البصري مستدعى تسجيل المحتملين في نموذج الفئران التجريبية العصب البصري إزالة الميالين

الهدف العام من التجربة التالية هو مراقبة إزالة الميالين في العصب البصري في الجسم الحي. يتم تحقيق ذلك عن طريق زرع أقطاب كهربائية دقيقة أولا فوق القشرة البصرية. كخطوة ثانية ، يتم حقن الليين في العصب البصري ، مما يؤدي إلى آفة بؤرية لإزالة الميالين.

ثم يمكن إجراء تسجيلات محتملة مستحثة بصريا. في النهاية ، يظهر تحليل الانحدار ارتباطا خطيا قويا بين تأخير الكمون المحتمل المستحث بصريا والحجم. سيوضح هذا الفيديو تقنيتنا في تسجيل الإمكانات البصرية المستحثة من الفئران.

باستخدام أقطاب الجمجمة المزروعة ، سنعرض أيضا تقنية لإزالة الميالين البؤري للعصب البصري باستخدام تقنية الحقن المجهري. يتم إجراء جميع التجارب هنا في مختبرنا في كلية الطب بجامعة ماكواري. سيتم عرض هذه التقنية من قبل نيتين تشيتشي ، طالب الدكتوراه لدينا لبدء تخدير فأر بالغ يزيد عمره عن 12 أسبوعا بحقن داخل الصفاق من الكيتامين والماين قبل بدء الجراحة.

تحقق من عدم وجود ردود أفعال الانسحاب. كن مستعدا لإعطاء جرعات 10٪ من الكيتامين حسب الحاجة للتعامل مع أي ردود أفعال يجب أن تعود إلى أثناء الجراحة. بعد ذلك ، احلق الجلد في موقع الجراحة ثم ضع على وسادة حرارية لإكمال الاستعدادات.

افرك الجلد باليود بوفيدون ، ثنى ووضع مرهم للعيون. تأكد أيضا من الحفاظ على التعقيم باستخدام أدوات معقمة. لبدء الجراحة ، قم بعمل شق طولي في الجلد على خط الوسط للرأس.

ثم قم بتنظيف النسيج الضام للحصول على تعرض جيد للجمجمة. بعد ذلك ، باستخدام مثقاب يدوي صغير ، ضع ثقوب صغيرة بعناية ، سبعة ملليمترات خلف bgma وثلاثة ملليمترات جانبية إلى خط الوسط في الثقوب. زرع أقطاب لولبية من خلال الجمجمة وحوالي 0.5 ملليمتر في القشرة.

ثم قم بزرع قطب لولبي مرجعي على خط الوسط ، ثلاثة ملليمترات منقارية إلى bgma حسب الحاجة. ضع أسمنت الأسنان لتغليف الأقطاب الكهربائية اللولبية وإصلاحها. أخيرا ، خياطة الجلد مغلقا.

يمكن ترك الأقطاب الكهربائية مكشوفة بحيث لا يحتاج الجلد إلى إعادة فتحه لكل تسجيل. الآن ، قم بإعطاء دواء مضاد للالتهابات غير الستيرويدي أو مضادات الالتهاب غير الستيروئيدية ، أو مسكن أفيوني قبل أن يتعافى من التخدير. للإنهاء ، عالج البشرة بمرهم مضاد حيوي.

ضع في قفص التعافي مع وسادة الاحترار وراقبه باستمرار حتى يصبح متنقلا بالكامل. ثم اتركه يتعافى لمدة أسبوع على الأقل. قبل إجراء تسجيلات VEP ، قم بإعداد للجراحة كما هو موضح سابقا ، وقم بعمل شق جلدي من واحد إلى 1.5 سم فوق مدار العين ، وعينهم بمقص قزحية دقيقة.

افتح الأنسجة تحت الجلد والوصول إلى التجويف الحجاجي. ثم تحت منظار مجسم ، افتح كبسولة الملتحمة والأوتار الأمامية. بعد ذلك ، قم بسحب العضلات خارج العين والغدد الدمعية داخل الحجاج.

لكشف حوالي ثلاثة ملليمترات من العصب البصري حول العصب البصري ، استخدم شفرة العين لفتح طبقات المادة الجافية والعنكبوتية طوليا. ثم أدخل ماصة زجاجية صغيرة متصلة بحقنة هاميلتون في العصب، على بعد ملليمترين من الكرة الأرضية. على مدى 30 ثانية ، قم بحقن بلعة من اللين بالصبغة لإكمال الإجراء.

خياطة شق الجلد. ضع مرهم مضاد حيوي لمنع العدوى. انقل إلى وسادة التدفئة وراقبه حتى يتعافى.

بعد تخدير وتحضير الجلد كما كان من قبل ، انقله إلى غرفة مظلمة هناك. حافظ على درجة حرارة جسمه في حدود نصف درجة 37 درجة مئوية ، باستخدام نظام بطانية منزلي ومسبار درجة حرارة أثناء مراقبته في الظلام. قم بتكييف لمدة خمس إلى 30 دقيقة.

بعد نصف ساعة ، قم بتوسيع حدقة العين باستخدام قطرات العين الاستوائية IDE بنسبة 1٪. ثم باستخدام المقص والملقط. افتح الجلد فوق الجمجمة وقم بالوصول إلى قطبين لولبيين من NC الموضوعين مسبقا.

قم بتوصيل البراغي بمقياس المقاومة. ثم قم بقياس مقاومة القطب الكهربائي والحفاظ عليها أقل من خمسة كيلو أوم. الآن قم بتوصيل المسمار فوق القشرة البصرية المقابلة للعين المحفزة.

بعد ذلك ، أدخل قطبا كهربائيا بإبرة في الذيل لسطح الأرض. الآن ضع محفز جانزفيلد صغير معاير على الجلد حول الجفون لتحسين عزل العين. ثم قم بتقديم التحفيز الضوئي باستخدام 100 ومضة عند هرتز واحد مع مرشح تمرير منخفض عند هرتز واحد وتمريرة النطاق العالي.

تصفية عند 100 هرتز. بمجرد الانتهاء ، قم بخياطة الجلد مغلقا واحتفظ بالحيوان على وسادة تسخين للتعافي من التخدير. التسجيلات المتكررة من عدد قليل في الأسبوع إلى واحد كل بضعة أسابيع ممكنة.

الشفاعة ، تظهر آثار VEP أن هناك تأخيرا كبيرا في زمن انتقال N واحد. بعد حقن العصب البصري ، تم أخذ التسجيلات يوميا لإثبات قابلية التكاثر. يمكن ملاحظة آفات العصب البصري الجزئي لإزالة الميالين في أقسام الأنسجة الملطخة باللون الأزرق السريع الفاخر.

بعد قياس حجم الآفة ، أصبح الارتباط بين تأخير الكمون وحجم الآفة واضحا. يمكن استخدام هذه التقنية لإحداث آفات في العصب البصري وربط هذه الآفات بالتغيرات في VP ، ويمكن استخدامها كنموذج لإزالة الميالين البؤري. نظرا لأن حجم الآفة المستحث متغير تماما ، فمن المهم ربط التغييرات من الناحية النسيجية.