A "المريض مثل" مثلي مسانج نموذج الفأر من سرطان الكبد الانبثاث

انتشار النقيلي من السرطان هو السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان. ونحن نقدم وصفا متعمقة لمنهجية عملية جراحية بقائنا لإنشاء نظام نموذجي الماوس مسانج مثلي "المريض مثل" لدراسة آليات الانبثاث في أورام الجهاز الصلبة.

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء مريض مثل نظام نموذج الفأر المتلازمة لدراسة آليات ورم خبيث في سرطان الخلايا الكبدية. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحضير خلايا سرطان الخلايا الكبدية في الفأر أولا للزرع. في الخطوة الثانية ، يتم فتح بطن متزامن متلقي ويتم حقن الخلايا بعناية في الفص الأيمن من الكبد.

في النهاية ، يوصي نجاح هذه المنهجية وقابليتها للتكرار باستخدامها على نطاق واسع في توضيح الآليات البيولوجية لرم خبيث سرطان الخلايا الكبدية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على التقنيات الحالية مثل نماذج أورام الطعم الجيني للفأر ، هي أن نظام نموذج الورم الجيني المتزامن يسمح بالتحقيق في دور الاستجابة المناعية في ورم خبيث للورم. ستوضح هذا الإجراء معي ميشيل نادو ، طالبة جامعية من مختبرنا لتحضير الخلايا للزرع ، ابدأ بغسل 60 إلى 70٪ من خلايا سرطان الخلايا الكبدية مرتين مع خمسة ملليلتر من PBS.

احتضان مزرعة الخلية بملليلترين من التربسين عند 37 درجة مئوية. بعد خمس دقائق ، عد الخلايا وقم بتخفيفها بخمس مرات 10 إلى الخلايا الخامسة لكل مليلتر من PBS. بعد ذلك ، قم بنقل 100 ميكرولتر من الخلايا إلى أنبوب طرد مركزي دقيق معقم سعة 1.5 مل لكل فأر ، ووضع الخلايا على الجليد.

قبل البدء في العملية الجراحية ، تأكد من المستوى المناسب للتخدير عن طريق إصبع القدم. قرصة ، ضع مرهما على عيون فأر بالغ سليم من 16 إلى 20 جراما واحلق في منطقة بوصة واحدة تقريبا حول خط الوسط من بطن. ثم فجر زوج من قفازات اللاتكس واغسل الجلد المكشوف عدة مرات باستخدام مقشر مطهر بالصابون ، متبوعا بشطف معقم من PBS لمدة خمس دقائق تقريبا.

عندما يتم تحضير الجلد ، تخلص من القفازات وارتد معدات الحماية الشخصية المناسبة. توفير مصدر حرارة خارجي لمنع انخفاض حرارة الجسم المخدر أثناء العملية ، ثم وضع شريط جراحي على وأطرافه وذيله لتثبيت الفأر في وضع ضعيف. بعد ذلك ، قم بعمل شق مستقيم أدنى مباشرة من عظم القص الحجري ، واستخدم ضام جراحي معقم ذاتي الاحتفاظ لفتح البطن.

عندما يكون الكبد مرئيا ، قم بشفط كمية واحدة من الخلايا في حقنة سعة مليلتر واحد مزودة بإبرة قياس 20 ، وقم بحقن كل 100 ميكرولتر من خلايا سرطان الخلايا الكبدية ببطء وحذر في الفص الأيمن من الكبد. بعد إزالة الإبرة ، ضع قطعة قطن معقمة لمدة دقيقة واحدة على الأقل لوقف أي نزيف. ثم استخدم خياطة قابلة للامتصاص لإغلاق الأنسجة تحت الجلد ، متبوعا بإغلاق الجلد.

باستخدام المشابك الجراحية ، قم بتنظيف الجرح بمقشر مطهر آخر وتحت الجلد ، قم بإدارة 100 ميكرولتر من المحلول الملحي العادي. ثم مباشرة بعد الجراحة ، انقل الفأر إلى قفص نظيف بدون مرافقين وبفراش ورقي لمدة 24 ساعة على الأقل. تم زرع كبد الفأر BSY هذا بخمسة أضعاف 10 إلى ستة واحد ME. خلايا سرطان الخلايا الكبدية في الفأر كما هو موضح للتو.

كان من الممكن ملاحظة الأدلة السريرية السريرية على تطور سرطان الخلايا الكبدية بعد 63 يوما كما هو موضح بالسهم في فأر واحد. لوحظ وجود ورم سطحي على سطح الكبد مع بعض التعلق بجدار البطن. أظهرت رئتا هذا الفأر مورفولوجيا غير طبيعية بالإضافة إلى عرض مناطق نخر نزيف مرئي.

في الفأر الثاني ، بدا الكبد غير طبيعي بشكل صارخ مع وجود شذوذ يشبه إلى حد كبير الورم السطحي كما هو متوقع للتحكم الفئران التي لم يتم زرعها لم تصاب بأورام في الكبد أو الرئتين. بمجرد إتقانه ، يمكن أن يوفر نموذج الفأر الجيني المتعامد هذا منصة جيدة لتوضيح الآليات البيولوجية للورم الخبيث وسرطان الخلايا الكبدية.