفنجة جل فوم 12 سم × 7 مم</td><td>فيشر</td><td>NC9841478</td><td></td></tr><tr><td>Rb مضاد ل GFAP</td><td>DAKO</td><td>&nbsp; Z033429-2</td><td>التخفيف - 1: 20،000 (مجال ساطع) ؛ 1: 1،000 (تألق) Shp</td></tr> <tr><td>anti-BrdU</td><td>Abcam</td><td>ab1893</td><td>التخفيف - 1: 20،000 (حقل ساطع) ؛ 1: 500 (تألق)</td></tr> <tr><td>مختبرات ناقلات</td> <td>الماعز المضادة للأرانب</td><td>BA-1000 & nbsp ؛</td><td>التخفيف - 1: 400 (المجال الساطع)</td></tr><tr><td>مختبرات ناقلات</td> <td>الأرانب المضادة للأغنام البيوتينيل</td><td>BA-6000</td><td>التخفيف - 1:400 (حقل ساطع)</td></tr><tr><td>Alexafluor 488 الماعز المضاد للأرانب</td><td>تقنيات الحياة</td><td>A-11008</td><td>التخفيف - 1: 400 (حقل ساطع)</td></tr> <tr><td>Alexafluor 568 الحمار المضاد للأغنام</td><td>تقنيات الحياة</td><td>A-21099</td><td>التخفيف - 1: 1,000 (تألق)</td></tr> <tr><td>DAPI تقنيات حياة بقع الحمض</td><td></td> النووي <td>D3571</td><td>التخفيف - 1: 1,000 (تألق)</td></tr><tr><td>Cresyl Violet Acetate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C5042-10G</td><td>التخفيف - 1٪ (مجال ساطع)</td></tr></tbody></table>

مما اثار رد الفعل دباق<em&gt; في فيفو</em&gt; من الدماغ الأمامي الطعنة الإصابات

Triggering Reactive Gliosis In Vivo by a Forebrain Stab Injury

بعد إصابة الجهاز العصبي المركزي ، تخضع الخلايا النجمية لمجموعة واسعة من التغيرات الكيميائية الحيوية والمورفولوجية والجزيئية التي يشار إليها مجتمعة باسم النجمي التفاعلي. تمارس الخلايا النجمية التفاعلية تأثيرات التهابية ووقائية تمنع وتعزز ، على التوالي ، الإصلاح العصبي. الآليات الكامنة وراء الخصائص الوظيفية المتنوعة للداء النجمي التفاعلي ليست مفهومة جيدا. يعد تحقيق فهم أكبر لهذه الآليات أمرا بالغ الأهمية لتطوير استراتيجيات علاجية لعلاج الجهاز العصبي المركزي المصاب. نوضح هنا طريقة لتحفيز الداء الفلكي التفاعلي في الدماغ الأمامي للفأر البالغ باستخدام آفة طعنة في الدماغ الأمامي. نموذج الآفة هذا بسيط وموثوق به ولا يتطلب سوى جهاز تجسيمي وشفرة مشرط لإحداث الإصابة. إن استخدام آفات الطعن كنموذج للإصابة في الدماغ الأمامي راسخ وقابل للدراسات التي تتناول مجموعة واسعة من النتائج المرضية العصبية ، مثل تنكس الخلايا العصبية والالتهاب العصبي والاضطرابات في الحاجز الدموي الدماغي (BBB). وبالتالي ، فإن نموذج إصابة طعنة الدماغ الأمامي بمثابة أداة قوية يمكن تطبيقها على مجموعة واسعة من الدراسات حول استجابة الجهاز العصبي المركزي للصدمة.

لأن الحيوانات تمر هذا الإجراء لا يتطلب تدرج فترات بقاء المتخصصة الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية، قصيرة أو طويلة الأجل بسهولة في الدراسة، وهذا يتوقف على الحاجة إلى تحقيق أمراض حادة أو مزمنة بعد الاصابة. الملامح الرئيسية لدباق رد الفعل، مثل upregulation من GFAP وتضخم في سوما، يمكن ملاحظة في أقرب وقت 2-3 أيام بعد الإصابة. مرحلة الذروة من انتشار الخلايا النجمية لرد الفعل هو خلال أيام 3-5 بعد إصابة 10. نتائج التمثيلية المبينة أدناه هي من الحيوانات التي تلقت طعنة الجرح الآف...

تصف هذه المقالة بروتوكولا مفصلا لإحداث إصابة طعن في الدماغ الأمامي في الفئران البالغة. تؤدي إصابة الطعنة إلى الإصابة بالدبقي التفاعلي الشديد وتكوين ندبة الدبقية التي يمكن فحصها لاحقا بواسطة طرق الكيمياء المناعية القياسية.

Following injury to the CNS, astrocytes undergo a broad range of biochemical, morphological, and molecular changes collectively referred to as reactive ...

الهدف العام من التجربة التالية هو تحفيز الدباق النجمي التفاعلي في الدماغ الأمامي للفأر البالغ عن طريق إحداث إصابة ميكانيكية، وذلك بهدف استقصاء العمليات الخلوية والجزيئية التي تكمن وراء الدباق التفاعلي. ويتم تحقيق ذلك من خلال إجراء عملية ثقب الجمجمة ومن ثم إدخال شفرة مشرط معقمة بعمق وطول يتراوح بين 3 إلى 4 مليمترات في الدماغ الأمامي لإحداث الإصابة. يمكن للحيوانات البقاء على قيد الحياة لنقاط زمنية حادة أو مزمنة، ويتم جمع أنسجتها عند اختتام التجربة.يمكن بعد ذلك معالجة النسيج لإجراء فحوصات نسيجية أو كيميائية حيوية أو بيولوجيا جزيئية لاستقصاء العمليات الجزيئية والخلوية التي تحفز الدباق التفاعلي. وتظهر النتائج أن هذا الإجراء يثير حالة قوية من الدباق التفاعلي بناءً على الارتفاع الملحوظ في تنظيم GFAP وتكاثر الخلايا النجمية التفاعلية. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الأخرى مثل إصابة الطرق المائعي، أو الارتطام القشري المتحكم به، في إمكانية تحفيز الدباق التفاعلي ودراسته بسهولة دون الحاجة إلى معدات إضافية.لبدء هذا الإجراء، قم بتطهير طاولة الجراحة بـ 70%ethanol، ثم غطِّ منضدة الجراحة بأكملها ببطانات ماصة ورتب الأدوات الجراحية على طاولة الجراحة. بعد ذلك، قم بتجهيز معدات التوجيه المجسم (stereotaxic) بدون ذراع المناول. ضع وسادة التسخين على إطار التوجيه المجسم واضبطها على 37 °C.تجن

triggering-reactive-gliosis-in-vivo-by-a-forebrain-stab-injury

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

يوضح هذا الفيديو إجراء إصابة الطعن القشري في الفئران ، بما في ذلك التعرض للجمجمة وتكوين آفة في الدماغ. إنه يحفز النجمي التفاعلي ، وهو استجابة وقائية عصبية للخلايا النجمية ، لدراسة صدمة الجهاز العصبي المركزي والالتهابات وآليات الإصلاح.

توليد إصابة طعنة قشرية في نموذج الفأر للحث على النجمة التفاعلية

ويوصف نموذج باستخدام اليرقات إصابة الحبل العصبي البطني ذبابة الفاكهة للتحقيق المركزية تجديد الجهاز العصبي والإصلاح. طعن تليها الليزر المجهر متحد البؤر في الوقت الفاصل بين العينات والثابتة، بالإضافة إلى التحليل الكمي مع البرمجيات المتقدمة هادف وعلم الوراثة، وتستخدم للتحقيق في الآليات الجزيئية للتجديد وإصلاح CNS.

والنموذج الإصابات المعنية بالتحقيق في وسط الجهاز العصبي في إصلاح<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

الصدمة الدماغ الحاد هو إصابة الشديدة التي لا يوجد لديه العلاج المناسب حتى الآن. Multiphoton المجهري يسمح دراسة طوليا عملية التنمية الصدمة الدماغ الحادة وسبر الاستراتيجيات العلاجية في القوارض. وأظهرت نموذجين من الصدمة الدماغ الحادة درس في الجسم الحي مع اثنين من الفوتون التصوير من الدماغ في هذا البروتوكول.

الصدمة الحادة الدماغ في الفئران تليها الطولية التصوير ثنائي الفوتون

يمكن استخدام الخلايا النجمية من النوع البري الظاهري والخلايا الجذعية العصبية التي تم حصادها من الفئران المصممة باستخدام أليلات مسرطنة مشروطة ومحولة عن طريق إعادة التركيب الفيروسي بوساطة Cre لنمذجة التسبب في الورم النجمي في المختبر وفي الجسم الحي عن طريق الحقن التقويمي للخلايا المحولة في أدمغة زملاء القمامة المتخصصين في المناعة.

النمذجة الخلايا النجمية إمراض في المختبر و في فيفو استخدام القشرية النجمية أو الخلايا الجذعية العصبية من الشرطي، الفئران المهندسة وراثيا

يمكن استخدام التصوير داخل الفوتون للتحقيق في التفاعلات بين أنواع الخلايا المختلفة في الحبل الشوكي في بيئة الأنسجة الأصلية في خيميري نخاع العظم مصاب بإصابة سحق الحبل الشوكي الظهري.

التصوير حيوي داخلي من محور عصبي التفاعل مع الخلايا الدبقية الصغيرة والضامة في ماوس الظهرية الإصابات سحق العمود

يصف هذا البروتوكول المنهجي نموذجًا جديدًا للصرع ما بعد الصدمة بعد إصابات الدماغ الخفيفة المتكررة. الجزء الأول تفاصيل خطوات لتحريض إصابات الدماغ الرضية باستخدام نموذج انخفاض الوزن المعدلة. ويقدم الجزء الثاني تعليمات بشأن النهج الجراحي لنظم الحصول على البيانات الكهروالدماغة أحادية ومتعددة القنوات.

تحريض الصرع ما بعد الصدمة في نموذج الماوس من إصابات الدماغ المتكررة منتشر الصدمة

نحن نصف حقن داخل الجمجمة التي تستخدم إبرة عازمة في الطرف التي يمكن تثبيتها في الجمجمة، وبالتالي القضاء على خطر تلف parenchyma الكامنة. ويمكن استخدام هذا النهج لرسم خرائط المصير الوراثي والتلاعب في الخلايا اللولبية وتتبع حركة السائل النخاعي.

تحريض الخلايا اللبتومينينالتي تعديل عن طريق الحقن داخل الجمجمة

يصف البروتوكول إصابات الدماغ الرضحية الخفيفة في نموذج الفأر. على وجه الخصوص ، يتم شرح بروتوكول خطوة بخطوة للحث على إصابة خفيفة في الرأس المغلق في خط الوسط وتوصيف النموذج الحيواني بشكل كامل.

نموذج مغلق الرأس يتم التحكم فيه كهرومغناطيسيا لإصابات الدماغ الرضحية الخفيفة في الفئران

توضح هذه الدراسة تسليم إصابة دماغية رضحية متكررة للفئران وزرع متزامن لنافذة الجمجمة للتصوير اللاحق داخل الجسم ل EGFP المعبر عنه بالخلايا العصبية باستخدام المجهر ثنائي الفوتون.

التصوير داخل الجسم لتعبير البروتين الفلوري في الفئران المصابة بإصابة دماغية رضحية مغلقة الجمجمة ونافذة الجمجمة باستخدام مجهر ثنائي الفوتون

سهلت نماذج إصابات الدماغ الرضحية المبسطة (TBI) تطوير الأساليب العلاجية. يحدد هذا البروتوكول إنشاء قشرة فأر جرح طعنة باستخدام الإبر ، مما يتيح تحليل النزيف والالتهابات. يوفر نموذج ماوس TBI المصنوع من الطعن ميزة إجراؤه دون الحاجة إلى معدات متخصصة.

نموذج فأر الطعن الجرح لدراسة النزيف والالتهاب في إصابات الدماغ الرضحية

هنا ، نقدم منهجية مفصلة لعزل شبكية العين عن عين الفأر لإجراء تجارب ممتدة خارج الجسم الحي . يؤكد هذا البروتوكول على جعل هذا النهج المتطلب تقنيا متاحا للباحثين الذين يرغبون في الاستفادة من سبل البحث التي يوفرها الحفاظ على الخلايا الدبقية في الشبكية في الموقع في الأنسجة الحية.

نموذج Ex Vivo Explant لدراسة التفاعلات الدبقية في شبكية العين الفأر

تعلم إحداث التهاب النجمة العصبية التفاعلي في الدماغ الأمامي للفأر البالغ باستخدام إصابة طعنية. تُظهر النتائج زيادة كبيرة في تعبير GFAP وتكاثر الخلايا النجمية التفاعلية.

مما اثار رد الفعل دباق

استكشف المزيد من الفيديوهات