مراقبة الحركة الهدبية من الخلايا المشيمية الضفيرة طلائي السابقين فيفو

الهدف العام من التجربة التالية هو تحليل حركة الخلية الظهارية المشيمية ، السيليا خارج الجسم الحي. يتم تحقيق ذلك عن طريق استئصال الدماغ أولا من جنين الفأر أو الجرو لعزل أنسجة الضفيرة المشيمية. يتم تصور الحركة الهدبية من خلال تباين التداخل التفاضلي ، أو الفحص المجهري DIC ، ثم يتم الحصول على فيلم رقمي للأطراف الهدبية للتتبع اليدوي لمواضع الطرف الهدبي.

في النهاية ، يتم تصنيف حركات الأطراف المعاد تشكيلها لسيلية وقياسها كميا بناء على أنماط حركاتها. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في بيولوجيا الخلية ، مثل كيف يتم التحكم في وفيات الاضطرابات الهلية أثناء التطور ، وكيف يتغير نمط الحركة بمرور الوقت؟ كان تأثير هذه التقنيات هو التحليل الفسيولوجي والتشخيص للمسار.

الأمراض المرتبطة بسوريا حيث لا تزال فهمنا الأساسي لسوريا الحركية هي نتوءات. ابدأ بوضع فأر حديثي الولادة مغسول بالإيثانول بنسبة 70٪ ، رأسه في ليبوفيتز المثلج البارد L 15 ، متوسط في طبق معقم 10 سم مباشرة بعد قطع الرأس. بعد ذلك ، استخدم زوجا من ملقط صانع الساعات لإزالة فروة الرأس من الجمجمة.

ثم افتح الجمجمة بقسم متوسط على طول الخيط الطولي لكشف الدماغ ، متبوعا بقطع الأعصاب القحفية لحصاد العضو بأكمله. انقل الدماغ المعزول إلى طبق جديد مليء بالثلج الطازج ، والوسط البارد ، بحيث يكون الجانب الظهري متجها لأعلى وضع الطبق تحت مجهر ستيريو. ثم قم بتوجيه الأنسجة بحيث يتم وضع البصيلات الشمية عند موضع الساعة الثالثة ، وامسك الدماغ برفق باستخدام ملقط صانع الساعات.

من ناحية أخرى ، استخدم ملقط تشريح دقيق لقطع البرون الدماغي الذي يربط نصفي الكرة المخية بالجذع الدماغي. اضغط على Dion Cephalon لفصل نصفي الكرة الأرضية ووضع السطح المقطوع متجها لأعلى ، متبوعا بسحب الصفيحة لإزالة الضفيرة المشيمية البطينية الجانبية المتصلة بالجانب الجانبي من الحصين. عندما يتم عزل الضفيرة المشيمية ، انقل الأنسجة إلى طبق زجاجي قاع مقاس 35 ملم يحتوي على وسط طازج ، ووضع وزنا على الأنسجة لتثبيته برفق في مكانه في غضون 25 إلى 60 دقيقة من القتل الرحيم ، ابدأ التصوير المباشر للخلية الظهارية الضفيرة المشيمية الاضطرابات الهضمية ، عن طريق ضبط تركيز العدسة الشيئية بالعين.

اضبط المكثف بحيث يتوافق المركز والتركيز مع إضاءة Kula. ثم أدخل العناصر البصرية المناسبة في مسار الضوء لتتوافق مع بصريات DIC. حرك منشور DIC لضبط تباين الصور إلى موضع يتم فيه التعرف على بنية سطح الأنسجة بوضوح.

ثم قم بتبديل مسار الضوء إلى كاميرا الفيديو وقم بزيادة طاقة الضوء. مع إزالة مرشحات الكثافة المحايدة ، اضبط مجال المراقبة والتركيز ، واضبط الدقة الزمنية لكاميرا الفيديو على 200 هرتز ووقت التعرض إلى 0.1 مللي ثانية لفترة التصوير المطلوبة. ثم احصل على الصور بعد الحصول على مكدس الصور ، سيعرض كل إطار صورة واضحة لسيليا لتتبع أنماط الضرب يدويا لكل هدب.

استخدم مؤشر الماوس لتحديد موضع الأطراف الهدبية في كل إطار. ثم باستخدام البرنامج المناسب ، قم بتحليل بيانات المسار وتصنيف المسارات إلى أحد وضعين للحركة ذهابا وإيابا أو دورانا بالعين. باستخدام الصيغة ، احسب تردد الضرب الهدبي لدورات الضرب الهدبية المتعددة.

تتداخل الاضطرابات الهضمية الأخرى في نفس الخلية مع حركة كل هدب. بعد ذلك ، لتحليل التوحيد الزاوي لمحاور الضرب الهدبي داخل خلية واحدة. بالنسبة للمسارات ذهابا وإيابا ، قم بملاءمة مواضع أطراف سيليا إلى خط مستقيم يحدد ثيتا على أنها الزاوية التي يصنعها الخط مع المحور X.

بالنسبة للمسارات الدورانية ، تناسب المواضع مع القطع الناقص الذي يعرف ثيتا على أنه الزاوية التي يصنعها المحور الرئيسي للقطع الناقص مع المحور x. أخيرا ، للحصول على وصف كمي لكل مسار ، قم بتدوير المسارات عن طريق ثيتا لتحديد نسب العرض إلى الارتفاع الخاصة بها على أنها النسب بين عرض توزيعها على طول المحور x و y. في هذا المقطع الأول ، يظهر منظر علوي للخلايا الظهارية للضفيرة المشيمية مع سيليا من يوم ما بعد الولادة ، تم تصوير جرو فأر اثنين تم تصويرهما بواسطة الفحص المجهري بالفيديو عالي السرعة ، حيث يجعله السطح غير المنتظم لنسيج الضفيرة المشيمية مرئيا في كل من المستويين في التركيز البؤري والخارج.

في هذا المقطع الثاني ، يتم عرض عرض مكبر للمنطقة المعلبة من الفيلم السابق ، مما يتيح مراقبة أقرب للحركات الدورانية وذهابا وإيابا التي يظهرها الأهداب الفردي. هنا يتم تقديم مسارات حركات الأطراف الهدبية التمثيلية المعاد تشكيلها من سجلات الأفلام على مدار دورات متعددة مع الدورات الزمنية لإحداثيات x و y لمواضع الأطراف المرسومة في الرسوم البيانية. لإثبات تحول الطور بين الإحداثيين في هذه الرسوم البيانية ، تم تطبيع إحداثيات x و Y وتراكبها.

بينما يتم التعرف على CLIA المتحركة بسهولة عن طريق التصوير المباشر ، فليس من السهل تحديد CLIA غير المتحركة بهذه الطريقة. للتغلب على هذه الصعوبة ، يمكن أن يكون الفحص المجهري الإلكتروني المسح لا غنى عنه للحصول على صور كاملة للكليا بغض النظر عن حركتها. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إجراء التشريح على الفور بما يكفي للحفاظ على نضارة العينة والحفاظ على حركة سوريا.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير عينات الأنسجة بالحبوب الفيروسية ، وكذلك كيفية مراقبة وقياس معدل وفيات CX vivo.