Name: إنشاء ذات الصلة سريريا السابقين فيفو موك الساد نموذج جراحة للتحقيق الظهارية إصلاح الجرح في المكروية الأم (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: اكتشف كيفية إنشاء نموذج جراحة مائية سريري خارج الجسم لدراسة إصلاح الجرح الظهاري في أنسجة العين. يستخدم هذا النموذج أجنة الدجاج لمحاكاة ظروف جراحة الساد الحقيقية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذا العمل من قبل منحة المعاهد الوطنية للصحة إلى A.S.M. (EY021784).

بروتوكول التالية يتوافق مع المبادئ التوجيهية المؤسسية رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام جامعة توماس جيفرسون ومع بيان ARVO لاستخدام الحيوانات في البحوث الرؤية. 1. إعداد والتحضير للعدسات للثقافة فيفو السابقين الجرح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ثلاث 100 أطباق بتري ملم في العقيمة، غطاء تدفق الصفحي. ملء اثنين من أطباق بتري في منتصف الطريق مع العازلة تريس / سكر العنب (العازلة TD، 140 ملي كلوريد الصوديوم، 5 مم بوكل، 0.7 ملي نا 2 PO 4، 5 ملي مد الجلوكوز، 8.25 ملي تريس قاعدة، ودرجة الحموضة إلى 7.4 مع حمض الهيدروكلوريك) في RT ، وترك فارغا الثالث. وسائل الإعلام ثقافة ما قبل الدافئ (وسائل الإعلام تستكمل مع 199، 1٪ L-الجلوتامين و 1٪ البنسلين / الستربتومايسين) إلى 37 درجة مئوية. ملاحظة: الجرح معيار الشفاء سائل الإعلام والثقافة وخالية من الدم، كما يحدث في الجسم الحي. ومع ذلك، يمكن أن تنمو الثقافات الجرح إصلاح بنجاح في ظروف محددة وسائل الاعلام التي تشمل المصل أو عوامل أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة د الجنينية خصبةعبد المنعم يوسف 15 أبيض ليفورنو البيض فرخ من الحاضنة (التي عقدت في 37.7 درجة مئوية مع هزاز لطيف) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع البيض المحدد في غطاء تدفق الصفحي وخارج نظيف من قذيفة مع الايثانول 70٪ من زجاجة غسل. إجراء كافة الإجراءات أدناه تحت ظروف معقمة في غطاء تدفق الصفحي، وذلك باستخدام الحلول والأدوات المعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكراك البيض ومكان المحتويات في فارغة 100 مم طبق بتري. قطع رأس الجنين باستخدام ملقط القياسية ومقص غرامة. وضع رئيس أجنة الدجاج في طبق بتري تحتوي العازلة TD والتخلص السليم من ما تبقى من الجنين. اختياريا حفاظ على رؤساء الفرخ الجنين في المخزن TD لفترة قصيرة من الزمن، لم يعد من 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رئيس الفرخ الجنين على غطاء طبق بتري. باستخدام ملقط عالية الدقة، وإزالة العدسة المرفقة مع النكتة لها الزجاجي من العين في التسلسل التالي. قرصة الجزء الخلفي من العين مع ملقط لإنشاء فتحة صغيرة في الجزء الخلفي من العين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم، فهم النكتة الزجاجي ثإيث ملقط والساحبة بلطف على الجسم الزجاجي مع تحريك المتداول، سيتم طردهم الزجاجي مع عدسة المرفقة من العين. مكان عدسة / زجاجي في ما تبقى من طبق بتري تحتوي العازلة TD. السماح للعدسات أن تبقى في المخزن TD مدة لا تزيد عن 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحريك العدسة لجديد غطاء طبق بتري تحت المجهر تشريح. من هذه النقطة على تنفيذ جميع الخطوات تحت المجهر تشريح. مع ملقط عالية الدقة فرشاة بعناية بعيدا أي الجسم الهدبي (الخلايا الصباغية) التي تم فكها مع العدسة باستخدام حافة ملقط، مع الحذر على عدم الإضرار الأنسجة العدسة. ملاحظة: إزالة الجسم الهدبي تضمن أنواع الخلايا التي ليست الذاتية للعدسة ليست مدرجة في الثقافة إصلاح الجرح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل العدسة من النكتة الزجاجي مع ملقط عالية الدقة عن طريق معسر قبالة الجسم الزجاجي من ارتباطه مع كبسولة عدسة الخلفي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام عالية الدقة ملقط نقل العدسة إلى قطرة صغيرةمن TD العازلة (حوالي 200 ميكرولتر) في صحن زراعة الأنسجة 35MM. </li></ol> 2. إجراء جراحة الساد موك <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه عدسة في قطرة من العازلة TD في 35 ملم الطبق مع الجانب الأمامي للعدسة مواجهة. ملاحظة: يتم تحديد الأمامي للعدسة بسهولة من خلال وجود حلقة كثيفة في الأنسجة التي تحيط الحدود بين الأمامية والمنطقة الاستوائية من ظهارة العدسة. في المقابل، هناك غياب علامات على الخلفي من كبسولة العدسة التي ترد خلايا ألياف العدسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام اثنين من ملقط عالية الدقة تجعل شق صغير (حوالي 850μm) في وسط الكبسولة الأمامية عدسة، والغشاء القاعدي الكثيف الذي يحيط نسيج العدسة، وما يرتبط بها من ظهارة العدسة الأمامي لها، من خلال استيعاب الأنسجة مع واحد ملقط في كل جهة، و التجاذبات بلطف في اتجاهات متعارضة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كتلة الخلية الألياف، والتي تشكل الجزء الأكبر من النسيج العدسة، dislodجينج أنه من مرفقاتها إلى ظهارة العدسة والمحيطة عدسة الكبسولة التي كتبها المائية شطف (النهج المستخدمة في جراحة الساد الكلاسيكية، على غرار في الشكل 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء حقنة 1 مل مع طرف إبرة 27.5 G مع 300 ميكرولتر من العازلة TD. إدراج رأس الإبرة في شق المحرز في عدسة الكبسولة الأمامية، وحوالي منتصف الطريق إلى العدسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض بلطف حقنة حقن عازلة TD في كتلة الخلايا الألياف العدسة. ضخ ما بين 50 و 200 TD ميكرولتر، وأبدا أكثر من 300 ميكرولتر. مراقبة الكتلة الخلوية الألياف تخفيف نفسها من الظهارة وعدسة الكبسولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط عالية الدقة، وإزالة خففت كتلة الخلايا الألياف من العدسة من خلال موقع شق الأمامي. ملاحظة: يترك هذا الإجراء العدسة الخلفي كبسولة الغشاء القاعدي الذي خلايا الألياف قد تعلق المعراة من الخلايا، وظهارة العدسة بجروح فقط المجاورة لهذا الموقع. </li></ol> 3. Preparinز العدسة الجرحى لفيفو السابقين الثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسطيح حقيبة المحفظة العدسة التي تنتج من جراحة الساد المذكورة أعلاه على طبق ثقافة، جنبا خلية يصل، بجعل خمسة تخفيضات في الجانب الأمامي من الحقيبة المحفظة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع عمودي على موقع شق الأصلي وصولا إلى خط الاستواء من العدسة. تسطيح الناتجة خمسة &quot;اللوحات&quot; من عدسة كبسولة مع ظهارة تعلق على الجانب ثقافة طبق كبسولة أسفل، الجانب الخلية يصل. لاحظ عدسة الجرحى خارج الحي الآن يجب أن تأخذ على نجمة أو شكل flowerlike (انظر الشكل 1B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتأمين الكبسولة إلى الطبق، اضغط برفق إلى أسفل مع ملقط في كل نقطة من النجم. وهذا سيجعل المسافة البادئة صغيرة في النصائح الخمس الأكثر الخارجية للالنباتى ويؤدي إلى التعلق المستدام إلى الطبق. ملاحظة: من الممكن أن يدمر الكبسولة أثناء هذا الإجراء، ولذا فمن المهم تأمين الكبسولة إلى الطبق أقرب إلى نصائح من فلوريداملاحظة وقت ممكن، وكذلك لجعل أقل قدر من النقاط تأمين ممكن (عادة اثنين، بحد أقصى ثلاثة في رفرف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المنطقة العازلة TD من الطبق 35MM واستبدالها 1.5 مل من وسائل الاعلام قبل تحسنت. تغطية صحن 35MM مع غطاء ووضعه في الحاضنة (37 ° C، 5٪ CO 2). </li></ol> 4. فصل المنطقة الهجرة الوسطى (CMZ)، حيث إعادة الاندمال بتشكل النسيج الظهاري في المنطقة الجرحى من الخلفي كبسولة يحدث، من مرفق الأصل المنطقة (OAZ) من الخلايا الظهارية عدسة، على التحليل الكمي. ملاحظة: هذه الخلايا تبدأ في التحرك إلى المنطقة CMZ على الفور ردا على إصابة. قبل يوم واحد في الثقافة ما يكفي من الخلايا يهاجرون عبر CMZ للتحليل الجزيئية والكيمياء الحيوية، وبعد الانفصال من CMZ وOAZ كتبها micro-تشريح 23. هذا البروتوكول ينطوي على إزالة واحد رفرف (OAZ) في وقت من منطقة الجرحى من الكبسولة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة وديمارالموجبة، واضحة للعيان تحت المجهر تشريح، بين OAZ وCMZ (انظر الشكل 2A). باستخدام اثنين من ملقط عالية الدقة، فهم مع كل من ملقط على حافة خط OAZ / CMZ، واحد فقط المتاخمة للالبعض، على جانبي الخط (انظر الشكل 2A، B، السهم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام يد واحدة / واحد ملقط على الجانب CMZ تواصل التمسك ثقافة الجرحى، في حين باليد الأخرى / ملقط، وسحب بلطف OAZ على طول الخط OAZ / CMZ. وCMZ يفصل بسهولة من OAZ على طول هذا الخط. مواصلة السير على هذا الخط في جميع أنحاء ثقافة بأكملها حتى يتم فصل المنطقتين تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دراسة فصل OAZ وCMZ الكسور للتحليل الجزيئي مثل 24 أو البيوكيميائية تحليل الحمض النووي الريبي يليها مثل لطخة غربية أو زملاء مناعي 23،25. </li></ol>

<ol><li>Walker, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+precursors+for+the+mesenchymal+cells+involved+in+injury+response+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Unique precursors for the mesenchymal cells involved in injury response and fibrosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 13730-13735 (2010).</li>
<li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+migration+in+morphogenesis%2C+regeneration+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Molecular+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nature reviews. Molecular cell biology. 10, 445-457 (2009).</li>
<li>Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+wound-healing+assays+for+probing+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+laboratory+automation%22%5BJournal%5D)">Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration.</a> Journal of laboratory automation. 17, 59-65 (2012).</li>
<li>Khalil, A. A., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+leader+cells+in+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+biology+%3A+quantitative+biosciences+from+nano+to+macro%22%5BJournal%5D)">Determinants of leader cells in collective cell migration.</a> Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro. 2, 568-574 (2010).</li>
<li>Walker, J. L., Wolff, I. M., Zhang, L., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+SRC+kinases+signals+induction+of+posterior+capsule+opacification%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Activation of SRC kinases signals induction of posterior capsule opacification.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 48, 2214-2223 (2007).</li>
<li>Sta Iglesia, D. D., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+basement+membrane+after+corneal+debridement%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Disruption of the basement membrane after corneal debridement.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 41, 1045-1053 (2000).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Brown, M., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+the+study+of+recurrent+corneal+epithelial+erosions%3A+alpha9beta1+integrin+implicated+in+progression+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">A mouse model for the study of recurrent corneal epithelial erosions: alpha9beta1 integrin implicated in progression of the disease.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 45, 1775-1788 (2004).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+basement+membrane+enhances+corneal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing.</a> Experimental eye research. 93, 927-936 (2011).</li>
<li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental eye research. 121, 178-193 (2014).</li>
<li>Kuwabara, T., Perkins, D. G., Cogan, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sliding+of+the+epithelium+in+experimental+corneal+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Sliding of the epithelium in experimental corneal wounds.</a> Investigative ophthalmology. 15, 4-14 (1976).</li>
<li>Sherrard, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+corneal+endothelium+in+vivo%3A+its+response+to+mild+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">The corneal endothelium in vivo: its response to mild trauma.</a> Experimental eye research. 22, 347-357 (1976).</li>
<li>Stramer, B. M., Zieske, J. D., Jung, J. C., Austin, J. S., Fini, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+controlling+the+fibrotic+repair+phenotype+in+cornea%3A+implications+for+surgical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms controlling the fibrotic repair phenotype in cornea: implications for surgical outcomes.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4237-4246 (2003).</li>
<li>Escamez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+wound+healing+in+genetically+modified+skin-humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+investigative+dermatology%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of wound healing in genetically modified skin-humanized mice.</a> The Journal of investigative dermatology. 123, 1182-1191 (2004).</li>
<li>Werner, S., Breeden, M., Hubner, G., Greenhalgh, D. G., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+keratinocyte+growth+factor+expression+is+reduced+and+delayed+during+wound+healing+in+the+genetically+diabetic+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+investigative+dermatology%22%5BJournal%5D)">Induction of keratinocyte growth factor expression is reduced and delayed during wound healing in the genetically diabetic mouse.</a> The Journal of investigative dermatology. 103, 469-473 (1994).</li>
<li>Tarin, D., Croft, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+studies+of+wound+healing+in+mouse+skin.+II.+Dermo-epidermal+interrelationships%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+anatomy%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin. II. Dermo-epidermal interrelationships.</a> Journal of anatomy. 106, 79-91 (1970).</li>
<li>Croft, C. B., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+studies+of+wound+healing+in+mouse+skin+I.+Epithelial+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+anatomy%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin I. Epithelial behaviour.</a> Journal of anatomy. 106, 63-77 (1970).</li>
<li>Winstanley, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epithelial+reaction+in+the+healing+of+excised+cutaneous+wounds+in+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+comparative+pathology%22%5BJournal%5D)">The epithelial reaction in the healing of excised cutaneous wounds in the dog.</a> Journal of comparative pathology. 85, 61-75 (1975).</li>
<li>Wormstone, I. M., Wride, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ocular+lens%3A+a+classic+model+for+development%2C+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">The ocular lens: a classic model for development, physiology and disease.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 366, 1190-1192 (2011).</li>
<li>Danysh, B. P., Duncan, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lens+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">The lens capsule.</a> Experimental eye research. 88, 151-164 (2009).</li>
<li>Awasthi, N., Guo, S., Wagner, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+capsular+opacification%3A+a+problem+reduced+but+not+yet+eradicated%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Posterior capsular opacification: a problem reduced but not yet eradicated.</a> Archives of ophthalmology. 127, 555-562 (2009).</li>
<li>Walker, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+attempts+to+reduce+posterior+capsule+opacification+after+cataract+surgery--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+experimental+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Pharmacological attempts to reduce posterior capsule opacification after cataract surgery--a review.</a> Clinical & experimental ophthalmology. 36, 883-890 (2008).</li>
<li>Schmidbauer, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+capsule+opacification%5BTitle%5D)+AND+%22International+ophthalmology+clinics%22%5BJournal%5D)">Posterior capsule opacification.</a> International ophthalmology clinics. 41, 109-131 (2001).</li>
<li>Menko, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+vimentin+in+regulating+repair+function+during+healing+of+the+lens+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">A central role for vimentin in regulating repair function during healing of the lens epithelium.</a> Molecular biology of the cell. 25, 776-790 (2014).</li>
<li>Chauss, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+state-specific+mitochondrial+dynamic+regulatory+networks+are+revealed+by+global+transcriptional+analysis+of+the+developing+chicken+lens%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Differentiation state-specific mitochondrial dynamic regulatory networks are revealed by global transcriptional analysis of the developing chicken lens.</a> G3 (Bethesda). 4, 1515-1527 (2014).</li>
<li>Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+N-Cadherin+linked+c-Src+and+fyn+kinases+in+lens+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+%3A+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for N-Cadherin linked c-Src and fyn kinases in lens development.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 242, 469-484 (2013).</li>
<li>Sieg, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FAK+integrates+growth-factor+and+integrin+signals+to+promote+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+cell+biology%22%5BJournal%5D)">FAK integrates growth-factor and integrin signals to promote cell migration.</a> Nature cell biology. 2, 249-256 (2000).</li>
<li>Sieg, D. J., Hauck, C. R., Schlaepfer, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Required+role+of+focal+adhesion+kinase+%28FAK%29+for+integrin-stimulated+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cell+science%22%5BJournal%5D)">Required role of focal adhesion kinase (FAK) for integrin-stimulated cell migration.</a> Journal of cell science. 112 (Pt 16), 2677-2691 (1999).</li>
<li>Hauck, C. R., Hsia, D. A., Schlaepfer, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+focal+adhesion+kinase--a+regulator+of+cell+migration+and+invasion%29%5BTitle%5D)+AND+%22IUBMB+life%22%5BJournal%5D)">The focal adhesion kinase--a regulator of cell migration and invasion).</a> IUBMB life. 53, 115-119 (2002).</li>
<li>Zhao, X., Guan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+adhesion+kinase+and+its+signaling+pathways+in+cell+migration+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+drug+delivery+reviews%22%5BJournal%5D)">Focal adhesion kinase and its signaling pathways in cell migration and angiogenesis.</a> Advanced drug delivery reviews. 63, 610-615 (2011).</li>
<li>Menko, A. S., Bleaken, B. M., Walker, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional-specific+alterations+in+cell-cell+junctions%2C+cytoskeletal+networks+and+myosin-mediated+mechanical+cues+coordinate+collectivity+of+movement+of+epithelial+cells+in+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">Regional-specific alterations in cell-cell junctions, cytoskeletal networks and myosin-mediated mechanical cues coordinate collectivity of movement of epithelial cells in response to injury.</a> Experimental cell research. 322, 133-148 (2014).</li>
<li>Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing--aiming+for+perfect+skin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Wound healing--aiming for perfect skin regeneration.</a> Science. 276, 75-81 (1997).</li>
<li>Ferguson, M. W., O'Kane, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scar-free+healing%3A+from+embryonic+mechanisms+to+adult+therapeutic+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 839-850 (2004).</li>
<li>Redd, M. J., Cooper, L., Wood, W., Stramer, B., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+and+inflammation%3A+embryos+reveal+the+way+to+perfect+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 777-784 (2004).</li>
<li>Nodder, S., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+in+embryos%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomy+and+embryology%22%5BJournal%5D)">Wound healing in embryos: a review.</a> Anatomy and embryology. 195, 215-228 (1997).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li>
</ol>

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

فيما يلي وصف لتقنية لإعداد نموذج ثقافي لإصلاح الجروح يتضمن إجراء جراحة إعتام عدسة العين خارج الجسم الحي على عدسات جنين الفرخ بعد إزالتها من العين. تستجيب ظهارة العدسة لهذا الجرح ذي الصلة سريريا بعملية إصلاح تحاكي عن كثب ما يحدث في الجسم الحي ، وتشترك في الميزات مع إصلاح الجروح في الأنسجة الظهارية الأخرى2،4. في حين أن البروتوكول مباشر وسهل المتابعة ، فإن إجراء جراحة إعتام عدسة العين الوهمية باستخدام العدسات الجنينية يتطلب تطوير المهارات في التعامل مع الأنسجة الصغيرة التي يمكن اكتسابها من خلال ...

و، جراحة الساد وهمية ذات الصلة سريريا، وقد وضعت خارج الحي الظهارية نموذج التئام الجروح الموصوفة هنا إلى توفير أداة للتحقيق في الآليات التي تنظم إصلاح الأنسجة الظهارية في استجابة لإصابة. السمات الرئيسية التي كانت تهدف لفي خلق هذا النموذج وشملت 1) توفير الظروف التي تتكرر بشكل وثيق الاستجابة في الجسم الحي لاصابة في إعداد ثقافة، 2) سهولة تحوير العناصر التنظيمية للإصلاح، و3) القدرة على صورة عملية الإصلاح، في مجملها، في الوقت الحقيقي. التحدي، لذلك، كان لخلق نموذج الثقافة التي كان من الممكن للدراسة، والتلاعب، وإصلاح الجرح الظهارية في المكروية في الخلايا الأم. توافر هذا النموذج الجرح إصلاح يفتح إمكانيات جديدة لتحديد العظة الإشارات الداخلية من مصفوفة البروتينات، السيتوكينات وكيموكينات التي تنظم عملية الإصلاح. وبالإضافة إلى ذلك، فإن نموذج مثالي لدراسة كيف يمكن لن ظهارة قادرة على التحرك في ورقة جماعية لإعادة يغطي بالنسيج الظهاري-منطقة الجرح 2،3، وتحديد نسب الخلايا زعيم الوسيطة على حافة الجرح التي تعمل في توجيه الهجرة الجماعية للظهارة أصيب 4. يوفر هذا النموذج أيضا منبرا التي لتحديد العلاجات التي يمكن أن تعزز فعالية التئام الجروح ومنع ترميم الجروح الشاذة 5. وهناك بالفعل عدد من النماذج المتاحة الجرح إصلاح، سواء في الثقافة والحية، التي وفرت معظم ما هو معروف عن عملية ترميم الجروح اليوم. في نماذج إصابة الحيوانية، مثل القرنية 6-12 و13-17 الجلد، وهناك فرصة لدراسة استجابة الأنسجة لاصابة في سياق جميع الوسطاء الإصلاح التي يمكن أن تشارك في هذه العملية، بما في ذلك المساهمات من الأوعية الدموية والجهاز العصبي. ومع ذلك، هناك قيود على التلاعب من experiالظروف النفسية في الجسم الحي، وأنه ليس من الممكن بعد إجراء دراسات التصوير الاستجابة إصلاح في الجسم الحي، بشكل مستمر مع مرور الوقت. في المقابل، فإن معظم نماذج الثقافة في المختبر الجرح إصلاح، مثل الجرح الصفر، ويمكن التلاعب بها بسهولة، وتابعت مع مرور الوقت ولكنها تفتقر إلى الإطار البيئي دراسة التئام الجروح في الأنسجة في الجسم الحي. في حين أن النماذج خارج الجسم الحي توفر ميزة دراسة عملية إصلاح الضرر بشكل مستمر مع مرور الزمن في سياق المكروية في الخلايا إلى جانب القدرة على تعديل المنظمين الجزيئية للإصلاح في أي نقطة زمنية في هذه العملية، وهناك عدد قليل من النماذج التي تناسب هذه المعلمات. هنا يتم وصف هذا الإجراء لتوليد تكرار للغاية خارج الحي الظهارية التئام الجروح الثقافات التي تتكاثر ردا على الأنسجة الظهارية لوجرح الفسيولوجية. باستخدام عدسة الفرخ الجنين كمصدر الأنسجة، وبحكم فيفو وزارة التجارةيتم إجراء جراحة الساد ك. العدسة هي الأنسجة مثالية لاستخدامها في هذه الدراسات أنه على مسافة سميكة كبسولة الغشاء القاعدي مكتفية ذاتيا، اوعائي، وليس معصب، وخالية من أي سدى المرتبطة 18،19. في الأمراض التي تصيب البشر، وتتناول جراحة الساد فقدان البصر بسبب عتامة العدسة، وينطوي على إزالة كتلة الخلية الألياف العدسة، التي تضم الجزء الأكبر من العدسة. يتم استعادة التالية الساد رؤية عملية جراحية خلال إدخال عدسة داخل العين الاصطناعية. إجراء جراحة الساد، من خلال إزالة الخلايا الألياف، يحرض استجابة إصابة في الظهارة عدسة المجاورة، التي تستجيب عن طريق إعادة الاندمال بتشكل النسيج الظهاري للمنطقة الخلفية للكبسولة العدسة التي كانت محتلة من قبل خلايا الألياف. في جراحة الساد، كما هو الحال في معظم الردود ترميم الجروح، ويحدث هناك في بعض الأحيان نتيجة تليفي الشاذة للاستجابة التئام الجروح، ويرتبط مع ظهور myofibroblasts، والتي في عدسة يعرف الخلفي Capsuلو عتامة 20-22. لتوليد جراحة الساد نموذج التئام الجروح، وتحاكي إجراء جراحة الساد في العدسات إزالتها من عين الفرخ الجنين لإنتاج إصابة الفسيولوجية. إزالة المجهرية من ألياف العدسة خلايا النتائج في منطقة الجرح دائري متسقة للغاية تحيط بها الخلايا الظهارية عدسة. لا تزال تعلق هذه الفئة من السكان خلية بحزم عدسة الطابق السفلي كبسولة غشاء وأصيبوا من جراء العملية الجراحية. الخلايا الظهارية تهاجر إلى منطقة الجرداء من الغشاء القاعدي الذاتية للشفاء الجرح، بقيادة عدد سكانها خلايا vimentin الغنية الوسيطة المعروفة في عملية الإصلاح كخلايا الزعيم 1. مع هذا النموذج استجابة لظهارة للإصابة يمكن تصور بسهولة وجاءت مع الوقت في سياق المكروية الخلايا. الخلايا يمكن الوصول إليها بسهولة لإدخال تعديلات على التعبير أو تفعيل جزيئات المتوقع أن تلعب دورا في ترميم الجروح. وهناك ميزة قوية من الهو النموذج هو القدرة على عزل ودراسة التغيرات الهجرة محددة في إطار التئام الجروح. القدرة على إعداد عدد كبير من الذين تتراوح أعمارهم بين خارج الجسم الحي التئام الجروح الثقافات مطابقة للدراسات هو ميزة أخرى لهذا النموذج. وبالتالي، فإن هذا النظام النموذجي فرصة فريدة لندف بصرف النظر آليات إصلاح الجرح والعلاجات اختبار تأثيرها على عملية التئام الجروح. ومن المتوقع أن يكون تطبيق واسع نموذج جراحة الساد وهمية خارج الحي، وتوفير الموارد الحرجة لدراسة آليات إصلاح الضرر.

<table><tbody><tr><td>كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم)</td> <td>يستخدم فيشر Scientific</td><td>S271-3</td><td>عند 140 ملي مولار في</td></tr><tr><td>كلوريد البوتاسيوم العازلة TD (KCl)</td> <td>فيشر Scientific</td><td>P217-500</td><td>استخدم عند 5 ملي مولار في</td></tr><tr><td>فوسفات الصوديوم العازل TD (Na2HPO4)</td> <td>Sigma</td><td>S0876</td><td>استخدم عند 0.7 ملي مولار في TD Buffer</td></tr><tr><td>D-glucose (سكر العنب)</td><td>فيشر Scientific</td><td>D16-500</td><td>استخدم عند 0.5 ملي مولار في TD Buffer</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-1</td><td>استخدم عند 8.25 ملي مولار في TD Buffer</td></tr><tr><td>Acid Hydrochloric</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144-500</td><td>استخدم في المخزن المؤقت لدرجة الحموضة TD إلى 7.4</td></tr><tr><td>Media 199</td><td>GIBCO</td><td>11150-059</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Corning / CellGro</td><td>25-005-CI</td><td>استخدم بنسبة 1٪ في Media199</td></tr><tr><td>البنسلين / الستربتومايسين</td><td>Corning / CellGro</td><td>30-002-CI</td><td>استخدم بنسبة 1٪ في Media199</td></tr><tr><td>أطباق بتري 100 مم</td><td>وحدة</td><td></td> تصفية FB0875711Z <td></td></tr><tr><td>Stericup</td><td>Millipore</td><td>SCGPU01RE</td><td>استخدم لتصفية تعقيم ملقط Media</td></tr><tr><td>Dumont # 5 (تحتاج 2)</td> <td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>35 مم طبق ثقافة الخلايا</td><td>Corning</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>27 جم 1 مل SlipTip مع إبرة انزلاق دقيقة</td><td>BD</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>مقص ناعم</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>ملقط قياسي</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>91100-12</td><td></td></tr><tr><td>العناصر الأخرى المطلوبة: أدوات تشريح عامة ، &nbsp بيض دجاج أبيض خصب ، تحقق من حاضنة البيض (رطبة ، 37.7 درجة ؛ ج) ، غطاء التدفق الصفحي ، مجهر</td><td></td><td></td><td></td> تشريح الرؤية المجسمة مجهر</tr></tbody></table>

إنشاء ذات الصلة سريريا<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; موك الساد نموذج جراحة للتحقيق الظهارية إصلاح الجرح في المكروية الأم

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

العائق الرئيسي أمام فهم كيفية تنفيذ الأنسجة الظهارية لإصلاح الجرح هو التوافر المحدود للنماذج التي يمكن من خلالها متابعة استجابة الجرح ومعالجتها خارج الجسم الحي في بيئة تحاكي عن كثب إصابة الأنسجة الظهارية في الجسم الحي. تمت معالجة هذه المشكلة من خلال إنشاء نموذج إصلاح إصابات ظهارية خارج الجسم الحي ذات صلة سريريا يعتمد على جراحة إعتام عدسة العين. في نموذج الثقافة هذا ، يمكن متابعة استجابة ظهارة العدسة للجرح مباشرة في البيئة المكروية الأصلية للخلايا ، ويمكن التلاعب بسهولة بالوسطاء الجزيئيين لإصلاح الجروح أثناء عملية الإصلاح. لتحضير الثقافات ، تتم إزالة العدسات من العين ويتم إجراء شق صغير في الجزء الأمامي من العدسة التي تتم إزالة الكتلة الداخلية لخلايا ألياف العدسة منها. يخلق هذا الإجراء جرحا دائريا على كبسولة العدسة الخلفية، وهو الغشاء القاعدي السميك الذي يحيط بالعدسة. تقع منطقة الجرح هذه حيث تم توصيل الخلايا الليفية بجوار طبقة أحادية مستمرة من الخلايا الظهارية للعدسة التي تظل مرتبطة بكبسولة العدسة أثناء العملية الجراحية. تستجيب الظهارة المصابة ، وهي نوع الخلية التي تشتق منها الخلايا الليفية أثناء التطور ، لإصابة إزالة الخلايا الليفية عن طريق التحرك بشكل جماعي عبر منطقة الجرح ، بقيادة مجموعة من خلايا الإصلاح الغنية بالفيمنتين التي تكون أسلافها الوسيطة داخلية العدسة1. هذه الخصائص نموذجية للاستجابة الطبيعية لالتئام الجروح الظهارية. في هذا النموذج ، كما هو الحال في الجسم الحي ، يعتمد إصلاح الجرح على الإشارات التي توفرها البيئة الداخلية التي يتم الحفاظ عليها بشكل فريد في نظام الاستزراع خارج الجسم الحي هذا ، مما يوفر فرصة مثالية لاكتشاف الآليات التي تنظم إصلاح الظهارة بعد الجرح.

فيفو السابقين نموذج أنشئت لدراسة عملية التئام الجروح في المكروية في الخلايا الأم للتحقيق في الآليات التي تشارك في تنظيم التئام الجروح لظهارة داخل المكروية في الخلايا الأم، تم إنشاء نموذج جراحة الساد ذات الصلة سريريا خارج الحي وهمية. يتم إنشاء هذا النموذج من عدسة الأنسجة والذي يقدم العديد من المزايا وذلك بسبب خصائصه الجوهرية: 1) العدسة هي جهاز بذاتها يحيط بها الغشاء القاعدي سميكة تسمى كبسولة العد...

الموصوف هنا هو إنشاء نموذج جراحة إعتام عدسة العين الوهمي ذي الصلة سريريا خارج الجسم الحي والذي يمكن استخدامه للتحقيق في آليات استجابة إصابة الأنسجة الظهارية داخل بيئتها المكروية الأصلية.

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج ذي صلة سريرياً حيث يمكن تتبع إصلاح الجروح في بيئتها الدقيقة الأصلية. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إزالة العدسة من عين جنين الدجاج. وتتمثل الخطوة الثانية في إجراء شق صغير في الجزء الأمامي من العدسة.بعد ذلك، يتم شطف كتلة خلايا ألياف العدسة مائياً. ثم يتم بسط محفظة العدسة مع الظهارة المرتبطة بها عن طريق إجراء شقوق إضافية في المحفظة الأمامية. وتتمثل الخطوة النهائية في تثبيت المزرعة المصابة في طبق زراعة الأنسجة من أجل متابعة التئام الجرح أثناء حدوثه.في النهاية، يُستخدم المجهر الزمني (time-lapse microscopy)، والمجهر البؤري (confocal microscopy)، والتحليل البيوكيميائي لإظهار آليات إصلاح الجروح في نموذج يحاكي بدقة البيئة الحية (in vivo). يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال التئام الجروح، مثل كيفية تحرك الخلايا بشكل منسق معاً لإغلاق الجرح. وعلى الرغم من ذلك، يمكن لهذه الطريقة أن تقدم رؤية متعمقة حول عملية إصلاح الجروح.ويمكن تطبيق ذلك أيضاً في دراسات التئام جروح ABER، ولا سيما التليف والتندب. ابدأ بوضع ثلاثة أطباق بتري بقطر 100 millimeter في غطاء تدفق صفائحي معقم. املأ طبقين من أطباق بتري حتى المنتصف بمحلول tris dextrose buffer في درجة حرارة الغرفة، واترك الطبق الثالث فارغاً.بعد ذلك، أخرج بيضة دجاج "ليغهورن" بيضاء مخصبة في اليوم الجنيني 15 من الحاضنة عند درجة حرارة 37.7 °C، وقم بتنظيف السطح الخارجي للقشرة باستخدام 70% ethanol لتعقيمها. بعد ذلك، قم بكسر البيضة بعناية وضع محتوياتها في طبق بتري فارغ مقاس 100 millimeter. وباستخدام ملاقط قياسية ومقص دقيق، قم بفصل رأس الجنين ووضعه في أحد الأطباق التي تحتوي على TST dextrose buffer.خلال 15 دقيقة، انقل رأس جنين الدجاج إلى غطاء طبق بتري. استخدم ملقطاً عالي الدقة لقرص الجزء الخلفي من العين، مما يؤدي إلى إحداث فتحة صغيرة في الجزء الخلفي منها. بعد ذلك، أمسك بالخلط الزجاجي باستخدام الملقط واسحبه برفق بحركة دائرية.سوف ينفصل الجسم الزجاجي مع العدسة الملحقة به عن العين. ضع العدسة والجسم الزجاجي في طبق بتري المتبقي الذي يحتوي على Tex extras Buffer. اترك العدسات في المحلول المنظم لمدة لا تزيد عن 30 دقيقة قبل المتابعة في عملية التشريح.بعد ذلك، انقل العدسة إلى غطاء طبق بتري جديد تحت مجهر تشريحي باستخدام ملاقط دقيقة للغاية، وقم بإزالة أي خلايا من الجسم الهدبي قد تكون انزاحت مع العدسة بعناية باستخدام حافة الملاقط. ثم افصل العدسة عن الخلط الزجاجي عن طريق قطع الجسم الزجاجي من ارتباطه بمحفظة العدسة الخلفية. وبمجرد الفصل، انقل العدسة إلى قطرة بحجم 200 microliter من منظم تريس ديكستروز في طبق زراعة أنسجة بقطر 35 millimeter، ووجهها بحيث يكون الجانب الأمامي للعدسة متجهاً للأعلى.يمكن التعرف بسهولة على الجزء الأمامي من العدسة من خلال وجود حلقة كثيفة في النسيج تحدد الحدود بين المنطقة الداخلية والمنطقة الاستوائية لظهارة العدسة. باستخدام ملقطين عاليي الدقة، قم بإجراء شق صغير بطول 850 microns تقريبًا في مركز المحفظة الأمامية للعدسة عن طريق الإمساك بالنسيج بملقط في كل يد والشد برفق في اتجاهين متعاكسين. بعد ذلك، أحضر سرنجة سعة 1 milliliter مع طرف إبرة بقياس 27.5 gauge واملأها بـ 300 µL من TST dextrose buffer.أدخل طرف الإبرة في الشق الموجود في المحفظة الأمامية للعدسة وصولاً إلى منتصف العدسة تقريباً. ثم اضغط برفق على المحقنة لحقن محلول TST dextrose المنظم داخل العدسة. كتلة الخلايا الليفية.احقن ما بين 50 و 200 µL من المحلول المنظم لفصل كتلة الخلايا الليفية عن الظهارة المحيطة ومحفظة العدسة. لا تحقن أبدًا أكثر من 300 µL. وباستخدام ملقط عالي الدقة، قم بإزالة كتلة الخلايا الليفية المفككة من العدسة عبر موقع الشق الأمامي.يؤدي إزالة كتلة الخلايا الليفية من مكان التصاقها بالمحفظة الخلفية إلى إنشاء منطقة جرح قابلة للتكرار بدرجة عالية على الغشاء القاعدي، محاطة بالظهارة المجروحة. وبدءاً من الكيس المحفظي، قم بإجراء خمسة شقوق في الجانب الأمامي للعدسة وصولاً إلى خط الاستواء. ثم قم ببسط الشريحات الخمس الناتجة من محفظة العدسة مع الظهارة الملتصقة بها على طبق الزرع، بحيث يكون جانب المحفظة للأسفل وجانب الخلايا للأعلى.اضغط برفق باستخدام الملقط عند كل نقطة من نقاط النجمة لتثبيت الكبسولة في الطبق. سيؤدي ذلك إلى إحداث انبعاج صغير عند الأطراف الخمسة الخارجية لـ x explan، مما ينتج عنه التصاق مستدام بالطبق. بعد ذلك، قم بإزالة محلول tris dextrose buffer من الطبق الذي قطره 35 مليمتر واستبدله بـ 1.5 milliliters من M1 99 الدافئ مسبقاً.أوساط زراعية مدعمة بـ 1% من كل من L-glutamine والبنسلين والستريبتومايسين. يتم تغطية الطبق بغطائه ووضعه في الحاضنة. يوضع طبق المزرعة تحت المجهر التشريحي وملاحظة الخط الفاصل بين منطقة الهجرة المركزية ومنطقة الالتصاق الأصلية للخلايا الظهارية.بعد ذلك، استخدم ملقطين عاليي الدقة للإمساك بحافة كلا الجانبين من خط الترسيم بين المنطقتين. اسحب منطقة الالتصاق الأصلية برفق على طول الخط لفصل المنطقتين بسهولة. استمر في فصل المنطقتين حول المزرعة بأكملها حتى يتم فصل المنطقتين تماماً.ادرس الكسرين باستخدام تقنيات التحليل الجزيئي أو الكيميائية الحيوية القياسية. فور إزالة كتلة الخلايا الليفية، يتم تنشيط مجموعة فرعية من الخلايا الميزنكيمية للإصلاح الغنية بـ ment وتهاجر إلى حافة الجرح في الظهارة. تنتقل هذه الخلايا بسرعة إلى المنطقة الخالية من الخلايا في كبسولة الغشاء القاعدي الداخلي، وهي منطقة الهجرة المركزية لبدء عملية الالتئام.إن الجرح، والتقنية الموصوفة هنا تجهز هذا النظام النموذجي بشكل مثالي لمراقبة هذه العملية باستخدام المجهر أو كاميرا الفيديو، حيث يتقدم التئام الجرح بسرعة ليغطي مساحة كبيرة من الجرح بحلول اليوم الأول في المزرعة. وبحلول اليوم الثالث، تكتمل عملية التئام الجرح عادةً بعد انفصال منطقة الهجرة المركزية ومناطق الالتصاق الأصلية. وقد جرى تحليل الاختلافات الجزيئية بين هذه المناطق المتميزة هنا.تم قياس مستويات كيناز الالتصاق البؤري في المنطقتين، ووُجد أن كمية كيناز الالتصاق البؤري المفسفر قد ازدادت في منطقة الهجرة المركزية المتخصصة في الهجرة. وبمجرد إتقان هذه التقنية لمحاكاة جراحة الساد، يمكن إكمالها في غضون ثلاث دقائق إذا نُفذت بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء نموذج محاكاة لجراحة الساد يحاكي بدقة إصلاح الجروح في بيئة دقيقة طبيعية.

establishment-clinically-relevant-ex-vivo-mock-cataract-surgery-model

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

تم استخدام الثقافة الابتدائية الخلايا البطانية القرنية البقري للتحقيق في آلية القرنية الانتقالية البطانية الوسيطة. وعلاوة على ذلك، تم استخدام الفئران بطانة القرنية نموذج cryoinjury لإثبات القرنية الانتقالية البطانية الوسيطة في الجسم الحي.

في المختبر وفي النماذج الحية لدراسة الانتقال القرنية غشائي-الوسيطة

هذه المخطوطة يصف كيف شق مثل الآفات على الخلايا الظهارية مثقف مونولاييرس مريح نموذج الجرح الشفاء في المختبر، مما يسمح للتصوير بواسطة [كنفوكل] أو الفحص المجهري بالليزر، والتي يمكن أن توفر جودة عالية البيانات الكمية والنوعية لدراسة سلوك الخلية والآليات المعنية بالهجرة.

مجهرية على أساس أساليب التقييم للهجرة الخلية الظهارية أثناء التئام الجرح في المختبر

بروتوكول للسابقين فيفو الجهاز القرنية الثقافة النموذجية مفيدة للجرح شفاء الدراسات هو وصف. يمكن استخدام هذا النظام النموذجي لتقييم آثار عوامل لتعزيز الشفاء التجدد أو سمية العقاقير في بيئة متعددة الخلايا 3D منظم.

السابقين فيفو الجهاز القرنية الثقافة النموذجية لالتئام الدراسات

هنا نظهر تقنية محسنة لتقييم إصلاح الجروح باستخدام الجلد البشري السابق vivo جنبا إلى جنب مع نهج تلطيخ جبل كامل. توفر هذه المنهجية منصة ما قبل السريرية لتقييم علاجات الجروح المحتملة.

الإنسان السابق الجسم الحي الجرح نموذج ونهج تلطيخ جبل كامل لتقييم بدقة إصلاح الجلد

هنا ، يتم وصف بروتوكول لإنشاء جرح تآكل ظهاري مركزي للقرنية في الفأر باستخدام تريفين وسبود نادي غولف حاد. نموذج التئام جروح القرنية هذا قابل للتكرار بشكل كبير ويتم استخدامه الآن لتقييم التئام جروح القرنية المعرضة للخطر في سياق الأمراض.

نموذج التآكل الظهاري لدراسة التئام جروح القرنية

هنا ، يتم تطوير نماذج حيوانية تعتمد على الفئران والأرانب للإصابات الميكانيكية والكيميائية لظهارة القرنية لفحص العلاجات الجديدة والآلية الأساسية.

نماذج الحيوانات خارج الجسم الحي وفي الجسم الحي للإصابات الميكانيكية والكيميائية لظهارة القرنية

يوضح هذا البروتوكول الخطوات المختلفة التي ينطوي عليها جرح قرنية كتكوت جنيني في البيض. يمكن تحليل القرنيات المجددة أو المستعادة بالكامل بحثا عن إمكانات التجدد باستخدام تقنيات خلوية وجزيئية مختلفة بعد إجراء الجرح.

التحقيق في تجديد الأنسجة الخالية من الندوب في قرنية الفرخ الجنينية المصابة

يصف هذا العمل بروتوكولا تجريبيا جديدا يستخدم حاملا مطبوعا ثلاثي الأبعاد لتمكين تصوير الخلايا الحية عالي الدقة للكرات الأرضية المنزوعة. من خلال هذا البروتوكول ، يمكن ملاحظة نشاط إشارات الكالسيوم الخلوية في ظهارة القرنية المصابة من الكرات الأرضية خارج الجسم الحي في الوقت الفعلي.

تصوير الخلايا الحية للكرات الأرضية خارج الجسم الحي السليمة باستخدام حامل مطبوع 3D جديد

تصف هذه الورقة طريقة لإنشاء جروح في ظهارة Clytia hemisphaerica medusa الحية وصورة التئام الجروح بدقة عالية في الجسم الحي. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم تقنية لإدخال الأصباغ والأدوية لاضطراب عمليات الإشارات في الخلايا الظهارية والمصفوفة خارج الخلية أثناء التئام الجروح.

توصيف التئام الجروح الظهارية في الجسم الحي باستخدام الكائن الحي النموذجي Cnidarian Clytia hemisphaerica

هذه الطريقة نمذجة جراحة إعتام عدسة العين في الجسم الحي عن طريق إزالة خلايا ألياف العدسة من الفئران البالغة وترك كيس المحفظة مع الخلايا الظهارية للعدسة المرفقة (LECs). ثم يتم تقييم الاستجابة للإصابة في أوقات مختلفة بعد الجراحة باستخدام المعايير الجزيئية والمورفولوجية.

نمذجة جراحة الساد في الفئران

توفر زراعة أعضاء قرنية الخنازير خارج الجسم الحي والتئام الجروح الظهارية وسيلة اقتصادية وأخلاقية وقابلة للتكرار وكمية لاختبار سمية العين للمواد الكيميائية. كما أنها تساعد في توضيح الآليات الكامنة وراء تنظيم الظهارة وإصلاح الأنسجة ، وفي تقييم العلاجات لعلاج اعتلال القرنية السكري وتأخر التئام الجروح.

تقييم السمية العلاجية والكيميائية باستخدام قرنيات الخنازير المستزرعة بالأعضاء والتئام الجروح الظهارية

اكتشف كيفية إنشاء نموذج جراحة مائية سريري خارج الجسم لدراسة إصلاح الجرح الظهاري في أنسجة العين. يستخدم هذا النموذج أجنة الدجاج لمحاكاة ظروف جراحة الساد الحقيقية.

إنشاء ذات الصلة سريريا

استكشف المزيد من الفيديوهات