إجراءات Decellularization من الجرذ الأكباد في تتأرجح ضغط الإرواء الأجهزة

الهدف العام من التجربة التالية هو تقييم دور جذر التروية في تحسين تجانس نزع الخلايا عن تروية كبد الفئران. يتم تحقيق ذلك عن طريق القصف الأول ، الأوردة البابية والشرايين الكبدية لكبد الفئران المعزولة حديثا. كخطوة ثانية ، يتم توصيل الكبد بجهاز التروية من أجل التروية الانتقائية للأوردة البابية أو الشرايين الكبدية.

بعد ذلك ، يتم تطبيق تغيرات الضغط المتذبذبة على غرفة التروية لتقليد تغيرات الضغط داخل البطن التي تحدث أثناء التنفس. تحسين نضح الكبد الجزئي ، في النهاية يظهر الكبد الذي يتم تغليفه عبر الشريان الكبدي تحت ظروف الضغط المتذبذب إزالة الخلايا بشكل أكثر تجانسا وأسرع كما تم تقييمه من خلال الملاحظة العيانية والتحليل النسيجي والكيميائي الحيوي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل نزع الخلايا بالتروية الوريدية البابية هي أن التروية الشريانية باستخدام ظروف الضغط المتذبذبة تؤدي إلى نتيجة إزالة الخلايا أكثر تجانسا.

في وقت أقصر ، على الرغم من ذلك ، يمكن أن توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة لتقنيات التباطؤ. يمكن أيضا تطبيقه على أنظمة أخرى مثل تجارب التشميس بدقة ، وإعدادات التروية خارج الفم ، ونماذج الأعضاء. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأن حصاد الكبد الأحمر وقنته الشريانية يمكن أن يكون معقدا.

قبل حصاد الكبد ، قم بعمل قطع مائل حتى نهاية قطعة 1.5 سم من القسطرة الوريدية الطرفية G 20. قم بتوصيل القسطرة بقضيب إيقاف ثلاثي الاتجاهات واستخدم حقنة 10 ملليلتر مملوءة بمحلول جرس لتهوية النظام. بعد ذلك ، قم بقص إبرة قنية الفراشة بطول خمسة ملليمترات واستخدم الغراء الفائق لتثبيت أنبوب يبلغ طوله خمسة سنتيمترات على الإبرة.

أدخل أنبوبا بطول سنتيمترين في الأنبوب الأكبر ، وقم بتثبيت هذا الأنبوب بالغراء الفائق أيضا. ضع أنبوبا آخر فوق هذا البناء وألصقه في مكانه لإنشاء دعامة. ثم استخدم حقنة خمسة ملليلتر مملوءة بمحلول رنجر للتخلص من قنية الشرياني التي تم إنشاؤها حديثا لإصلاح الكبد للحصاد.

ابدأ باستخدام ضمادة سببية مبللة لتثبيت فص الكبد الإنسي والأيسر لجرذ بالغ مخدر تحت قبة الحجاب الحاجز. تعريض الرباط الكبدي الاثني عشر وفص الكبد العلوي في هذا الوقت أيضا. بعد ذلك ، استخدم ملقطين دقيقين ومقص زنبركي لتشريح الرباط المتصل بالفص العالي العلوي بعناية حتى يصبح الفص متحركا.

ثم أمسك الفصوص الإنسية واليسرى في مكانها. استخدم مسحات قطنية مبللة لتحريك الفص تحت ضغط GRE والمعدة إلى يسار. إصلاح المعدة مع المشبك وتشريح الزخم الطفيف.

ثم قم بتشريح فص الكبد السفلي أو العقلي حتى يصبح متحركا ، وانقل الفص مرة أخرى إلى تجويفه باستخدام مشبك خلفي للاحتفاظ بالاثني عشر ، وحرك الاثني عشر إلى اليسار لفضح الرباط الاثني عشر العشبي. تحيط القناة الصفراوية المشتركة. ثم قم بتشريح القناة الصفراوية من الأنسجة الدهنية والبنكرياس ، وقطع القناة 1.5 سم من تشعب القناة الصفراوية.

تشريح الوريد من الأنسجة الدهنية المحيطة ، وتعريض الوريد المعدي والاثني عشر. ثم اربط الوريد المعدي والاثني عشر مرتين بست خيوط صفرية وقسم الوريد بين العقدتين. تشريح الجذع البطني والشريان الكبدي المشترك من الأنسجة المحيطة حتى يتم الكشف عن كل راميا الشريانية.

بعد تشريح جميع الشرايين ، قم بتقييد الوريد الرديوي السفلي بين الكلية اليمنى وفص الكبد الجانبي الأيمن وتشريح الوريد من الفضاء خلف الصفاق. اتبع جذع الاضطرابات الهضمية لكشف الشريان الأورطي. ثم قم بتشريح الأنسجة الدهنية خلف الصفاق وتقييد الشريان الأورطي فوق الجذع البطني.

الآن حقن 1000 وحدة من الهيبارين في مليلتر واحد من المحلول الملحي في كهف الوريد السفلي. قم بتغطية الشق بقطعة قطن وانتظر من دقيقة إلى دقيقتين حتى يصبح الهيبارين ساري المفعول. ثم قم بتقييد الشريان الأورطي بالملقط وتشريح الشريان الأورطي وكهف الوريد السفلي بعيدا عن الكلى.

لوضع القنية الوريدية البابية ، قم بعمل شق فم السمكة في الوريد البابي البعيد وافتح الشق بالملقط. ثم قم بتقطيع الوريد البابي واغسل الكبد ب 20 مل من محلول الرنين حتى يجرد الكبد من إنسانيته باستخدام ستة أربطة صفرية من الحرير لتثبيت القنية في مكانها. لوضع قنية الشريان، قم بتشريح الشريان الأورطي فوق الجذع البطني حتى يمكن تحرير جزء الشريان الأورطي من الفضاء خلف الصفاق.

قم بقص جزء الشريان الأورطي طوليا لإنشاء رقعة أورطي وإدخال القنية ذاتية البناء في حامل ثابت. ثم استخدم ملقطين لتحريك رقعة الأبهر فوق القنية وربط الشريان الكبدي بخياطة حريرية ستة صفر فوق القنية. تثبيت الرقعة في الدعامة لأداء إزالة الخلايا اربط محبس ثلاثي الاتجاهات على قنية الوريد البوابي بالوصول إلى المفاعل ذي الصلة وقم بتوصيل القنية الشريانية بالوصول الشرياني مع الحرص على عدم دخول الهواء إلى الأنظمة.

بعد ذلك ، قم بتوصيل جهاز التنفس الصناعي بغرفة توزيع الضغط وقم بتوصيل الغرفة بالمفاعل. ابدأ تطبيق الضغط. ثم لبدء إزالة الخلايا.

دمج الكبد مع 1٪ تريتون × 100 بمعدل خمسة ملليلتر في الدقيقة. اسمح للنفايات السائلة عبر تدفق جهاز التروية للحفاظ على مستوى السائل داخل غرفة التروية ثابتا وفوق الكبد المنفع. بعد 90 دقيقة ، قم بتغيير المنظف إلى 1٪ من كبد SDS المغمور عبر الوريد القوي الذي يظهر في توضيح متجانس يشير إلى إزالة الخلايا مع الخلايا المتبقية المرئية مجهريا أثناء العملية وبعدها ، بينما يظهر الكبد الذي يتم نفخه عبر الشريان الكبدي مسارا أكثر تجانسا لإزالة الخلايا مع الخلايا المتبقية الأقل وضوحا.

إذا كان الكبد ممتلئا بتطبيق ظروف الضغط المتذبذبة ، فلن تكون هناك خلايا متبقية مرئية. بغض النظر عن التروية. يدعم التقييم النسيجي الجذري لمصفوفات الكبد منزوعة الخلايا النتائج العيانية بالفعل في الكبد المنفخ عبر الشريان الكبدي.

لا توجد خلايا متبقية ، سواء كانت تتغذى في ظل ظروف الضغط المتذبذبة أم لا ، لوحظت أن الكبد يتدفق عبر بوابة الوريد ، ومع ذلك ، تظهر مناطق من الخلايا المتبقية ، حتى لو كانت متناثرة في ظل ظروف الضغط المتذبذب ، على الرغم من أن هذه الظروف تقلل من كتلة الخلية المتبقية في هذه الكبد ، لاحظ الحفاظ على المصفوفات خارج الخلية للكبد بغض النظر عن ظروف إزالة الخلايا. كما انخفض محتوى الحمض النووي لكل وزن جاف لمصفوفة الكبد في جميع المجموعات التجريبية مقارنة بالكبد الأصلي. على الرغم من أن الاختلافات كانت ذات دلالة إحصائية فقط في مجموعة النفخ تحت ظروف الضغط المتذبذب.

بالإضافة إلى ذلك ، أكد صب التآكل لمصفوفات الكبد منزوعة الخلايا الحفاظ على التشريح الدقيق للكبد أثناء عملية التروية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية حصاد الكبد الأحمر وتقطيعه من أجل تباطؤ متجانس قابل للتكاثر. لا تنس أن العمل مع Triton X 100 و SDS يمكن أن يكون خطيرا للغاية ، ويجب أيضا اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء القفازات من خلال تنفيذ هذا الإجراء.