Name: جيل من التذبذبات CA1 γ المحلية من خلال تحفيز كزازي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: اكتشف طريقة تحضير شرائح الدماغ لتسجيل تذبذبات جاما في منطقة CA1 كنموذج للاستثارة العصبية. تُستخدم هذه التقنية لتقييم تأثير الأدوية على وظيفة الشبكة العصبية وفهم آليات الأمراض العصبية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

بدعم من APA إلى RJH ، 400121 منح برنامج NHMRC إلى SP ، وزمالة NMHRC 1005050 إلى SP. يقر CAR بدعم ARC (FT0990628) وبرنامج زمالة DOWD. يتم دعم معهد فلوري لعلم الأعصاب والصحة العقلية من قبل أموال البنية التحتية لحكومة ولاية فيكتوريا.

تمت الموافقة على جميع التجارب على الفئران قبل لجنة الأخلاق الحيوانية معهد فلوري. 1. إعداد لقطع شرائح الدماغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول القطع تتألف من (ملم) 125 الكولين-CL، 2.5 بوكل، 0.4 CaCl 2، 6 MgCl 2، 1.25 ناه 2 ص 4، 26 NaHCO 3، 20 D-الجلوكوز مشبعة بالغاز كربوجين (95٪ O 2 -5 ٪ CO 2)، والسائل النخاعي الاصطناعي (حل ACSF) تسجيل تتألف من (ملم) 125 كلوريد الصوديوم، و 2.5 بوكل، 2 CaCl 2، 2 MgCl 2، 1.25 ناه 2 ص 4، 26 NaHCO 3، 10 D-الجلوكوز، مشبعة كربوجين. وضع حل القطع على الجليد لإبقائه باردا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميد حوالي 400 مل من محلول القطع والمزج مع 100 مل من محلول القطع رفع التجميد لخلق الطين الجليد. فقاعة مع كربوجين (95٪ O 2 -5٪ CO 2) في تدفق ما يقرب من 0.5 لتر / دقيقة عن طريق ج الصغيرةaliber أنابيب أو الزجاج متكلس لإنتاج تدفق ثابت ولكن لطيف من الفقاعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد كوب 250 مل مع رفع إدراج شبكة من النايلون التي سيتم وضعها على شرائح الدماغ. ملء مع ACSF لتغطية شبكة بحوالي 2 سم وفقاعة مع كربوجين، وضمان أن الفقاعات لا يعطل مباشرة مساحة الشريحة القابضة. ومن المهم أيضا أن عدم وجود فقاعات الهواء في شبكة من النايلون، لذلك إن وجدت موجودة إزالتها. وستكون هذه الغرفة القابضة ويتم الاحتفاظ بها في RT (20-25 درجة مئوية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخطيط الصكوك تشريح بما في ذلك زوج كبير من مقص، وزوج من مقص صغير، ملاعق صغيرة صغيرة وكبيرة، وأزواج الكبيرة والصغيرة من الملقط والبرد منهم على الجليد. وضع كتلة قطع الأنسجة vibratome على الجليد على الساحة من رقائق الألومنيوم. الحصول على 2 قطعة من 6 سم رقة الترشيح، واحدة حافة شفرة الحلاقة، ودورق 25 مل مليئة الطين حل القطع كذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء الحاويات الثانية مع الثلج، ووضع قطعة من حلمة الثدي النسيجإيه على الجليد ووضع صحن الثقافة 12 سم على القمة. ملء الطبق الثقافة مع قطع حل الطين الجليد وفقاعة مع كربوجين. هذا هو الحاوية التي تشريح الدماغ مع أن يؤديها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد vibratome. إزالة مزدوجة شفرة حلاقة جديدة حدين (استخدام شفرة جديدة في كل مرة) من الالتفاف ورذاذ مع 80٪ من الإيثانول الماء ثم منزوع الأيونات. قطع 3 مل من البلاستيك ماصة نقل عند النقطة التي يبدأ في الاضمحلال. وسوف تستخدم هذه لنقل شرائح الدماغ. بيند 27 G إبرة في قاعدة بحوالي 45 درجة ونعلق على حقنة 1 مل. وسوف تستخدم هذه للتلاعب شرائح خلال عدة قطاعات. </li></ol> 2. قطع شرائح الدماغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير ماوس (P16 - P18) مع 2٪ الأيزوفلورين أو طريقة معتمدة محليا. بعد الاستقراء، وقطع رأس الحيوان مع زوج كبير من مقص وإسقاط رئيس في طبق ثقافة 12 سم يحتوي على فقاعات الطين حل القطع. الطين يجب أن تزج تماما الرأس لالتبريد السريع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد الجزء الأمامي من الرأس بيد واحدة تقشير الجلد والنسيج الضام إلى الأمام نحو الأنف. باستخدام مقص صغير قطع النسيج الضام للكشف عن الجمجمة الأساسية. ثم إزالة العضلات التي تغمر الجانب الظهري من الجمجمة والعنق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الدماغ من الجمجمة عن طريق تأمين لأول مرة أمام الجمجمة مع ملقط كبيرة ومن ثم جعل اثنين من التخفيضات الجانبية من خلال العظام جانبي ماغنوم الثقبة باستخدام مقص صغير (الشكل 1، والتخفيضات وصفت A1 و A2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل قطع أخرى بين العينين (فقط الأمامي من bregma) (الشكل 1، وقطع المسمى B) ثم قطع بعناية على طول الدرز السهمي الأمامية وتعكس أقسام قطع الجمجمة للكشف عن الدماغ (الشكل 1، وقطع المسمى C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملعقة صغيرة ليستخرج الدماغ ومكان على طبق الثقافة. يكون على بينة من كراالأعصاب الاتحاد العالمي للتعليم على الجانب السفلي من الدماغ والتي سوف تحتاج إلى أن تنقطع، وهذا يمكن أن يتم ذلك باستخدام ملعقة صغيرة صغيرة الحجم. باستخدام ملعقة الأكبر نقل الدماغ على الدورق 25 مل مليئة الطين حل القطع. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد المخ في نصف الكرة للتشريح. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطعة واحدة من ورقة الترشيح 6 سم في الجزء السفلي من طبق ثقافة جديدة ثم ملء مع الطازجة الطين حل القطع وفقاعة. استخدام الملعقة الكبيرة لوضع الدماغ، الجانب البطني أسفل، على ورقة الترشيح. اتخاذ حافة واحدة شفرة حلاقة جديدة وتنظيفها وقطع الدماغ لإزالة المخيخ، ثم اجراء خفض على طول خط منتصف لفصل المخ إلى نصفين. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد كتلة الأنسجة vibratome. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ المبردة كتلة الأنسجة vibratome، يجف السطح، ووضع قطرة من الغراء cyanoacrylate في الوسط، وتنتشر بالتساوي على الحجم التقريبي للدماغ. استخدام ملعقة صغيرة لمعالجة واحدة مننصفي الدماغ على ملعقة صغيرة كبيرة جدا على الجانب الإنسي من الدماغ هو أسفل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تلمس حافة الملعقة في واجهة الدماغ على القطعة الثانية من ورق الترشيح لإزالة أكبر قدر من حل ممكن. حرك الدماغ قبالة ملعقة أكبر باستخدام ملعقة صغيرة لترشدها على الغراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين كتلة قطع في غرفة vibratome وملء الغرفة مع الطين حل القطع وفقاعة، بما يضمن مغمورة المخ تماما. تدوير كتلة قطع ذلك الجانب البطني من الدماغ يواجه النصل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الدماغ. ملاحظة: كل vibratome هو فريد من نوعه اتبع تعليمات الشركة الصانعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين سمك شريحة إلى 450 ميكرومتر، وضمان شفرة تهتز وهي تتحرك من خلال الدماغ بسرعة حوالي 0.3 ملم / ثانية. قطع تماما من خلال الدماغ من الجانب البطني إلى السطح القشري، وهذا سوف ينتج الدماغ شرائح السهمي كلها التي يمكن بالبريد المستخدمة في التسجيلات الكهربية. وسيتم إنتاج شرائح أفقيا إلى إعلامي وعادة 3-4 شرائح يمكن قطع كل من نصف الكرة الغربي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كانت قاعدة المصاعد شريحة تستخدم عازمة 27 G الإبرة إلى الصحافة لطيف شريحة أسفل الظهر. كما هو قطع كل شريحة، استخدم ماصة نقل لنقله على منصة في غرفة القابضة حيث أنها قابلة للحياة لمدة تصل إلى 8 ساعات. </li></ol></li></ol> 3. خارج الخلية الكهربية تسجيلات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تركيب شريحة في غرفة تسجيل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة نقل، ضع شريحة الدماغ إلى غرفة تسجيل المغمورة مع perfused ACSF تتدفق في 1-2 مل / دقيقة ويسخن إلى 32 درجة مئوية. وACSF المستخدمة للتسجيلات يختلف عن ذلك في غرفة القابضة كما يتم زيادة المغنيسيوم 2+ تركيز من 2 مم إلى 4 مم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين شريحة مع &quot;القيثارة&quot; (شبه دائري الفولاذ المقاوم للصدأ مع خيوط النايلون تمتد عبر في 2-3 ملم تباعد). مكانالقيثارة بحيث مسارات موازية لCA1. زيادة سرعة نضح إلى 8-10 مل / دقيقة عند 32 ° C. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت المجهر مكان تشريح القطب تحفيز والقطب تسجيل (الزجاج الكهربائي مليئة الحل تسجيل ACSF) على سطح الطبقة المشععة من CA1 (الشكل 2A). وضع القطب تحفيز أولا ثم وضع القطب تسجيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحفيز شافر الضمانات مع 120-150 أمبير السعة و 0.1 مللي ثانية مدتها اختبار النبض ومراقبة مجال آخر مثير متشابك المحتملة (fEPSP) الموجي مما أدى لتحديد صحة شريحة (الشكل 2B). قد تحتاج الأقطاب محفزة وتسجيل ليتم نقلها إلى شريحة حوالي 50-100 ميكرون من سطح شريحة للحصول على fEPSP تسجيل من تسديدة الألياف الصغيرة والسعة الكبيرة. أثار الضمان شافر fEPSPs هي النمطية وتقدم مؤشرا جيدا للصحة شريحة. Hتظهر ealthy شرائح عادة من تسديدة الألياف إلى fEPSP نسبة السعة أقل من 0.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعادة تموضع الأقطاب. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مجهر تشريح، نقل القطب تحفيز لمنتصف الطبقة المتجهة ونقل القطب تسجيل في طبقة الخلايا الهرمية أقرب إلى القطب تسجيل ممكن كما هو مبين في الشكل 3A. قد تحتاج الأقطاب محفزة وتسجيل لتكون دفعت إلى شريحة حوالي 50-100 ميكرون حتى يتسنى للاستجابة السعة fEPSP إلى 120-150 اختبار أمبير نبض حوالي 1 بالسيارات. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليد اهتزازات γ. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتوليد اهتزازات γ تحفيز الأنسجة مع قطار 20 × 0.1 ميللي ثانية البقول تسليمها في 200 هرتز. هذا التحفيز كزازي يمكن أن تسفر عن ردود استنساخه عند تسليم كل 5 دقائق. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المعلمات تسجيل التالية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحجيم مكاسب إشارة خرج لتتناسب مع نطاق الإدخال الجهدالتناظرية إلى المحول الرقمي. تأكد من أن يستخدم الحد الأقصى المتوقع إشارة رحلة لا تقل عن 30٪ من نطاق الإدخال الجهد. كن حذرا عند وضع المكاسب ليصل إشارات قد مقطع. عرض النطاق الترددي نموذجي اللازمة للتسجيلات ميدانية 500 هرتز مع AC اقتران عند 0.1 هرتز لإزالة الانجراف خط الأساس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رقمنة لا يقل عن 4 - 5 مرات أسرع من وتيرة زاوية منخفضة لتمرير مرشح لتجنب إشارة التعرج. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل البيانات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصفية البيانات عالية تمرير في 5 هرتز لإزالة أي تحولات أساسية. تحديد طفرات باستخدام عتبة المشتقة، مع فصل الحد الأدنى الحدث من 10 ميللي ثانية، وهو وقت الحدث نموذجية إلى الذروة وفترة الانحدار من 7 مللي، عتبة ~ 100 فولت / ميللي ثانية، وواد يفصل من 100٪. حساب الكمون مثل الوقت الذي يستغرقه لارتفاع حددت الأول تحدث بعد نهاية قطعة أثرية التحفيز. هذا التحليل يسمح لتوصيف عدد السنابل، الكمون، الفاصل الزمني بين الحدث، والمدة المحسوبة على النحوالتالي: </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب عدد السنابل كما يتم تحديد العدد الإجمالي للارتفاع في التذبذب لكل الاجتياح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب الكمون التذبذب. لكل التذبذب، وطرح الوقت من ارتفاع حددت الأول من نهاية قطعة أثرية التحفيز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب متوسط ​​الفاصل الزمني بين الحدث (ISI). تحديد الفترة الزمنية بين عدة طفرات الكشف عن والمتوسط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب مدة التذبذب. قياس الوقت بين ارتفاع الكشف الأول والأخير في كل التذبذب. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Buzsaki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theta+rhythm+of+navigation%3A+link+between+path+integration+and+landmark+navigation%2C+episodic+and+semantic+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Theta rhythm of navigation: link between path integration and landmark navigation, episodic and semantic memory.</a> Hippocampus. 15 (7), 827-840 (2005).</li>
<li>Vanderwolf, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+electrical+activity+and+voluntary+movement+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Hippocampal electrical activity and voluntary movement in the rat.</a> Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 26 (4), 407-418 (1969).</li>
<li>Bartos, M., Vida, I., Jonas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+mechanisms+of+synchronized+gamma+oscillations+in+inhibitory+interneuron+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic mechanisms of synchronized gamma oscillations in inhibitory interneuron networks.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8 (1), 45-56 (2007).</li>
<li>Buzsáki, G., Wang, X. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+gamma+oscillations%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of gamma oscillations.</a> Annu. Rev. Neurosci. 35, 203-225 (2012).</li>
<li>Kobayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+contribution+to+scalp+EEG+gamma+rhythms+associated+with+epileptic+spasms%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Dev%22%5BJournal%5D)">Cortical contribution to scalp EEG gamma rhythms associated with epileptic spasms.</a> Brain Dev. 35 (8), 762-770 (2013).</li>
<li>Andreou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+Resting-State+Gamma-Band+Connectivity+in+First-Episode+Schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophr+Bull%22%5BJournal%5D)">Increased Resting-State Gamma-Band Connectivity in First-Episode Schizophrenia.</a> Schizophr Bull. , (2014).</li>
<li>Alarcon, G., Binnie, C. D., Elwes, R. D., Polkey, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Power+spectrum+and+intracranial+EEG+patterns+at+seizure+onset+in+partial+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Power spectrum and intracranial EEG patterns at seizure onset in partial epilepsy.</a> Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 94 (5), 326-337 (1995).</li>
<li>Fisher, R. S., Webber, W. R., Lesser, R. P., Arroyo, S., Uematsu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+EEG+activity+at+the+start+of+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">High-frequency EEG activity at the start of seizures.</a> J. Clin. Neurophysiol. 9 (3), 441-448 (1992).</li>
<li>Kwan, P., Brodie, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+identification+of+refractory+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Early identification of refractory epilepsy.</a> N. Engl. J. Med. 342 (5), 314-319 (2000).</li>
<li>Traub, R. D., Kopell, N., Bibbig, A., Buhl, E. H., LeBeau, F. E., Whittington, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctions+between+interneuron+dendrites+can+enhance+synchrony+of+gamma+oscillations+in+distributed+networks%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gap junctions between interneuron dendrites can enhance synchrony of gamma oscillations in distributed networks.</a> J. Neurosci. 21 (23), 9478-9486 (2001).</li>
<li>Traub, R. D., Whittington, M. A., Buhl, E. H., Jefferys, J. G., Faulkner, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+the+gamma+--%3E+beta+frequency+shift+in+neuronal+oscillations+induced+in+rat+hippocampal+slices+by+tetanic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of the gamma --> beta frequency shift in neuronal oscillations induced in rat hippocampal slices by tetanic stimulation.</a> J. Neurosci. 19 (3), 1088-1105 (1999).</li>
<li>Whittington, M. A., Stanford, I. M., Colling, S. B., Jefferys, J. G., Traub, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+patterns+of+gamma+frequency+oscillations+tetanically+induced+in+the+rat+hippocampal+slice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal patterns of gamma frequency oscillations tetanically induced in the rat hippocampal slice.</a> J. Physiol. 502 (3), 591-607 (1997).</li>
<li>Avoli, M., Panuccio, G., Herrington, R., D’Antuono, M., de Guzman, P., Lévesque, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+different+interictal+spike+patterns+anticipate+ictal+activity+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Two different interictal spike patterns anticipate ictal activity in vitro.</a> Neurobiol. Dis. 52, 168-176 (2013).</li>
<li>Boido, D., Jesuthasan, N., de Curtis, M., Uva, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+Dynamics+During+the+Progression+of+Seizure-Like+Events+in+the+Hippocampal-Parahippocampal+Regions%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Network Dynamics During the Progression of Seizure-Like Events in the Hippocampal-Parahippocampal Regions.</a> Cereb Cortex. 24 (1), 162-173 (2014).</li>
<li>Gloveli, T., Albrecht, D., Heinemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+low+Mg2%2B+induced+epileptiform+activity+in+rat+hippocampal+and+entorhinal+cortex+slices+during+adolescence%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Properties of low Mg2+ induced epileptiform activity in rat hippocampal and entorhinal cortex slices during adolescence.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 87 (2), 145-152 (1995).</li>
<li>McLeod, F., Ganley, R., Williams, L., Selfridge, J., Bird, A., Cobb, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+seizure+threshold+and+altered+network+oscillatory+properties+in+a+mouse+model+of+Rett+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reduced seizure threshold and altered network oscillatory properties in a mouse model of Rett syndrome.</a> Neuroscience. 231, 195-205 (2013).</li>
<li>Bracci, E., Vreugdenhil, M., Hack, S. P., Jefferys, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+synchronizing+mechanisms+of+tetanically+induced+hippocampal+oscillations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">On the synchronizing mechanisms of tetanically induced hippocampal oscillations.</a> J. Neurosci. 19 (18), 8104-8113 (1999).</li>
<li>Main, M. J., Cryan, J. E., Dupere, J. R., Cox, B., Clare, J. J., Burbidge, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+KCNQ2%2F3+potassium+channels+by+the+novel+anticonvulsant+retigabine%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Modulation of KCNQ2/3 potassium channels by the novel anticonvulsant retigabine.</a> Mol. Pharmacol. 58 (2), 253-262 (2000).</li>
<li>Wickenden, A. D., Yu, W., Zou, A., Jegla, T., Wagoner, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retigabine%2C+a+novel+anti-convulsant%2C+enhances+activation+of+KCNQ2%2FQ3+potassium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Retigabine, a novel anti-convulsant, enhances activation of KCNQ2/Q3 potassium channels.</a> Mol. Pharmacol. 58 (3), 591-600 (2000).</li>
<li>Otto, J. F., Kimball, M. M., Wilcox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+anticonvulsant+retigabine+on+cultured+cortical+neurons%3A+changes+in+electroresponsive+properties+and+synaptic+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of the anticonvulsant retigabine on cultured cortical neurons: changes in electroresponsive properties and synaptic transmission.</a> Mol. Pharmacol. 61 (4), 921-927 (2002).</li>
<li>Pomper, J. K., Graulich, J., Kovacs, R., Hoffmann, U., Gabriel, S., Heinemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+oxygen+tension+leads+to+acute+cell+death+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">High oxygen tension leads to acute cell death in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 126 (1), 109-116 (2001).</li>
<li>Hatch, R. J., Reid, C. A., Petrou, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+in+vitro+CA1+network+activity+in+a+sodium+channel+%CE%B21%28C121W%29+subunit+model+of+genetic+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Enhanced in vitro CA1 network activity in a sodium channel β1(C121W) subunit model of genetic epilepsy.</a> Epilepsia. 55 (4), 601-608 (2014).</li>
<li>Lord, L. -D., Expert, P., Huckins, J. F., Turkheimer, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+energy+metabolism+and+the+brain%2F%27s+functional+network+architecture%3A+an+integrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral energy metabolism and the brain/'s functional network architecture: an integrative review.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 33 (9), 1347-1354 (2013).</li>
<li>Hájos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintaining+network+activity+in+submerged+hippocampal+slices%3A+importance+of+oxygen+supply%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply.</a> Eur. J. Neurosci. 29 (2), 319-327 (2009).</li>
<li>Hájos, N., Mody, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+physiological+environment+for+visualized+in+vitro+brain+slice+recordings+by+increasing+oxygen+supply+and+modifying+aCSF+content%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishing a physiological environment for visualized in vitro brain slice recordings by increasing oxygen supply and modifying aCSF content.</a> J. Neurosci. Methods. 183 (2), 107-113 (2009).</li>
<li>Boido, D., Jesuthasan, N., de Curtis, M., Uva, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+Dynamics+During+the+Progression+of+Seizure-Like+Events+in+the+Hippocampal-Parahippocampal+Regions%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Network Dynamics During the Progression of Seizure-Like Events in the Hippocampal-Parahippocampal Regions.</a> Cereb Cortex. 24 (1), 163-173 (2012).</li>
<li>Antuono, M., Köhling, R., Ricalzone, S., Gotman, J., Biagini, G., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiepileptic+drugs+abolish+ictal+but+not+interictal+epileptiform+discharges+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Antiepileptic drugs abolish ictal but not interictal epileptiform discharges in vitro.</a> Epilepsia. 51 (3), 423-431 (2010).</li>
<li>Stenkamp, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+temporal+stability+of+cholinergic+hippocampal+gamma+oscillations+following+respiratory+alkalosis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Enhanced temporal stability of cholinergic hippocampal gamma oscillations following respiratory alkalosis in vitro.</a> J. Neurophysiol. 85 (5), 2063-2069 (2001).</li>
</ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

ووصف طريقة قوية لتوليد CA1 التذبذبات γ في شرائح الدماغ الحادة. دعت التذبذبات الناتجة عن الدوائر المحلية مما يتيح فرصة أفضل للمراقبة وفهم الأساس العصبي من التذبذبات شبكة 12. مستقبلات أمبا، GABA A المستقبلات، I ساعة وT-نوع كا 2+ القنوات كلها اللازمة لالتذبذبات γ في هذا النموذج. في حين أن التذبذبات CA1 المحلية الموصوفة هنا يمكن أن تتولد بقوة هذا يعتمد على ضمان أن شرائح الدماغ بصحة جيدة. والخطوة الحاسمة هي الإزالة السريعة من الدماغ من الجمجم...

تحدث اهتزازات الشبكة الدماغ في نطاقات الترددات المختلفة التي ترتبط إلى الدول السلوكية. في القوارض، التذبذبات θ الحصين - ويلاحظ (5 10 هرتز) خلال السلوكيات الاستكشافية 1،2، في حين التذبذبات γ (20-80 هرتز) مع الزميلة العمليات المعرفية المختلفة، بما في ذلك الإدراك والانتباه 3،4. هو متورط متزامن نشاط الشبكة γ أيضا في أمراض اضطرابات مثل الصرع والفصام 5،6. على سبيل المثال، يعتقد أن التذبذبات γ لتتوافق مع مجالات القشرية بؤر صرعية 5،7،8 ويمكن أن تستخدم كعلامات من pharmacosensitivity أو المقاومة، واثنين من المجالات الهامة للتحقيق في أبحاث الصرع 9. شريحة الدماغ الحصين هو النموذج الذي تم استخدامه على نطاق واسع للتحقيق في نشاط الشبكة 10-12. وقد وضعت بروتوكولات مختلفة لتوليد اهتزازات γ في شرائح الدماغ التي عادة ما طnvolve تعديل الدوائي مثل انخفاض المغنيسيوم 2+، 4-aminopyridine (4AP)، bicuculline، وحمض الكايينيك 12-17. أوجه القصور في التذبذبات أثار دواء هي أنها تحدث بشكل عشوائي بعد تطبيق المخدرات ولم يتم إنشاؤها بشكل موثوق أو مستقرة على مر الزمن. أثار كهربائيا التذبذبات γ التغلب على كثير من هذه المشاكل ولها أيضا ميزة حبسهم زمنيا لحدث مثير السماح لتسجيل وتحليل العرضية. هنا يوصف بروتوكول لتوليد اهتزازات CA1 γ من خلال تقديم التحفيز كزازي إلى الطبقة المتجهة في شريحة الحصين.

<table><tbody><tr><td>4- (N-Ethyl-N-phenylamino) -1،2- ثنائي ميثيل -6- (ميثيل أمينو) كلوريد بيريميدينيوم (ZD7288)</td> <td>سيجما ألدريتش</td><td>Z3777</td><td></td></tr><tr><td>Biuculline</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>14340</td><td></td></tr><tr><td>6-سيانو-7-نيتروكينوكسا- الخط -2،3-ديون (CNQX)</td> <td>سيجما ألدريتش</td><td>C127</td><td></td></tr><tr><td>النيكل</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>266965</td><td></td></tr><tr><td>كاربامازيبين</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>C4024</td><td></td></tr> <tr><td>(2R) -أمينو-5-فوسفونوبنتانو-أيت (APV)</td><td>Tocris Bioscience</td><td>0105</td><td></td></tr><tr><td>Retigabine</td><td>ChemPacific</td><td>150812-12-7</td><td></td></tr><tr><td>الكولين-Cl</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>C1879-5KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638-250G</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S6297-250G</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>سيجما-ألدريتش</td><td>S7653-5KG</td><td></td></tr><tr><td>جلوكوز</td><td>سيجما-ألدريتش</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 & 2H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223506-500G</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 & ثور; 6H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670-500G</td><td></td></tr><tr><td>زجاج القطب</td><td>الكهربائي Harvard Apparatus &nbsp;</td><td>GC150F-10</td><td></td></tr> قطب <tr><td>كهربائي معدني محفز ثنائي القطب متحدة المركز&nbsp;</td><td>FHC</td><td>CBBPF75</td><td></td></tr><tr><td>المعزل الرقمي</td><td>الحصول على الأدوات</td><td>موديل BJN8-9V1 &nbsp ؛</td><td></td></tr><tr><td>نموذج 1800 مكبر للصوت</td><td>أنظمة AM</td><td>نموذج 1800 مكبر</td><td></td></tr><tr><td>للصوت محول الأرقام</td><td>الوطنية الدخل</td><td>NI USB-6211</td><td></td></tr><tr><td>Vibrotome</td><td>Leica</td><td>VT1200s</td><td></td></tr></tbody></table>

جيل من التذبذبات ca1 γ المحلية من خلال تحفيز كزازي

Generation of Local CA1 &#947; Oscillations by Tetanic Stimulation

التذبذبات الشبكة العصبية هي السمات الهامة لنشاط الدماغ في الصحة والمرض، ويمكن عن طريق التضمين مجموعة من الأدوية المستخدمة سريريا. ويرد بروتوكول لإنشاء نموذج لدراسة التذبذبات CA1 γ (20-80 هرتز). هذه التذبذبات γ مستقرة لمدة 30 دقيقة على الأقل، وتعتمد على النشاط متشابك مثير والمثبطة بالإضافة إلى تفعيل التيارات جهاز تنظيم ضربات القلب. التذبذبات حفز Tetanically لديها عدد من الخصائص استنساخه وقابلة للقياس بسهولة بما في ذلك عدد السنبلة، مدة التذبذب، الكمون وتردد أن يقدم على حالة الشبكة. وتشمل مزايا التذبذبات حفز كهربائيا الاستقرار، واستنساخ وحيازة عرضية تمكين توصيف قوية وظيفة الشبكة. هذا النموذج من CA1 التذبذبات γ يمكن استخدامها لدراسة الآليات الخلوية والتحقيق بشكل منهجي كيف العصبية شبكة النشاط يتم تبديل في المرض والمخدرات.الصيدلة حالة المرض يمكن إدراجها بسهولة عن طريق استخدام شرائح الدماغ من النماذج الحيوانية المعدلة وراثيا أو التدخلية لتمكين مجموعة من العقاقير التي تستهدف على وجه التحديد آليات المرض.

التحفيز كزازي من الطبقة المتجهة إنشاء قوية وقابلة للتكرار التذبذبات γ (± 2.2 35.4 هرتز)، انظر الشكل 3B. لإثبات أن تم توليد اهتزازات داخل الشبكة المحلية CA1 قطعت المدخلات من CA3 عن طريق قطع شريحة في المنطقة CA2 باستخدام عازمة 32 G الإبرة. لم خصائص التذبذب في شرائح قطع لا تختلف عن شرائح غير المصقول (ع = 0.85؛ قطع شرائح 6.16 ± 1.1 المسامير، ن = 6؛ شرائح تقطيعه 5.89 ± 0.8 المسامير، ن = 6)، مشيرا إلى أن التذبذبات تتولد محليا. <p class="jove_content" style=";text-al...

التذبذبات هي خصائص الشبكة الأساسية ومنظم من قبل المرض والمخدرات. دراسة التذبذبات الدماغ شريحة يسمح توصيف شبكات معزولة تحت ظروف خاضعة للرقابة. وتقدم بروتوكولات لإعداد شرائح الدماغ الحادة لاستثارة CA1 التذبذبات γ.

جيل من التذبذبات CA1 γ المحلية من خلال تحفيز كزازي

Neuronal network oscillations are important features of brain activity in health and disease and can be modulated by a range of clinically used drugs. A ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحضير شرائح دماغية لتسجيل تذبذبات غاما خارج الخلوية كنموذج للاستثارة العصبية. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إزالة الدماغ من الجمجمة. وتتمثل الخطوة الثانية في تبريد الدماغ بسرعة في ثلج من A CSF وتقطيعه إلى شرائح بسمك 450 micron.بعد ذلك، يتم نقل الشريحة إلى غرفة التسجيل ووضع قطب التحفيز في الطبقة (stratum) وقطب التسجيل في الطبقة (stratum parama doole). وتتمثل الخطوة النهائية في استثارة تذبذبات غاما وتقييم تأثير الأدوية على الاستثارة العصبية. وفي نهاية المطاف، يُستخدم توصيف تذبذبات غاما في الحصين لإظهار تأثيرات الأدوية على وظيفة الشبكة أو لفهم آليات نشأة المرض في الأمراض العصبية الوراثية.يمكن استخدام هذه الطريقة لتقديم رؤى حول آليات المرض التي يحدث فيها زيادة في استثارة الشبكة العصبية مثل الصرع، والتوحد، ومرض ألزهايمر، كما يمكن استخدامها أيضاً لاستقصاء آلية عمل الأدوية. لبدء هذا الإجراء، قم بتجهيز غرفة احتجاز عن طريق إدخال شبكة نايلون مرتفعة في بيكر سعة 250 milliliter. بعد ذلك، املأ البيكر بسائل CSF لتغطية الشبكة بمقدار سنتيمترين تقريباً وقم بضخ الكاربوغين فيه في درجة حرارة الغرفة.تأكد من أن الفقاعات لا تعيق منطقة تثبيت الشريحة بشكل مباشر. بعد ذلك، ضع أدوات التشريح على الثلج، بما في ذلك مقص كبير، ومقص صغير، وملعقة دقيقة (micros spatula) صغيرة وأخرى كبيرة، وملقط صغير وآخر كبير. ضع قالب قطع الأنسجة من نوع Vibram المبرد فوق رقاقة من ورق الألومنيوم على الثلج.بعد ذلك الإصلاح، أحضر قطعتين من ورق الترشيح بمقاس 6 cm، وشفرة حلاقة ذات حافة واحدة، وكأس سعة 25 mL مملوء بملعقة من محلول القطع. بعد ذلك، املأ وعاءً ثانيًا بالثلج من أجل تشريح الدماغ. ضع قطعة من ورق المناديل فوق الثلج، ثم ضع طبق زراعة بمقاس 12 cm في الأعلى.بعد ذلك، املأ طبق الزرع بملاط ثلجي من محلول القطع وقم بضخه بغاز الكاربوجين. في هذا الإجراء، قم بتشريح الجلد والأنسجة الضامة في الرأس باتجاه الأنف باستخدام المقص الصغير، ثم اقطع الأنسجة الضامة للكشف عن الجمجمة الكامنة تحتها. بعد ذلك، قم بإزالة العضلات التي تغطي الجانب الظهري من الجمجمة والرقبة.لإزالة الدماغ، قم بتثبيت مقدمة الجمجمة باستخدام ملقط كبير. ثم قم بإجراء شقين جانبيين عبر العظم على جانبي الـ rem والـ magnum. بعد ذلك، قم بإجراء شق آخر بين العينين أمام الـ bgma مباشرة.قم بالقص بعناية على طول الدرز السهمي، ثم اقلب أقسام الجمجمة المقطوعة للكشف عن الدماغ. بعد ذلك، استخدم الملعقة الصغيرة لغرف الدماغ مع الحرص على قطع الأعصاب القحفية. ضع الدماغ في طبق زراعة.ثم انقل الدماغ إلى دورق سعة 25 milliliter مملوء بملاط محلول التقطيع. ولتجهيز نصف كرة الدماغ للتقطيع، ضع قطعة من ورق ترشيح بحجم ستة centimeter في قاع طبق زراعة. ثم املأه بملاط محلول تقطيع طازج وقم بضخ فقاعات من car.بعد ذلك، ضع الدماغ بحيث يكون الجانب البطني لأسفل على ورق الترشيح. ثم قم بإزالة المخيخ باستخدام شفرة حلاقة ذات حافة واحدة جديدة ونظيفة. قم بإجراء قطع على طول الخط الناصف لفصل نصفَي الكرة المخية.لتحضير كتلة أنسجة Vibram، جفف سطح منصة قطع أنسجة Vibram المبردة. ضع قطرة من غراء Sano ACRL في المنتصف ووزعها بالتساوي لتغطي مساحة تقريبية بحجم الدماغ. استخدم ملعقة مسطحية صغيرة لنقل نصف كرة دماغية واحدة إلى ملعقة مسطحية دقيقة كبيرة، وضعها بحيث يكون الجانب الإنسي للدماغ متجهاً للأسفل.امتص المحلول الموجود في الدماغ باستخدام قطعة من ورق الترشيح قدر الإمكان. ثم قم بإزاحة الدماغ عن الملعقة الكبيرة واستخدم الملعقة الصغيرة لتوجيهه فوق الغراء. بعد ذلك، قم بتثبيت منصة القطع في غرفة Vibram.قم بتجهيز غرفة القطع بسائل التقطيع الغروي لتغطية الدماغ بالكامل، ثم قم بضخ غاز الكاربوجين (carbogen) في المحلول. بعد ذلك، قم بتدوير منصة القطع بحيث يكون الجانب البطني من الدماغ مواجهاً للشفرة. قم بتقطيع الدماغ إلى شرائح بسمك 450 micrometers، بحيث يتم القطع من السطح البطني إلى السطح الظهري لإنتاج شرائح سهمية كاملة من الدماغ لاستخدامها في التسجيلات الفيزيولوجية الكهربائية.إذا ارتفعت قاعدة الشريحة، استخدم إبرة مقوسة عيار 27 للضغط برفق على الشريحة لأسفل. ثم استخدم الماصة لنقل الشريحة إلى غرفة الحفظ. وعادةً ما يمكن قطع ثلاث إلى أربع شرائح من منطقة الحصين (hippo Campbell) من كل نصف كرة مخية لتثبيت الشريحة في غرفة التسجيل.ضع شريحة دماغية في غرفة تسجيل مغمورة يتم ترويتها بسائل CSF يتدفق بمعدل 1 to 2 mL/min ومسخن إلى 32 °C. يختلف الـ CSF المستخدم للتسجيلات عن ذلك المستخدم في غرفة الحفظ، حيث يتم زيادة تركيز المغنيسيوم من 2 mM إلى 4 mM. قم بتثبيت الشريحة بوضع ثقل نصف دائري من الفولاذ المقاوم للصدأ فوقها بحيث تكون خيوطه موازية لمنطقة hippocampal ca1.بعد ذلك، قم بزيادة سرعة التروية إلى 8 إلى 10 milliliters per minute عند درجة حرارة 32 °C. وباستخدام مجهر تشريحي، حرك قطب التحفيز إلى منتصف الـ stratum orients. ثم حرك قطب التسجيل إلى الطبقة الهرمية بحيث يكون أقرب ما يمكن من قطب التحفيز.بعد ذلك، قم بخفض كل من قطب التحفيز وقطب التسجيل بمقدار 50 إلى 100 micrometers داخل الشريحة. ومن أجل توليد جهد بعد مشبكي استثاري (EPSP) مجالي بقيمة 1 millivolt استجابةً لنبضة اختبار تتراوح بين 120 إلى 150 micro لتوليد تذبذبات غاما، قم بتحفيز النسيج بسلسلة مكونة من 20 نبضة، مدة كل منها 0.1 millisecond، يتم إرسالها بتردد 200 hertz. ويمكن لهذا التحفيز القوي (Titanic stimulus) أن يعطي استجابات قابلة للتكرار عند تقديمه كل خمس دقائق.يوضح هذا المخطط مواقع القطب المحفز في stratum orients والقطب المسجل في stratum para في الـ ca one. وفيما يلي مثال على تذبذبات غاما الناتجة عن التحفيز التيتاني (Titanic stimulation). يوضح هذا الشكل الحصر الدوائي لمستقبلات AMPA باستخدام 20 µM من CNQX، ومستقبلات gabaa باستخدام 20 µM من bicuculline، وتيار IH باستخدام 20 µM من zDHC، وقنوات الكالسيوم من النوع T باستخدام chloride.باستخدام 100 micromolar من النيكل، تمكن كل عامل بشكل مستقل من تقليل عدد النبضات المتولدة. ويعد هذا التحضير مثالياً لتحديد تأثير الأدوية على مستوى الشبكة. ويعتبر Tine دواءً مضاداً للصرع مستخدماً سريرياً يعمل على فتح قنوات البوتاسيوم وتقليل استثارة الغشاء في الحمام.أدى تطبيق tine إلى خفض يعتمد على الجرعة في عدد النبضات (spikes) خلال فترة التذبذب. وبمجرد إتقان هذه العملية، يمكن إجراء تحضير شرائح الدماغ والتشريح من أجل التسجيلات الفيزيولوجية الكهربائية في غضون 10 دقائق تقريبًا باتباع هذا الإجراء. ويمكن إضافة طرق أخرى مثل تسجيلات تثبيت الرقعة للخلية الكاملة (whole cell patch clamp) لفهم دور الخلايا العصبية الفردية ضمن الشبكة في الأمراض، وكذلك بعد تطبيق الأدوية.

generation-of-local-ca1-oscillations-by-tetanic-stimulation

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

إعداد شرائح الدماغ الحادة من الحصين معزولة، فضلا عن التسجيلات في وقت واحد من الخلايا النجمية الكهربية والخلايا العصبية...

تسجيلات الكهربية المزدوجة للSynaptically-استجابات Astroglial والخلايا العصبية في الحصين شرائح الحاد

يوضح هذا الفيديو إجراء إحداث تذبذبات جاما CA1 المحلية في شريحة دماغ الفأر في الحصين CA1 باستخدام محاكاة الكزاز. هذه الطريقة مهمة لفهم نشاط الشبكة العصبية.

توليد تذبذبات جاما المحلية Cornu Ammonis 1 (CA1) باستخدام محفزات الكزاز في شريحة دماغ الحصين

يوضح هذا الفيديو طريقة لتسجيل الاستجابات المشبكية CA3-CA1 في شريحة الحصين للفئران. يحدد الخطوات المتبعة في وضع الأقطاب الكهربائية المحفزة والتسجيل على شريحة الحصين وقياس جهد ما بعد المشبكي الاستثاري (fEPSP) لتقييم قوة الاستجابة المتشابكة.

تسجيل الاستجابات المشبكية CA3-CA1 في شريحة الحصين الفئران

يوضح هذا الفيديو طريقة استخدام علم البصريات الوراثي لتعديل ديناميكيات شبكة الحصين عن طريق تنشيط الخلايا العصبية الداخلية الحساسة للضوء المعدلة وراثيا في شريحة دماغ الفأر ، وتعزيز تزامن تذبذب ثيتا ودراسة سلوك الدائرة العصبية.

التحكم البصري الوراثي لديناميكيات شبكة الحصين

يقع نواة pedunculopontine (PPN) في الدماغ ويتم تنشيط الخلايا العصبية في الحد الأقصى أثناء اليقظة وحركة العين السريعة (REM) النوم الدماغ الدول. يصف هذا العمل المنهج التجريبي لتسجيل في المختبر الفرقة جاما التذبذب غشاء دون العتبي في الخلايا العصبية PPN.

تسجيل غاما التذبذبات الفرقة في Pedunculopontine نواة الخلايا العصبية

هنا، نقدم بروتوكول لتسجيل الإيقاعي ثيتا شبكة العصبية وتذبذبات غاما من إعداد الحصين كله معزولة. نحن تصف الخطوات التجريبية من استخراج الحصين إلى تفاصيل الميدان، وحدوية وكل خلية التصحيح المشبك التسجيلات فضلا عن سرعة أوبتوجينيتيك من إيقاع ثيتا.

ضبط في الحصين ثيتا الفرقة<em&gt; في المختبر</em&gt;: منهجيات لتسجيل من القوارض معزولة سيبوهيبوكامبال الدائرة

يصف لنا استخدام أوبتوجينيتيكس والتسجيلات الكهربية للتلاعب الانتقائي للذبذبات ثيتا هيبوكامبال (5-10 هرتز) في سلوك الفئران. ويتم رصد فعالية الرائعة إيقاع استخدام الإمكانات الميدانية المحلية. ويتناول مزيجاً من علم البصريات وتثبيط فارماكوجينيتيك قراءات ناقل هيبوكامبال التزامن.

أوبتوجينيتيك الرائعة للذبذبات ثيتا هيبوكامبال في التصرف الفئران

ويصف هذا البروتوكول تسجيل الإمكانات الميدانية المحلية مع متعدد عرقوب يسبر السليكون الخطي. يسمح تحويل الإشارات باستخدام تحليل كثافة المصدر الحالي إعادة بناء نشاط الكهربائية المحلية في قرن آمون الماوس. مع هذه التقنية، يمكن دراسة ذبذبات الدماغ مكانياً المقيدة في الانتقال بحرية الفئران.

تسجيل مكانياً مقيد التذبذبات في قرن آمون التصرف الفئران

نماذج الاستيلاء الحادة هامة لدراسة الآليات الكامنة وراء الأحداث صرعية. وعلاوة على ذلك، يوفر القدرة على توليد أحداث صرعية عند الطلب طريقة ذات كفاءة عالية لدراسة تسلسل الأحداث الكامنة وراء مبادرتهم. وهنا يصف لنا نماذج الاستيلاء القشرية 4-أمينوبيريديني الحاد في الماوس والأنسجة البشرية.

بدء نشاط Ictal الحادة في القوارض والأنسجة البشرية الجيل وبناء على الطلب

وهنا يقدم بروتوكول ل Ca2 + التصوير في الخلايا العصبية والخلايا الدبقية، الذي يتيح لتشريح Ca2 + إشارات في القرار سوبسيلولار. هذه العملية لا تنطبق على جميع أنواع الخلايا التي تسمح للتعبير عن وراثيا المرمزة Ca2 + المؤشرات.

تشريح المحلية Ca2 + الإشارات في الخلايا المستزرعة بالمؤشرات المستهدفة للغشاء Ca2 +

استخدمنا الأقطاب الكهربائية للتسجيل والتحفيز في شرائح الدماغ فرس النهر الطولية وأقطاب التسجيل والتحفيز ذات الوضع الطولي في الحصين الظهري في الجسم الحي لاستحضار الإمكانات خارج الخلية وتثبت اللدونة متشابك على المدى الطويل على طول INTERlamellar طولية CA1.

التحقيق في اللدونة متشابك على المدى الطويل في Interlamellar Hippocampus CA1 عن طريق تسجيل المجال الكهرولوجيسي

اكتشف طريقة تحضير شرائح الدماغ لتسجيل تذبذبات جاما في منطقة CA1 كنموذج للاستثارة العصبية. تُستخدم هذه التقنية لتقييم تأثير الأدوية على وظيفة الشبكة العصبية وفهم آليات الأمراض العصبية.

جيل من التذبذبات CA1 γ المحلية من خلال تحفيز كزازي

استكشف المزيد من الفيديوهات