إنشاء ذات الصلة سريريا السابقين فيفو موك الساد نموذج جراحة للتحقيق الظهارية إصلاح الجرح في المكروية الأم

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج ذي صلة سريريا حيث يمكن متابعة إصلاح الجروح في بيئته المكروية الأصلية. يتم تحقيق ذلك عن طريق إزالة العدسة أولا من عين جنين الدجاج. الخطوة الثانية هي عمل شق صغير في الجزء الأمامي من العدسة.

ثم قم بإزالة كتلة خلية ألياف العدسة. بعد ذلك ، يتم تسطيح كبسولة العدسة مع الظهارة المرتبطة بها عن طريق إجراء جروح إضافية في الكبسولة الأمامية. الخطوة الأخيرة هي تأمين المزرعة الجريحة في طبق زراعة الأنسجة من أجل متابعة التئام الجروح فور حدوثه.

في النهاية ، يتم استخدام الفحص المجهري بفاصل زمني ، والفحص المجهري متحد البؤر ، والتحليل الكيميائي الحيوي لإظهار آليات إصلاح الجروح في نموذج يلخص عن كثب البيئة في الجسم الحي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التئام الجروح، مثل كيفية تحرك الخلايا معا بشكل متناسق لإغلاق الجرح. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن تعطي نظرة ثاقبة لعملية إصلاح الجروح.

يمكن تطبيقه أيضا على دراسات التئام الجروح ABER ، وخاصة التليف والتندب. ابدأ بوضع ثلاثة أطباق بتري مقاس 100 ملم في غطاء تدفق رقائقي معقم. املأ اثنين من أطباق بتري في منتصف الطريق بمحلول سكر العنب ثلاثي في درجة حرارة الغرفة ، واترك الثالث فارغا.

ثم قم بإزالة بيضة كتكوت بيضاء ذات 15 يوما خصبا من الحاضنة 37.7 درجة مئوية ونظف الجزء الخارجي من القشرة بنسبة 70٪ من الإيثانول من أجل تعقيمها. بعد ذلك ، اكسر البيضة بعناية وضع محتوياتها في طبق بتري الفارغ 100 ملم. باستخدام ملقط قياسي ومقص ناعم ، اقطع رأس الجنين وضع الرأس في أحد الأطباق التي تحتوي على عازلة سكر العنب TST.

في غضون 15 دقيقة ، انقل رأس جنين الفرخ إلى غطاء طبق بتري. استخدم ملقطا عالي الدقة للضغط على الجزء الخلفي من العين ، مما يخلق فتحة صغيرة في الجزء الخلفي من العين. ثم أمسك الفكاهة الزجاجية بالملقط واسحب الجسم الزجاجي برفق بحركة التدحرج.

سوف يزيح الجسم الزجاجي مع العدسة المرفقة من العين. ضع العدسة والجسم الزجاجي في طبق بتري المتبقي الذي يحتوي على Tex extras Buffer. اترك العدسات في المخزن المؤقت لمدة لا تزيد عن 30 دقيقة قبل الاستمرار في التشريح.

بعد ذلك ، انقل العدسة إلى غطاء طبق بتري جديد تحت مجهر تشريح ملقط عالي الدقة ، وقم بتنظيف أي خلايا جسم هدبية تم إزاحتها بالعدسة باستخدام حافة الملقط بعناية. ثم افصل العدسة عن الخلط الزجاجي عن طريق الضغط على الجسم الزجاجي عن ارتباطه بكبسولة العدسة الخلفية. بمجرد فصلها ، انقل العدسة إلى قطرة 200 ميكرولتر من سكر العنب المؤقت في طبق زراعة أنسجة 35 ملم ، ووجهها بحيث يكون الجانب الأمامي من العدسة متجها لأعلى.

يمكن التعرف بسهولة على الجزء الأمامي من العدسة من خلال وجود حلقة كثيفة في الأنسجة تشير إلى الحدود بين المنطقة الداخلية والاستوائية لظهارة العدسة. باستخدام ملقطين عالي الدقة ، قم بعمل شق صغير يبلغ طوله حوالي 850 ميكرون في وسط كبسولة العدسة الأمامية عن طريق الإمساك بالأنسجة بملقط واحد في كل يد وسحبها برفق في اتجاهين متعاكسين. بعد ذلك ، خذ حقنة سعة مليلتر واحد بطرف إبرة قياس 27.5 واملأها ب 300 ميكرولتر من عازلة سكر العنب TST.

أدخل طرف الإبرة في الشق الذي تم إجراؤه في كبسولة العدسة الأمامية وفي منتصف الطريق تقريبا في العدسة. ثم اضغط برفق على المحقنة ، وحقن مخزن سكر العنب TST في العدسة. كتلة الخلايا الليفية.

حقن ما بين 50 و 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت لفك كتلة الخلايا الليفية من الظهارة المحيطة وكبسولة العدسة. لا تحقن أبدا أكثر من 300 ميكرولتر. باستخدام ملقط عالي الدقة ، قم بإزالة كتلة الخلايا الليفية المخففة من العدسة من خلال موقع الشق الأمامي.

تؤدي إزالة كتلة الخلية الليفية من ارتباطها على الكبسولة الخلفية إلى إنشاء منطقة جرح قابلة للتكرار بدرجة كبيرة على الغشاء القاعدي المحاط بالظهارة المصابة. بدءا من كيس المحفظة ، قم بعمل خمس قطع في الجانب الأمامي من العدسة وحتى خط الاستواء. قم بتسطيح اللوحات الخمسة الناتجة من كبسولة العدسة مع الظهارة المرفقة على جانب كبسولة طبق الثقافة لأسفل وجانب الخلية لأعلى.

اضغط برفق باستخدام الملقط في كل نقطة من النجمة لتثبيت الكبسولة في الطبق. سيؤدي ذلك إلى عمل فجوة صغيرة عند الأطرافا الخمسة الخارجية للتخطيط x ويؤدي إلى الارتباط المستمر بالطبق. ثم قم بإزالة المخزن المؤقت لسكر العنب ثلاثي من الطبق 35 ملم واستبدله ب 1.5 مل من M1 99 قبل الحرب.

الوسائط المكملة ب 1٪ من كل من L-glutamine والبنسلين. غطى الستربتومايسين الطبق بغطاءه ووضعه في الحاضنة. ضع طبق الثقافة تحت مجهر التشريح ولاحظ الترسيم بين منطقة الهجرة المركزية ومنطقة التعلق الأصلية للخلايا الظهارية.

ثم استخدم ملقطين عالي الدقة لفهم حافة جانبي خط الترسيم بين المنطقتين. اسحب منطقة التثبيت الأصلية برفق على طول الخط لفصل المنطقتين بسهولة. استمر في فصل المنطقتين حول الثقافة بأكملها حتى يتم فصل المنطقتين تماما.

دراسة الكسرين باستخدام تقنيات التحليل الجزيئي أو الكيميائي الحيوي القياسية. مباشرة بعد إزالة كتلة الخلايا الليفية ، يتم تنشيط مجموعة سكانية فرعية من خلايا إصلاح اللحمة المتوسطة المخصبة وتهاجر إلى حافة الجرح في الظهارة. تنتقل هذه الخلايا بسرعة إلى المنطقة الخالية من الخلايا في كبسولة الغشاء القاعدي الداخلي ، وهي منطقة الهجرة المركزية لبدء الشفاء.

الجرح ، التقنية الموصوفة هنا تعد تماما هذا النظام النموذجي لعرض هذه العملية بالمجهر أو كاميرا الفيديو ، يتقدم التئام الجروح بسرعة ويغطي مساحة كبيرة من الجرح بحلول اليوم الأول في الثقافة. بحلول اليوم الثالث ، تكتمل عملية التئام الجروح عادة بعد فصل الهجرة المركزية ومناطق التعلق الأصلية. تم تحليل الاختلافات الجزيئية بين هذه المناطق المتميزة هنا.

تم قياس مستويات كيناز الالتصاق البؤري في المنطقتين ووجد أن كمية كيناز الالتصاق البؤري الفسفوري قد زادت في منطقة الهجرة المركزية الخاصة بالهجرة. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال تقنية جراحة الساد الوهمية هذه في ثلاث دقائق إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء نموذج وهمي لجراحة الساد يحاكي عن كثب إصلاح الجروح في بيئة مكروية طبيعية.