Name: مرجع مرق الطريقة Microdilution لDalbavancin في المختبر حساسية اختبار من البكتيريا التي تنمو هوائيا (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 28 s
Description: تعلم طريقة التخفيف الدقيق في السائل لاختبار حساسية البكتيريا الموجبة لجرام للدالفافانسين. يوضح هذا البروتوكول خطوات التحضير الفريدة باستخدام DMSO وPolysorbate 80 لضمان نتائج دقيقة وقابلة للتكرار في المختبر.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

كان العمل السابق فيما يتعلق باختبار حساسية دالبافانسين ذا قيمة في تطوير طرق موحدة ويتم تقديم الاعتراف بهذا العمل إلى مختبرات JMI وروبرت ريني وبيث غولدشتاين.

ملاحظة: يرجى الرجوع إلى وثائق CLSI M7-A10 وM100-S25 و / أو ISO / FDIS 20776-1 للحصول على التفاصيل الكاملة للطريقة مرجعية مرق microdilution لقابلية المضادة للميكروبات 2، 3، 4 طرق إشارة تسمح الخيارات في بعض. إجراءات محددة لإعداد اللقاح ولوحة MIC الإنتاج لتحقيق نفس النتيجة النهائية. طريقة مفصلة هنا يتعلق أحد مضادات الميكروبات وكيل، dalbavancin، وبعض الخطوات تمثل واحدة من يحتمل عدة طرق يمكن أن يتم الإجراء المرجعية. احتياطات السلامة المناسبة (بما يتفق مع مستوى السلامة الحيوية 2) يجب أن تستخدم 10. يظهر شكل لوحة MIC تستخدم لغرض من هذا المنشور الفيديو في الجدول 1. 1. مخزن Dalbavancin مسحوق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند استلام التشخيص مسحوق الصف dalbavancin، مخزن في -20 درجة مئوية في بيئة المجفف في الفريزر غير إزالة الجليد. قبل استخدامها، ينبغي أن تتوازن مسحوق لوصول RT قبل الافتتاح. </li></ol> 2. إعداد التخفيفات لوحة MIC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل الأسهم لا تزيد عن 1600 ميكروغرام / مل من dalbavancin في أنيق (النقي) DMSO في الزجاج أو البلاستيك أنابيب معقمة، واستخدامها في نفس اليوم من إعداد أو تخزينها في -20 إلى -60 درجة مئوية أو أقل لاستخدامها في المستقبل في الفريزر غير إزالة الجليد. تأخذ في الاعتبار قوة من dalbavancin على النحو المنصوص عليه في الوثائق الواردة مع مسحوق، عندما يزن مسحوق (انظر المعادلة 1 على سبيل المثال 800 ميكروغرام / مل إعداد الأوراق المالية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع التخفيف الأسهم مماثل لنظام كما هو مبين في العمود 1 (&quot;تركيز المصدر&quot;) في الجدول رقم 2 مع DMSO أنيق من الزجاج أو البلاستيك أنابيب معقمة. استخدام الماصة واحد لقياس مخفف والماصة آخر لإضافة الأسهم dalbavancin الأولي إلى الأنبوب الأول. لكل تركيز الأسهم dalbavancin لاحق استخدام الماصة جديدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 100X النهائي تناسق لوحة MICالتخفيفات التموينية (تركيزات المتوسطة) مع DMSO أنيق. كما هو مبين في الأعمدة 2-4 من الجدول 2، والجمع بين كميات مناسبة من مصدر وDMSO لتحقيق المطلوب التركيز وسيطة (وحدات التخزين لاستخدامها سيعتمد على عدد من اللوحات MIC ليتم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 0.004٪ P80: إعداد محلول المخزون العاملة جديدة من 2٪ P80 بإضافة 0.1 مل P80 إلى 4.9 مل درهم 2 O. تعقيم عن طريق تمرير من خلال مرشح واستخدام محلول 0.22 ميكرون في نفس اليوم من التحضير. إعداد 0.004٪ P80 مخفف بجعل 1: 500 التخفيف من 2٪ P80 (على سبيل المثال، 0.3 مل من 2٪ إلى 149.7 P80 مل من CAMHB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وعلاوة على ذلك يخفف من تركيز المتوسطة أعدت في الخطوة 2.2 1: 100 في الموجبة تعديل مولر هينتون مرق (CAMHB) تستكمل مع 0.004٪ (ت / ت) بوليسوربات-80 (P-80) P-80 و / أو LHB (لالعقديات) بإضافة في ضعف التركيز النهائي لأن إضافة اللقاح (الخطوة 4.3) يؤدي إلى 1: 2 التخفيف. رؤية أعمدة 6 و 7 في الجدول 2 </stرونغ&gt;. </li></ol> 3. إعداد لوحات هيئة التصنيع العسكري <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستغناء عن 50 ميكرولتر من كل حل dalbavancin أعدت في الخطوة 2.3 في الآبار الملائمة لوحة MIC وتشمل وسائل الاعلام فقط في بئر واحدة (مراقبة نمو جيد). A الماصة متعدد القنوات مع نصائح عقيمة يمكن أن تستخدم لهذه الخطوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام لوحات فورا أو ختم مع فيلم من البلاستيك، مكان في أكياس بلاستيكية ووضع على الفور في الفريزر غير يذيب-في ≤ 20 درجة مئوية (ويفضل في ≤ 60 درجة مئوية) لحين الحاجة إليها. إذا تم استخدام ألواح المجمدة، وإزالة الأختام ووضع لوحات فردية على مختبر مقاعد البدلاء 15-30 دقيقة (حتى يتم إذابة محتويات أيضا) قبل الانتقال إلى لوحة التلقيح. </li></ol> 4. تلقيح لوحات هيئة التصنيع العسكري، نفذ الطهارة وإعداد مستعمرة عدد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختر العديد من المستعمرات المعزولة جيدا من أجار الدم 18-24 ساعة أو غيرها من لوحة أجار غير انتقائية. تلمس الجزء العلوي من كل مستعمرة مع حلقة عقيمة أو مسحة ونقل إلى 1-5 مل CAMHB أو الصورةألين حتى تعكر ما يعادل 0.5 مكفارلاند القياسية. تقييم العكر من خلال المقارنة البصرية إلى مكفارلاند 0.5 أو مع جهاز الضوئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غضون 15-30 دقيقة من التحضير، ويخفف من اللقاح 1: 100 في CAMHB (100 ميكرولتر في 10 مل CAMHB). بالنسبة لمعظم البكتيريا المختبرة ضد dalbavancin، باستثناء S. الرئوية، وهذا التخفيف توفير التركيز جيدا النهائي من 5 × 10 5 خلية / مل (النطاق المقبول هو 2-8 × 10 5 خلية / مل). لS. الرئوية، والتركيز البكتيري على أساس المقارنة التعكر إلى 0.5 مكفارلاند هو عادة أقل بكثير، وبالتالي، يخفف من اللقاح 01:25 (400 ميكرولتر في 10 مل CAMHB + 10٪ + LHB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غضون 15 دقيقة بعد إعداد اللقاح، ونقل 50 ميكرولتر من اللقاح النهائي لكل بئر (مع استثناء من السيطرة العقم أيضا) من لوحة هيئة التصنيع العسكري أعدت في الخطوة 3. الماصة متعدد القنوات باستخدام نصائح معقمة يمكن استخدامها لهذه الخطوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء فحص النقاءعن طريق نقل ونشر قسامة 1-10 ميكرولتر من سيطرة نمو إيجابية جيدا باستخدام حلقة عقيمة لأجار غير الانتقائية (على سبيل المثال، trypticase أجار الصويا مع 5٪ الأغنام الدم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد مستعمرة الإعداد عن طريق إزالة 10 ميكرولتر من سيطرة النمو بشكل جيد مع قناة الماصة واحد وطرف العقيمة ونقل إلى 10 مل من المياه المالحة (1: 1000 تمييع). خلط ونقل 100 ميكرولتر مع الماصة قناة واحدة وطرف العقيمة لمناسبة والمتوسطة أجار غير الانتقائية (على سبيل المثال، trypticase أجار الصويا مع 5٪ الأغنام الدم) وتنتشر على سطح أجار كامل مع حلقة عقيمة، وتكرار مرتين في اتجاهات مختلفة لضمان التوزيع حتى من اللقاح (01:10 تمييع). </li></ol> 5. لوحات احتضان MIC، مستعمرة العد ومركبات الطهارة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم كل لوحة هيئة التصنيع العسكري أو كومة من لا يزيد عن 4 لوحات في كيس من البلاستيك، مع شريط من البلاستيك أو مع غطاء من البلاستيك ضيقة قبل يحتضنها. بدلا من ذلك، وضع لوحة MIC فارغة على رالمرجع من كومة من لا وحات MIC أكثر من 4، ووضع منشفة ورقية رطبة في وعاء من البلاستيك، والألواح مكان MIC في وعاء من البلاستيك وعاء آمن وثيقة مع غطاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحات هيئة التصنيع العسكري في حاضنة الهواء المحيط في 35 ° C ± 2 درجة مئوية لمدة 16-20 ساعة (المكورات العنقودية والمكورات المعوية) و20-24 ساعة (العقديات) في غضون 30 دقيقة من التلقيح. احتضان عدد مستعمرة ولوحات النقاء تحت نفس الظروف إلا العقديات احتضان في 5٪ CO 2 الحاضنة. </li></ol> 6. قراءة MIC ومستعمرة عدد لوحات. تحقق الطهارة اللوحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قراءة MIC كما تحتوي على نسبة أقل أن يمنع تماما نمو البكتيريا في الآبار كما الكشف عنها بواسطة العين المجردة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد المستعمرات على لوحة العد مستعمرة. تتضاعف كل مستعمرة من قبل عامل التخفيف (1: 10000) (على سبيل المثال، 50 المستعمرات ما يعادل 5 × 10 5 خلية / مل). نطاق مقبول هو 20-80 المستعمرات (2-8 × 10 5 خلية / مل)، ويستخدم بمثابة APPROالمبدأ التوجيهي ximate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق لوحة النقاء. وإذا كان كل المستعمرات متشابهة إلى المستعمرات المستخدمة في الخطوة 4.1، ثم اللقاح يمكن اعتبار النقي. إذا كان هناك أي مستعمرات أخرى موجودة، ثم هناك احتمال لالملوث ليكون حاضرا في لوحة MIC وينبغي تكرار الاختبار. </li></ol> 7. تحقق نتائج مراقبة الجودة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الرجوع إلى الجدول رقم 3 لنطاقات المتوقع سلالات مراقبة الجودة CLSI. فقط تقرير نتائج اختبار العزلات إذا كانت النتائج MIC dalbavancin لمراقبة الجودة الكائن (الصورة) ضمن النطاق المتوقع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا حصلت على MIC من ≥0.25 ميكروغرام / مل لأي S. السريري الذهبية عزل، كرر الاختبار dalbavancin MIC و / أو إرسالها إلى مختبر مرجعي للتحقق منها. </li></ol>

<ol><li>Boucher, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Once-weekly+dalbavancin+versus+daily+conventional+therapy+for+skin+infection%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Once-weekly dalbavancin versus daily conventional therapy for skin infection.</a> The New England journal of medicine. 370, 2169-2179 (2014).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22M07-A10.+Methods+for+Dilution+Antimicrobial+Tests+for+Bacteria+that+Grow+Aerobically.%3A+Approved+Standard%22">M07-A10. Methods for Dilution Antimicrobial Tests for Bacteria that Grow Aerobically.: Approved Standard</a>. , Tenth Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22M100-S25.+Performance+Standards+for+Antimicrobial+Susceptibility+Testing%3B+Twenty-Fifth+Informational+Supplement%22">M100-S25. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-Fifth Informational Supplement</a>. , Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+laboratory+testing+and+in+vitro+diagnostic+test+systems+--+Susceptibility+testing+of+infectious+agents+and+evaluation+of+performance+of+antimicrobial+susceptibility+test+devices+--+Part+1%3A+Reference+method+for+testing+the+in+vitro+activity+of+antimicrobial+agents+against+rapidly+growing+aerobic+bacteria+involved+in+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22ISO%2FFDIS%22%5BJournal%5D)">Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems -- Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices -- Part 1: Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases.</a> ISO/FDIS. 20776-1, International Organization for Standardization. (2006).</li>
<li>Jones, R. N., Farrell, D. J., Flamm, R. K., Sader, H. S., Dunne, M. W., Mendes, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+analysis+of+vancomycin+to+predict+susceptible+categorization+of+dalbavancin%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Microbiol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Surrogate analysis of vancomycin to predict susceptible categorization of dalbavancin.</a> Diagn Microbiol Infect Dis. , (2015).</li>
<li>Turnidge, J., Paterson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Setting+and+revising+antibacterial+susceptibility+breakpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+microbiology+reviews%22%5BJournal%5D)">Setting and revising antibacterial susceptibility breakpoints.</a> Clinical microbiology reviews. 20, 391-408 (2007).</li>
<li>Rennie, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+broth+microdilution+antimicrobial+susceptibility+test+results+for+dalbavancin%2C+a+new+glycopeptide+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+microbiology%22%5BJournal%5D)">Factors influencing broth microdilution antimicrobial susceptibility test results for dalbavancin, a new glycopeptide agent.</a> Journal of clinical microbiology. 45, 3151-3154 (2007).</li>
<li>Arhin, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+polysorbate+80+on+oritavancin+binding+to+plastic+surfaces%3A+implications+for+susceptibility+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+agents+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Effect of polysorbate 80 on oritavancin binding to plastic surfaces: implications for susceptibility testing.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 52, 1597-1603 (2008).</li>
<li>Farrell, D. J., Mendes, R. E., Rhomberg, P. R., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+reference+broth+microdilution+method+for+testing+telavancin%3A+effect+on+MIC+results+and+correlation+with+other+testing+methodologies%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+agents+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Revised reference broth microdilution method for testing telavancin: effect on MIC results and correlation with other testing methodologies.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 58, 5547-5551 (2014).</li>
<li>Ribbon Panel, B. lue <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+Safe+Work+Practices+in+Human+and+Animal+Medical+Diagnostic+Laboratories%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Supplements%22%5BJournal%5D)">Guidelines for Safe Work Practices in Human and Animal Medical Diagnostic Laboratories.</a> MMWR Supplements. 61 (01), 1-101 (2012).</li>
<li>Anderegg, T. R., Biedenbach, D. J., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+quality+control+evaluations+for+susceptibility+testing+of+Dalbavancin+%28BI397%29%2C+an+investigational+glycopeptide+with+potent+gram-positive+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+microbiology%22%5BJournal%5D)">Initial quality control evaluations for susceptibility testing of Dalbavancin (BI397), an investigational glycopeptide with potent gram-positive activity.</a> Journal of clinical microbiology. 41, 2795-2796 (2003).</li>
<li>Koeth, L. M., Windau, A. R., Goldstein, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Broth+Microdilution+and+Agar+Dilution+Dalbavancin+and+Vancomycin+MIC+Results+for+42+Aerobic+Gram-positive+Bacteria.+Poster+132%5BTitle%5D)+AND+%22ASM%22%5BJournal%5D)">Comparison of Broth Microdilution and Agar Dilution Dalbavancin and Vancomycin MIC Results for 42 Aerobic Gram-positive Bacteria. Poster 132.</a> ASM. , San Francisco, CA. (2012).</li>
<li>Fritsche, T. R., Rennie, R. P., Goldstein, B. P., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+dalbavancin+MIC+values+determined+by+Etest+%28AB+BIODISK%29+and+reference+dilution+methods+using+gram-positive+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+microbiology%22%5BJournal%5D)">Comparison of dalbavancin MIC values determined by Etest (AB BIODISK) and reference dilution methods using gram-positive organisms.</a> Journal of clinical microbiology. 44, 2988-2990 (2006).</li>
<li>Mushtaq, S., Warner, M., Johnson, A. P., Livermore, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+dalbavancin+against+staphylococci+and+streptococci%2C+assessed+by+BSAC+and+NCCLS+agar+dilution+methods%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+antimicrobial+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Activity of dalbavancin against staphylococci and streptococci, assessed by BSAC and NCCLS agar dilution methods.</a> The Journal of antimicrobial chemotherapy. 54, 617-620 (2004).</li>
<li>Jones, R. N., Flamm, R. K., Sader, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveillance+of+dalbavancin+potency+and+spectrum+in+the+United+States+%282012%29%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+microbiology+and+infectious+disease%22%5BJournal%5D)">Surveillance of dalbavancin potency and spectrum in the United States (2012).</a> Diagnostic microbiology and infectious disease. 76, 122-123 (2013).</li>
</ol>

ساندرا مكوردي هو موظف من Durata التداوي. المتخصصين المختبرات، وشركة، صاحب العمل لورا Koeth وجينا فيشر، تم التعاقد من قبل Durata التداوي لإعداد المخطوطة. تم دفع رسوم النشر لهذه المادة من قبل اختصاصيي المختبرات، وشركة

يتم عرض تفاصيل الطريقة التالية لاعتبارات إضافية عند التحضير للاختبار dalbavancin MIC. سوف تصميم لوحة MIC يعتمد على عدد من العوامل المضادة للجراثيم لفحصها (أي.، dalbavancin وحده أو وكلاء متعددة) وأنواع من البكتيريا لفحصها. وينبغي أن تشمل تركيزات dalbavancin نقاط الإيقاف التفسيرية لجميع الأنواع البكتيرية لفحصها ومجموعة كاملة من التخفيفات المتوقع لسلالة واحدة على الأقل QC. يمكن تنظيم سلسلة تخفيف مضادات الميكروبات سواء في الصفوف أو الأعمدة اعتمادا على عدد من العوامل المضادة للجراثيم و / أو يعزل / لوحة وطريقة التلقيح. يجب أن يحسب حجم مسحوق dalbavancin والمرق للتأكد من أن كميات الأمثل ويتم إنتاج والنفايات هو الحد الأدنى. للمثال المستخدمة في هذا المنشور، وتقوم وحدات التخزين على إعداد فريقي هيئة التصنيع العسكري. وينبغي إعداد الموجبة تعديل مولر هينتون مرق وتعقيمها وفقا للإنسانالتحقق تعليمات ufacturer والعقم وسائل الإعلام. لوحات هيئة التصنيع العسكري يمكن أن تكون وتستخدم في نفس اليوم من إعداد أو أنها يمكن اختبارها مع الكائنات مراقبة الجودة المناسبة والألواح التحقق من صحة تخزينها في المجمد لاستخدامها في المستقبل. من المهم أن استخدام تقنيات معقمة في جميع أنحاء الداخلي. ليس هناك معايير صارمة للتحقق من تركيز اللقاح مع التهم مستعمرة. يمكن مراجعة التهم مستعمرة في البداية لكل أنواع اختبار و / أو دوريا للتحقق من صحة الخطوة تخفيف يؤديها في الخطوة 4.2. من المهم أن صلاحية مكفارلاند مستوى 0.5 محددا أيضا بشكل روتيني مع E. القولونية ATCC 25922 باستخدام إجراء مماثل إلى الخطوة 4.5. إذا لم تكن النتائج تعادل 1-2 × 10 8 كفو / مل، يجب الحصول على الجديد 0.5 مكفارلاند القياسية. إذا كانت التهم مستعمرة من الآبار MIC هي خارج نطاق مقبول (2-8 × 10 5 خلية / مل النتائج وهيئة التصنيع العسكري لعزل السريرية (ق) تختلف من عشريتوقع ه التوزيع الطبيعي (على سبيل المثال. 0،03-0،12 ميكروغرام / مل للبكتريا المكورة العنقودية البرتقالية) و / أو نتائج هيئة التصنيع العسكري لمراقبة الجودة عزل (ق) هي خارج النطاقات المتوقعة، اختبار التحقق من صحة ضروري ويمكن أن يكون له ما يبرره طريقة التعديل. ويقترح أن التحقق من صحة 0.5 مكفارلاند معيار يستخدم لتكرار العد مستعمرة (ق) وإذا كانت النتائج غير مرة أخرى خارج النتائج المتوقعة، وتخفيف اللقاح كما يؤديها في الخطوة 4.2 يجب أن تعدل وفقا لذلك وتكرار MIC. لاحظ أن الاختيار نقاء ضروري حتى لو يتم تنفيذ عدد مستعمرة لإجراء تعداد المستعمرة يستخدم حجم المخففة التي قد لا يكشف بالضرورة تركيزات أقل من الكائنات تلوث. لاختبار هيئة التصنيع العسكري أن تعتبر صالحة، يجب أن يحدث نمو مقبول في مراقبة النمو بشكل جيد. بالنسبة لمعظم البكتيريا التي سيتم اختبارها ضد dalbavancin (أي.، المكورات العنقودية، المكورات العقدية والمكورات المعوية، سوف ينظر النمو كزر (عادة&gt; 2 مم) وأقل الابequently، قد تظهر النمو كما التعكر في البئر. وخلافا لبعض العوامل المضادة للجراثيم التي قد تظهر زائدة اعتبارا زيادة تركيزات، تعرف النهاية dalbavancin عادة بشكل جيد. هناك العديد من أجهزة العرض يهدف إلى تسهيل اختبارات القراءة microdilution، والتي يمكن استخدامها لقراءة dalbavancin تحتوي على لوحات طالما لا يوجد حل وسط في القدرة على التمييز النمو في الآبار. ترتبط الخطوات الحاسمة ضمن بروتوكول للمراحل الإجراءات التي تتعلق ذوبان dalbavancin وإضافة P80. من المهم أن الحد الأقصى لتركيز dalbavancin المستخدم هو لا يزيد عن 1600 ميكروغرام / مل، ويستخدم هذا DMSO كمادة مذيبة وتعد أن تركيزات المتوسطة في DMSO قبل اتخاذ التخفيفات مرق بحيث التركيز النهائي من DMSO في MIC لوحة الآبار ليس أكبر من 1٪. DMSO هو بلوري ولذا، فإن استخدام الزجاجات القديمة من DMSO لconsideratايون فيما يتعلق dalbavancin الذوبان. ومع ذلك، في حين أظهرت دراسة BMD صغيرة مع سلالات مراقبة الجودة هذا لا يجب أن يكون متغير مهم (انظر القسم النتائج)، ومن الممارسات الجيدة لاستخدام زجاجات جديدة أو فتح مؤخرا من DMSO. ومن المهم أيضا أن P80 يضاف إلى المرق في الخطوة الأخيرة من الإعداد تخفيف المخدرات وغير بتركيز نهائي من 0.002٪ في MIC جيدا. الإجراء BMD المضمنة هنا يستخدم إعداد لوحات MIC باستخدام 50 ميكرولتر / جيد في dalbavancin وP-80 تركيزات مرتين على التركيز النهائي وإضافة اللقاح مع 50 ميكرولتر / جيد بحيث الحجم النهائي / هو من 100 ميكرولتر. يسمح هذا الأسلوب للتنسيق لوحة واحدة MIC إلى أن يتم إنتاجها لاختبار كلا S. الذهبية وS. الرئوية لأنه لا يمكن أن تضاف الحصان الدم هي lysed إلى اللقاح. طرق بديلة لإعداد لوحات MIC باستخدام 100 ميكرولتر / جيد مع إضافة ما يصل إلى 10 ميكرولتر / جيد موصوفة فيCLSI وISO الإجراءات. وتوقف عرضة dalbavancin لS. العنقودية الذهبية هي ≤0.12 ميكروغرام / مل (FDA حزمة إدراج). كما هو مبين في المراقبة الأخيرة، وتحول دون غالبية العزلات التي كتبها dalbavancin عند مستويات 0.06 ميكروغرام / مل 15. مع نقطة توقف عرضة بالقرب من MIC مشروط، أي الاختلاف في هيئة التصنيع العسكري نتيجة للاختلافات طريقة يمكن أن تؤثر على معدلات الحساسية. لأن الإجراء BMD لdalbavancin يتضمن بعض الخطوات فريدة من نوعها (على وجه التحديد، واستخدام DMSO في إعداد الأوراق المالية والتخفيفات المخدرات وسيطة و 0.002٪ P80 في MIC جيدا، فمن الضروري أن يتبع طريقة بالضبط. الكائن S. الذهبية QC (آي تي ​​سي سي 29213) مع واضحة جدا MIC dalbavancin مشروط من 0.06 ميكروغرام / مل، فقد كان مؤشرا جيدا على طريقة الاختلاف وينبغي أن تستخدم بشكل روتيني للتحقق من صحة طريقة BMD. إذا كانت النتائج هي هيئة التصنيع العسكري مع النطاق المتوقع من 0،03-0،12 ميكروغرام / مل، ولكن تتجه إما إلى انخفاض أو المهزومةح جانب من هذا النطاق، يوجد ما يبرر مواصلة التحقق من صحة هذه الطريقة. يوصى بإضافة 0.002٪ P80 لجميع الكائنات موجبة الجرام ذات الصلة (staphylococcci، المكورات المعوية، والمكورات العقدية). ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أنه قد ثبت أن هي lysed حصان الدم يعمل على غرار P-80 بالنسبة لسياستها المعادية ملزم القدرة وأن إضافة P-80 إلى CAMHB + LHB لا يوجد لديه تأثير إضافي على dalbavancin العقديات النتائج هيئة التصنيع العسكري. لا يوجد حاليا أي طريقة نشر القرص لاختبار dalbavancin وبسبب الارتباط الضعيف لBMD والنتائج AD، اختبار الحساسية من dalbavancin باستخدام طريقة AD لا ينصح 12، 14. طريقة BMD ينبغي أن تستخدم لتقييم المستقبل dalbavancin الحساسية وكمعيار الذهب للتنمية التجارية اختبارات الحساسية المضادة للميكروبات.

Dalbavancin هو lipoglycopeptide شبه الاصطناعية التي وافقت عليها ادارة الاغذية والعقاقير مايو 2014 لعلاج الجلد وبنية الجلد الالتهابات البكتيرية الحادة التي تسببها الكائنات إيجابية الجرام 1. الهدف الأساسي من تفاصيل هذه الطريقة في شكل شريط فيديو هو توفير توجيهات واضحة إلى المختبر والبحوث السريرية العلماء لاختبار النتائج والإبلاغ عنها dalbavancin قابلية دقيقة وقابلة للتكرار. يتم تنفيذ تقرير لعامل مضاد للميكروبات MIC بالطرق التجارية بشكل روتيني في مختبرات السريرية لتقييم النشاط في المختبر وكيلا ضد البكتيريا المسببة للأمراض. الطريقة الموصوفة هنا هو طريقة microdilution مرق على النحو الموصى به من قبل CLSI وISO 2،3،4. منذ dalbavancin طرق قابلية التجارية غير متوفرة حاليا (في ذلك الوقت من هذا المنشور) ونشر القرص وطرق التخفيف آغار لا ينصح حاليا وأو dalbavancin وطرق مرق إشارة تخفيف هي الخيارات المتاحة حاليا 12،14. وبما أن هذه الطريقة المرجعية ليست التجاري وFDA مسح الأسلوب في المختبر التشخيصي، والمختبرات السريرية في الولايات المتحدة الأمريكية أن استخدام هذا الإجراء لاختبار المريض يجب أن تلتزم بالمتطلبات التنظيمية لمختبر المتقدمة اختبار (LDT). ومن المتوقع أن كما يزيد استخدام dalbavancin، والمزيد من مختبرات سوف يكون هناك حاجة لاختبار هذا المركب. فانكومايسين اختبار كبديل لتحديد dalbavancin قابلية S. تم التحقق من صحة الذهبية 5. ومع ذلك، قد يكون dalbavancin فعال ضد فانكومايسين وسيط S. الذهبية (فيزا)، وبالتالي، الأطباء أن يطلبوا النتائج dalbavancin MIC. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يطلب النتائج MIC الأنواع البكتيرية الأخرى. وتوقف عرضة FDA لdalbavancin ضد S. وقد أنشئت الذهبية في ≤0.12 ميكروغرام / مل. ادارة الاغذية والعقاقير المخصصة فقط susceptiفئة بلي بسبب عدم وجود بيانات على العزلات مقاومة. توزيع MIC الطبيعي بين النوع البري S. الذهبية يعزل ما بين 0،03-0،12 ميكروغرام / مل، مع MIC مشروط واضح من 0.06 ميكروغرام / مل. وهناك اختلاف طفيف في نتائج MIC نتيجة لأسلوب الفرق، بالإضافة إلى الاختلاف BMD المتأصل في ± واحد التخفيف، ويحتمل أن يكون لها تأثير كبير على معدلات الحساسية. 6 مماثلة إلى وكلاء lipoglycopeptide أخرى، يمكن أن dalbavancin اختبار الحساسية تكون صعبة نتيجة ل من الذوبان وحجم كبير نسبيا من جزيء وخصائص ملزمة لها 7،8،9. طريقة إشارة BMD هو موضح هنا تضم ​​اثنين من الخطوات المحددة التي هي فريدة من نوعها لعملاء غير قابلة للذوبان و / أو وكلاء lipoglycopeptide: (1) استخدام DMSO لإعداد الحلول الأسهم و(2) إضافة-P 80 0.002٪ في لوحة MIC النهائية التخفيفات. والهدف من هذا المنشور الفيديو هو توفير الوضوح على dalbavancin طريقة BMD وspecificaالتركيز LLY على هذه الخطوات الرئيسية، لضمان النتائج MIC دقيقة وقابلة للتكرار.

<table><tbody><tr><td>شركة Dalbavancin</td><td>Metrics، Inc.</td><td>جرينفيل ، نورث كارولاينا</td><td>BI-397</td></tr><tr><td>Vancomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>سانت لويس ، MO</td><td>C5793</td></tr><tr><td>كاتيون معدل Mueller Hinton Broth</td><td>Becton Dickinson</td><td>Sparks ، MD</td><td>212322</td></tr><tr><td>Lysed دم الحصان</td><td>Cleveland Scientific</td><td>Bath ، OH</td><td></td></tr><tr><td>Dose-it مضخة التمعجية</td><td>Integra Biosciences</td><td>Hudson ، NH</td><td></td></tr><tr><td>ماصة متعددة القنوات (Viaflo II)</td><td>Integra</td><td>Hudson ، NH</td><td>4164</td></tr><tr><td>12 قناة ماصة (مصفوفة) ThermoFisher</td> <td>Scientific</td><td>Waltham ، MA</td><td></td></tr><tr><td>Single channelpPipets (Ovation 10 & micro ؛ ل - 100 & ميكرو ؛ ل)</td> <td>VistaLab</td><td>Brewster ، NY</td><td></td></tr><tr><td>96 بئر ميكروبليت</td><td>Greiner Bio-one</td><td>Monroe ، NC</td><td></td></tr><tr><td>650161 50 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية السفلية ذات الغطاء المسطح</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham ، MA</td><td></td></tr><tr><td>16x125 مم أنابيب زجاجية يمكن التخلص</td><td>منها ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham ، MA</td><td></td></tr><tr><td>12x17 مم غطاء المفاجئة ، أنابيب البوليسترين</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham ، MA</td><td></td></tr><tr><td>16 مل أنابيب الطرد المركزي</td><td>BioExpress</td><td>Kaysville ، UT</td><td>C-3394-2</td></tr><tr><td>خزانات الكاشف</td><td>Integra Biosciences</td><td>Hudson ، NH</td><td>4312</td></tr><tr><td>Disposable sterilelLoops (1 & micro ؛ ل & أمبير 10 وميكرو ؛ ل)</td> <td>Biologix</td><td>Lenexa ، KA</td><td>65-0001،65-0010</td></tr><tr><td>أجار الصويا Tryptic + 5٪ دم</td><td>الأغنام Becton Dickinson</td><td>Sparks ، MD</td><td></td></tr><tr><td>Incubator (محيط) حاضنة</td> <td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>(5٪ CO2)</td> <td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analytical Balance &nbsp ؛</td>قفازات <td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham ، MA</td><td></td></tr><tr><td></td><td>معاطف</td><td></td>مختبر Kimberly-Clark <td></td> 52817</tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

مرجع مرق الطريقة microdilution لdalbavancin<em&gt; في المختبر</em&gt; حساسية اختبار من البكتيريا التي تنمو هوائيا

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

يتم إجراء اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات (AST) لتقييم النشاط في المختبر من العوامل المضادة للجراثيم ضد البكتيريا المختلفة. وتستخدم النتائج AST، والتي يتم التعبير عنها تركيزات المثبطة الدنيا (البلدان المتوسطة الدخل) في مجال البحوث للتنمية المضادة للميكروبات ورصد تطور المقاومة والإعداد السريرية لتوجيه العلاج المضادة للميكروبات. Dalbavancin هو عامل lipoglycopeptide شبه الاصطناعية المضادة للميكروبات التي وافق مايو 2014 من قبل إدارة الغذاء والدواء (FDA) لعلاج الجلد وبنية الجلد الالتهابات البكتيرية الحادة التي تسببها الكائنات موجبة الجرام. ميزة dalbavancin على العلاجات المضادة للالعنقوديات الحالية لنصف العمر الطويل، والذي يسمح لجرعات مرة واحدة أسبوعيا. Dalbavancin ديه نشاط ضد المكورات العنقودية الذهبية (بما في ذلك مثسلين عرضة S. الذهبية [MSSA] ومقاومة للميثيسيلين S. الذهبية [MRSA])، المخثرة سلبية المكورات العنقودية، <em&gt; العقدية الرئوية، العقدية مجموعة ذبحية، β-الانحلالي العقديات المكورة المعوية وعرضة. على غرار غيرها من العوامل lipoglycopeptide مؤخرا، والتحسين من CLSI وISO مرق طرق اختبار قابلية يشمل ذلك استخدام سلفوكسيد ثنائي ميثيل (DMSO) كمذيب عند إعداد الحلول الأسهم وبوليسوربات 80 (P80) للتخفيف من حدة تمسك وكيل لمن البلاستيك. قبل الدراسات السريرية وخلال التطوير الأولي للdalbavancin، لم تجر دراسات قابلية مع استخدام P-80 و تميل النتائج MIC أن يكون تم الحصول عليها 2-4 العالي أضعاف، وبالمثل أعلى MIC النتائج مع أجار طريقة التخفيف الحساسية. وكان أول شملت Dalbavancin في CLSI مرق microdilution الجداول منهجية في عام 2005 والمعدل في عام 2006 لتوضيح استخدام DMSO وP-80. وmicrodilution مرق (BMD) الإجراء المبين هنا هو محدد لdalbavancin ويتفق مع الأساليب CLSI وISO، مع خطوة بخطوة بالتفصيل وFOCلنا على خطوات حاسمة وأضاف لوضوح.

هنا ، نقدم بروتوكولا لتحديد قابلية دالبافانسين للبكتيريا موجبة الجرام ذات الصلة سريريا باستخدام منهجية مرجعية للتخفيف الدقيق للمرق.

مرجع مرق الطريقة Microdilution لDalbavancin<em&gt; في المختبر</em&gt; حساسية اختبار من البكتيريا التي تنمو هوائيا

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

الهدف العام من الإجراء التالي هو تحديد التركيز المثبط الأدنى لـ dalbavancin. ولتحقيق ذلك، يتم استخدام طريقة التخفيف الدقيق في المرق مع التركيز على الخطوات الرئيسية الفريدة لـ Dalbavancin. يتم تحضير المحلول المخزون والتخفيفات المتوسطة لـ dalbavancin في DMSO، بينما تُجرى التخفيفات النهائية في مرق Mueller Hinton المعدل بالكاتيونات والمضاف إليه polysorbate.يتم توزيع التخفيفات في طبق يحتوي على 96 بئراً وتلقيحها بمعلق قياسي من البكتيريا. ثم يُحضن الطبق لمدة تتراوح بين 16 و24 ساعة ويُفحص لتحديد الحد الأدنى من كمية dalbavancin المطلوبة لتثبيط النمو البكتيري. إن الالتزام بهذه الطريقة القياسية سيضمن الحصول على نتائج متسقة مع كل من العزلات السريرية والعزلات المخصصة لمراقبة الجودة كما هو موضح هنا. يُعد Dalbavancin عاملاً مضاداً للميكروبات من نوع lipo glycopeptide شبه اصطناعي، وافقت عليه إدارة الغذاء والدواء (FDA) في مايو 2014 لعلاج عدوى الجلد والبنى الجلدية البكتيرية الحادة الناتجة عن الكائنات موجبة الجرام.تصف هذه الطريقة طريقة التخفيف الدقيق في المرق المعيارية لاختبار الحساسية تجاه عقار daptomycin، والتي تتضمن استخدام DMSO لتحضير المحاليل الأم في polysorbate 80 للتقليل من التصاق العامل بالبلاستيك. ويُعد العرض المرئي لهذه الطريقة مفيداً، نظراً لأن خطوات تحضير المحلول الأم ومحاليل أطباق التركيز المثبط الأدنى (MIC) ليست نموذجية مقارنة بمعظم العوامل المضادة للميكروبات. وتعد هذه الخطوات فريدة للعوامل من نوع lipoglycopeptide، ومن المهم اتباعها لضمان الحصول على نتائج MIC دقيقة وقابلة للتكرار.ستقوم جينا فيشر، وهي باحثة علمية من مختبري، باستعراض هذا الإجراء. يرجى ملاحظة وجوب اتباع احتياطات السلامة المناسبة والمتوافقة مع المستوى الثاني من السلامة البيولوجية عند تنفيذ الإجراء التالي. ابدأ بوزن الكمية المناسبة من dalbavancin لتحضير محلول مركز بتركيز 800 µg/mL.أضف الكمية المناسبة من NEAT DMSO إلى أنبوب زجاجي أو بلاستيكي معقم، ثم انقل المسحوق إلى الأنبوب وقم بمزجه باستخدام جهاز vortex. بعد ذلك، وباستخدام المحلول المخزون من DALBAVANCIN بتركيز 800 microgram per milliliter، قم بتحضير تركيزات تعادل 100 x من التركيزات النهائية لصفيحة MIC كما هو موضح في الأعمدة من واحد إلى أربعة. يُشار إلى هذه التركيزات باسم التركيزات المتوسطة.سيعتمد الحجم الإجمالي المُحضّر على عدد لوحات التركيز المثبط الأدنى (MIC). وأخيراً، قم بتخفيف التركيزات المتوسطة بنسبة 1 إلى 100 في مرق مولر هينتون غير المعدل من الكاتيونات، والمعروف أيضاً باسم C-A-M-H-B، والمُدعم بنسبة 0.004% من P 80. ويكون تركيز العمل الناتج من DALBAVANCIN و P 80 ضعف التركيز النهائي.بما أن إضافة اللقاح ستؤدي إلى تخفيف بنسبة واحد إلى اثنين باستخدام ماصة متعددة القنوات ذات رؤوس معقمة، قم بتوزيع 50 microliters من كل تخفيف من dalbavancin في الآبار المناسبة من لوحة التخفيف الدقيق المعقمة ذات 96 بئرًا. يسمح تنسيق لوحة MIC باختبار ثماني لقاحات في كل لوحة. إذا لم يتم استخدام اللوحات على الفور، قم بتغطيتها بفيلم بلاستيكي لإحكام إغلاقها، ثم ضعها في أكياس بلاستيكية وخزنها في مجمد غير مذيب للثلج عند درجة حرارة minus 60 degrees Celsius على الأقل حتى وقت الحاجة إليها.في هذا العرض التوضيحي، سيتم تلقيح طبق واحد مُعد حديثاً. لتحضير اللقاح، اختر عدة مستعمرات معزولة جيداً من طبق آغار دم أو أي طبق آغار غير انتقائي آخر تم تحضينه لمدة تتراوح من 18 إلى 24 ساعة. هنا، يتم استخدام سلالات مراقبة الجودة من s aria و EPHI callous.المس أعلى كل مستعمرة بمسحة معقمة وانقل جزءًا منها إلى أنبوب يحتوي على واحد إلى خمسة ملليلتر من C-A-M-H-B أو محلول ملحي. استمر في النقل حتى تتطابق العكارة مع معيار 0.5 McFarland خلال 15 إلى 30 دقيقة من التحضير، ثم خفف اللقاح بنسبة 1 إلى 100 في C-A-M-H-B للوصول إلى تركيز نهائي قدره 5 × 10⁵ CFU لكل ملليلتر. النطاق المقبول هو 2 إلى 8 × 10⁵ CFU لكل ملليلتر.باستخدام ماصة متعددة القنوات ذات رؤوس معقمة على الفور، انقل 50 µL من اللقاح النهائي إلى كل بئر مناسب في لوحة MIC هنا. يتم تلقيح أربعة صفوف بكل من العزلتين، بمجموع أربع مكررات لكل عزلة. بعد ذلك، ولإجراء فحص النقاء، استخدم ماصة لنقل من 1 إلى 10 µL من المحلول الموجود في ضابط النمو الإيجابي إلى آجار غير انتقائي، مثل try decay's soy agar مع 5% sheep blood.استخدم عروة تعقيم لنشر المحلول على سطح الطبق. أدر الطبق بزاوية 90 درجة وقم بالتخطيط مرة أخرى لضمان توزيع اللقاح بشكل متساوٍ. غطِّ الطبق وضعه جانبًا.تحضيراً لعد المستعمرات، استخدم ماصة أحادية القناة لنقل 10 µL من المحلول الموجود في بئر ضبط النمو إلى 10 mL من خليط المحلول الملحي، ثم انقل 100 µL إلى وسط زراعي غير انتقائي مناسب، مثل أغار فول الصويا والتريبتون مع 5% دم أغنام، وباستخدام عروة تعقيم، وزع المحلول على كامل سطح الآجار. كرر هذه العملية مرتين في اتجاهات مختلفة لضمان التوزيع المتساوي للقاح. بعد ذلك، قم بتكديس ما يصل إلى أربع لوحات MIC في حاوية بلاستيكية مع التأكد من إغلاق اللوحة العلوية بإحكام باستخدام غطاء.بعد ذلك، ضع منشفة ورقية مبللة داخل الحاوية البلاستيكية وأغلقها بإحكام باستخدام الغطاء في غضون 30 دقيقة من التلقيح. يتم تحضين ألواح الـ MIC، وطبق عد المستعمرات، وطبق فحص النقاء في حاضنة هواء محيطي عند درجة حرارة 35 ± 2 درجة مئوية لمدة تتراوح من 16 إلى 20 ساعة. وفي اليوم التالي، يتم تحديد التركيز المثبط الأدنى بأنه أدنى تركيز يثبط النمو البكتيري تماماً في الآبار كما يتم رصده بالعين المجردة.حدد عدد المستعمرات في طبق عد المستعمرات. اضرب العدد الذي تم حسابه في معامل التخفيف. على سبيل المثال، 50 مستعمرة مضروبة في معامل تخفيف قدره 10,000 تساوي 5 × 10⁵ CFU لكل milliliter.يتراوح النطاق المقبول من 20 إلى 80 مستعمرة، وهو ما يعادل من مرتين إلى ثماني مرات 10⁵ وحدة تشكيل مستعمرة لكل ml. يعد تركيز اللقاح متغيراً هاماً للتحكم في اختبار الحساسية من أجل الحصول على نتائج دقيقة. أخيراً، يتم التحقق من طبق النقاء.إذا كانت جميع المستعمرات مشابهة للمستعمرات المستخدمة كلقاح، فعندئذٍ يمكن اعتبارها نقية. أما إذا وجدت أي مستعمرات أخرى، فهذا يشير إلى احتمالية وجود ملوث في لوحة الـ MIC ويجب إعادة الاختبار. تم مقارنة نتائج الـ MIC بتلك التي تم الحصول عليها باستخدام طريقة التخفيف في الآجار (agri dilution method) كما هو موضح هنا.تكون نتائج التركيز المثبط الأدنى (MIC) بطريقة التخفيف في الآجار لـ Dal bevans عادةً أعلى بمقدار مرتين إلى ثماني مرات مقارنة بطريقة التخفيف في المرق. نتائج التركيز المثبط الأدنى (MIC) بالتخفيف الدقيق. ويتناقض هذا مع نتائج الفانكوميسين، والتي تكون متماثلة بين طريقتي المرق والآجار.وبناءً على ذلك، لا يُنصح باستخدام طريقة التخفيف في الآجار لاختبار مرق الدالبافانسين (dalbavancin). وبالنسبة لنتائج التركيز المثبط الأدنى (MIC) بطريقة التخفيف الدقيق، يجب أن تقع نتائج ضبط الجودة ضمن النطاقات المتوقعة كما هو موضح هنا. وقد كانت كائنة ضبط الجودة SS، وهي A TCC 2 9 2 1 3 ذات التركيز المثبط الأدنى المنوالي الواضح جدًا والبالغ 0.06 micrograms per milliliter، مؤشرًا جيدًا على تباين الطريقة.إذا كانت النتائج التي تم الحصول عليها خارج النطاقات المتوقعة لكائنات مراقبة الجودة أو تميل إلى الطرف المنخفض أو المرتفع من النطاق، فإن ذلك يستدعي إجراء مزيد من التحقق من صحة الطريقة. وبالإضافة إلى التحقق من صحة الطريقة باستخدام كائنات مراقبة الجودة لـ dalbavancin، يمكن أن توفر بيانات MIC من برامج مراقبة مضادات الميكروبات الإقليمية أساساً لنتائج MIC المتوقع الحصول عليها في بيئة المختبر السريري كما هو موضح هنا؛ حيث كانت نتائج Dal b Anson MIC للعزلات التي تم جمعها في أوروبا والولايات المتحدة الأمريكية في الفترة من 2011 إلى 2013 أقل من 0.25 micrograms per milliliter لـ 99.9% من SIUs و 100% من streptococci. وبناءً على بيانات المراقبة هذه، يتضح أن نتائج MIC لـ dalbavancin لـ staphylococci و streptococci التي تزيد عن 0.12 micrograms per milliliter هي نتائج نادرة.في حال ظهور أرقام أعلى، يجب تكرار الاختبار أو إرساله إلى مختبر مرجعي للتحقق من صحته. يُعد تحضير التخفيف المخزون في DMSO وإضافة P 80 إلى تخفيف المرق بتركيز 0.002% في بئر MIC النهائي من الخطوات الحاسمة للحصول على نتائج MIC دقيقة وقابلة للتكرار لعقار dalbavancin. وكما هو الحال دائماً، وخاصة في هذا المجال المتعلق بتطور المقاومة البكتيرية، فإن النتائج الدقيقة للحساسية تجاه مضادات الميكروبات تُعد أمراً بالغ الأهمية لاختيار الطبيب للعلاج المناسب.

a-reference-broth-microdilution-method-for-dalbavancin-vitro

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات من المتفطرة السل يشكل تحديا لكنها حاسمة لرعاية المرضى. هذا الشكل لوحة microtiter يقدم اختبار مضاد المتفطرات 12 المخدرات ويوفر الحد الأدنى من تركيز المثبطة (MIC) القيم ، والتي سوف تساعد في العلاج المناسب.

اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات مجمع المتفطرة السل للأدوية الخط الأول والثاني عن طريق التخفيف في شكل حساء بلايت Microtiter

التشخيص الحالية اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات يعتمد على نمو العوالق من العزلات في المغذيات الظروف، غنية الهوائية. هنا، ونحن توظيف بديل المتوسطة البلغم الاصطناعية لدراسة قابلية مضادات الميكروبات من الأغشية الحيوية الزائفة الزنجارية تحت كل الظروف الهوائية وmicroaerophilic أكثر تمثيلا في الرئة التليف الكيسي.

استخدام متوسط ​​البلغم الاصطناعي لاختبار فعالية المضادات الحيوية لمكافحة<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; في شروط أكثر ملاءمة لالرئة التليف الكيسي

المصدر: Koeth، L. M.، et al.، طريقة التخفيف الدقيق للمرق المرجعي لاختبار الحساسية في  المختبر للبكتيريا التي تنمو هوائيا. J. Vis. Exp. (2015).يوضح هذا الفيديو طريقة التخفيف الدقيق للمرق لتحديد الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC) لمضاد حيوي ليبوغليكوببتيد ضد البكتيريا موجبة الجرام. وهو يغطي عزل المستعمرة البكتيرية ، والتخفيف ، وتلقيح آبار الصفيحة الدقيقة بتركيزات متفاوتة من المضادات الحيوية ، والتحقق من نقاء الثقافة وعدد الخلايا. يشرح الفيديو أيضا كيف يعطل ارتباط المضادات الحيوية تخليق جدار الخلية...

طريقة التخفيف الدقيق للمرق لاختبار حساسية المضادات الحيوية للبكتيريا موجبة الجرام

يوضح هذا الفيديو طريقة قائمة على لوحة الميكروتيتر لتحديد الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC) للمضادات الحيوية للاختبار ضد البكتيريا. عند إضافة تعليق من العامل الممرض البكتيري Pseudomonas aeruginosa إلى صفيحة ميكروتيتر تحتوي على تخفيفات متسلسلة لمضاد حيوي اختبار ، ومثبط لإنتاج البيوميلانين بواسطة البكتيريا ، يتم قياس الكثافة البصرية للآبار لحساب الحد الأدنى من التركيز المثبط للمضاد الحيوي ، وتأثير مثبط إنتاج البيوميلانين على حساسية البكتيريا بالمضادات الحيوية.

طريقة صفيحة ميكروتيتر لتقييم الحد الأدنى للتركيز المثبط للمضاد الحيوي

يوضح هذا الفيديو فحصا في المختبر لفحص المركبات المضادة للفطريات باستخدام مقايسة التخفيف الدقيق للمرق. يتم تخفيف مركبات الاختبار بشكل متسلسل في صفيحة ميكروتيتر وتحضينها بلقاح فطري. بعد الحضانة ، يتم فحص الصفيحة بحثا عن الآبار التي لا تحتوي على نمو فطري مرئي لتقييم الإمكانات المضادة للفطريات لمركبات الاختبار والحد الأدنى من تركيزها المثبط (MIC).

مقايسة التخفيف الدقيق للمرق في المختبر لفحص المركبات المضادة للفطريات

charcoal agar resazurin assay (CARA) هي طريقة شبه كمية متوسطة الإنتاجية لتقييم نشاط عوامل الاختبار ضد البكتيريا الفطرية التي تتكاثر أو لا تتكاثر أو كليهما.  يسمح CARA بالتقييم السريع للنشاط المعتمد على الوقت والتركيز ويحدد المعلمات التي يجب متابعتها بواسطة فحوصات وحدة تشكيل المستعمرة (CFU).

التصور من الفحم آجار ريسازورين الفحص لشبه الكمي، متوسطة الإنتاجية تعداد مايكوباكتيريا

أسلوب ميكروديلوشن مرق سهلة وقابلة للتكيف لفحص المركبات المضادة للفطور ومقتطفات.

ميكروديلوشن مرق في المختبر الفرز: طريقة سهلة وسريعة للكشف عن المركبات المضادة للفطور جديدة

يقدم هذا البروتوكول اختبار الحساسية السريع لمضادات الميكروبات (AST) في غضون 2.5 ساعة عن طريق تصوير تشتت رامان المحفز بخلية واحدة لعملية التمثيل الغذائي D2O. تنطبق هذه الطريقة على البكتيريا الموجودة في البول أو بيئة الدم الكاملة ، والتي تعد تحويلية للنمط الظاهري السريع أحادي الخلية AST في العيادة.

اختبار الحساسية السريع لمضادات الميكروبات عن طريق التصوير المحفز لنثر رامان لدمج الديوتيريوم في بكتيريا واحدة

هنا، نقدم بروتوكولا لتحديد مرشحي أدوية مضادة للسل من خلال الفحص الظاهري، يشمل التخليق الكيميائي لمركب 4-أمينوكوينولين، وتحديد تركيزه المثبط الأدنى ضد متفطرة السل، وتقييم سممية الخلايا في خطوط الخلايا الثديية.

تحديد مرشحي مكافحة السل المحتملين: دليل خطوة بخطوة للتخليق، وتحديد MIC، وتقييم سمية الخلايا في الخلايا الثديية

نحن تصف طريقة بسيطة وسريعة وقوية...

96 ألف لوحة حسنا Microtiter القائم على أسلوب تشكيل لمراقبة واختبار قابلية مضاد المبيضات البيض الأغشية الحيوية

تعلم طريقة التخفيف الدقيق في السائل لاختبار حساسية البكتيريا الموجبة لجرام للدالفافانسين. يوضح هذا البروتوكول خطوات التحضير الفريدة باستخدام DMSO وPolysorbate 80 لضمان نتائج دقيقة وقابلة للتكرار في المختبر.

مرجع مرق الطريقة Microdilution لDalbavancin

استكشف المزيد من الفيديوهات