Name: إجراءات Decellularization من الجرذ الأكباد في تتأرجح ضغط الإرواء الأجهزة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: تعلم تقنية إزالة الخلايا من أكباد الجرذ باستخدام جهاز الضغط المتأرجح. يُحسّن التروية الشريانية توحيد النتائج ويسرّع العملية لأبحاث الهندسة الحيوية والطب التجددي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يود المؤلفون أن يشكروا بامتنان ستيفن ليبرت وخالد علييف وكورينا يوهرنز وكاثرينا ستروكر على مساعدتهم خلال هذا المشروع.

بقيت الحيوانات في مرفق للطب التجريبي (FEM، شاريتيه في برلين، ألمانيا)، وأعيد النظر في جميع البروتوكولات التجريبية والتي وافق عليها مكتب الدولة لشؤون الصحة والمحلية (LAGeSo، برلين، ألمانيا؛ ريج رقم O 0365 / 11). حصاد 1. الكبد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ما قبل العمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام لوحة الفلين لتثبيت. وضع الستارة الطبية على لوحة. باستخدام أربعة الإبر، وإصلاح قناع استنشاق على لوحة الفلين لاستنشاق أثناء العملية الخدر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بترتيب مسبق من بوابة ريدي قنية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل القسطرة الوريدية الطرفية (G 20) إلى محبس ثلاثي. يجب أن تقطع القسطرة الوريدية بشكل غير مباشر، ويبلغ طوله تقريبا. 1.5 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دي الهواء النظام باستخدام حقنة 10 مل مليئة حل قارع الأجراس. من المهم جدا أن بعناية إزالة الهواء بسبب الانسداد الغاز قد يؤثر سلبا على decellularization الارواء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بترتيب مسبقلالشرياني قنية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام قنية فراشة وقطع إبرة يصل طولها إلى 5 ملم. تناسب 5 سم أنبوب (ID 0.58 مم؛ OD 0.96 مم) إلى 5 ملم إبرة واصلاحها مع superglue. ادخال انبوب 2 سم طويلة (ID 0.28 مم؛ OD 0.61 مم) في أنبوب أكبر واصلاحها مع superglue. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنزلق أنبوب آخر عبر هذا البناء باعتبارها الدعامة واصلاحها مع superglue. دي الهواء قنية الشرايين مع حقنة 5 مل مملوءة بمحلول قارع الأجراس. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التخدير وتسكين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حمل الخدر من الفئران في غرفة تحريض التخدير بنسبة 3.5٪ الأيزوفلورين في الأكسجين بمعدل تدفق 1.5 لتر / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لضمان تسكين آمنة خلال العملية، وضخ metamizol (100 ملغ / كغ كتلة الجسم) وجرعة منخفضة من الكيتامين / medetomidine (10 ملغ / 0.1 ملغ لكل كيلوغرام كتلة الجسم) البريتونى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توريد 1.5٪ الأيزوفلورين في 1 لتر / دقيقة الأكسجين عبر قناع استنشاق للصيانة لاحقة من التخدير الجراحي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترتيبات ما قبل التنفيذ &lt;رأ&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق البطن تحرري مع آلة القص الكهربائية. بلل موقع شق حلق على البطن مع الايثانول 70٪ لتعقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوان في موقف ضعيف على لوحة مستعدة، أدخل رأسه في قناع استنشاق وتحديد أطرافه بشريط طبي والدبابيس. إزالة الايثانول الزائدة والفراء مع ضغط الشاش. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم التخدير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم عمق التخدير من خلال مشاهدة معدل التنفس. عندما يبدو أن التخدير العميق بما فيه الكفاية (40-60 الأنفاس / دقيقة)، وتحقق ما إذا كان تسكين كافية من خلال محاولة لتحريك منعكس قرصة أخمص قدميه باستخدام ملقط جراحي لقرصة الجلد بين أصابع كل من أطرافه الخلفية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نهج البطن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق متوسط ​​في جدار البطن الذيلية فوق المثانة. قطع من هذه النقطة إلى كل من الأقواس الجانبية الساحلية بطريقة شكل حرف V. الحرص على عدم قطع في الحجاب الحاجز. سحب جدار البطن قطع على صدره. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الخنجري مع المشبك overholt، تسحبه cranially واصلاحها مع الشريط المطاطي. استخدام قطعة قطن مبللة لإخلاء الأمعاء. التفاف الأمعاء في ضمادة الشاش المبللة. وعلاوة على ذلك، تغطي جميع هامش البطن مع ضمادات مبللة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الكبد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الرباط المنجلي. استخدام ضمادة الشاش المبللة لعقد فصوص الكبد وسطي وترك cranially تحت قبة الحجاب الحاجز. فضح الرباط الكبدي الإثناعشري والفص العلوي الكبد ثربية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام اثنين من microforceps ومقص الربيع لتشريح بعناية في الرباط التي تعلق على الفص العلوي ثربية حتى الفص هو المحمول. تحريك الفص باستخدام قطعة قطن مبللة تحت ضغط الشاش، وعقد الفصوص وسطي وتترك في مكان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تعبئة العلوي الفص الكبد ثربية، تحريك المعدة إلى اليسار. إصلاح المعدة مع المشبك وتشريح الثرب طفيفة مع microforceps ومقص الربيع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعبئة أقل ثروبل الفص الكبد حتى يتم المحمول، وبعد ذلك نقل الفص الخلفي في تجويف لها. استخدام المشبك باكهاوس الإبقاء على الاثني عشر. نقل الاثني عشر إلى اليسار لتمتد وفضح الرباط الكبدي الإثناعشري. تطويق القناة الصفراوية المشتركة في الرباط الكبدي الإثناعشري تمدد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح القناة الصفراوية من الدهنية والأنسجة البنكرياس. قطع القناة الصفراوية 1.5 سم من التشعب القناة الصفراوية. تشريح الوريد البابي من الأنسجة الدهنية المحيطة بها. فضح الوريد معدي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Ligate الوريد معدي مرتين مع الحرير 6-0 وتقسيم الوريد بين الحروف المركبة 2. تشريح الجذع الاضطرابات الهضمية والشريان الكبدي شيوعا من الأنسجة المحيطة بها حتى يتم الكشف عن رامي الشرايين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرير الشريان معدي من الأنسجة المحيطة بها. ربط الشريان معدي مرتين مع الحرير 6-0، مع علاقات بعيدة عن بعضها البعض. تشريح الشريان معدي بين الحروف المركبة 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرير الشريان الطحالمن الأنسجة المحيطة بها. ربط الشريان الطحال مرتين مع الحرير 6-0، مع علاقات بعيدة عن بعضها البعض. تشريح الشريان الطحال بين الحروف المركبة 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرير الشريان المعدي الأيسر من الأنسجة المحيطة بها. ربط الشريان المعدي الأيسر مرتين مع الحرير 6-0، مع علاقات بعيدة عن بعضها البعض. تشريح الشريان بين الحروف المركبة 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطويق الوريد الأجوف السفلي بين الكلية اليمنى واليسرى الفص الجانبي الكبد. تشريح الوريد من الفضاء خلف الصفاق. فضح الشريان الأورطي عن طريق اتباع الجذع الاضطرابات الهضمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الأنسجة الدهنية خلف الصفاق. حقن الهيبارين 1000 IE في 1 مل المالحة في الوريد الأجوف السفلي. سحب قنية وإغلاق شق مع وسادة من القطن. الانتظار 1-2 دقائق للتأثير النظامية الهيبارين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطويق الشريان الأورطي بالملقط. تشريح الشريان الأورطي ويستنزف الفئران. وعلاوة على ذلك، تشريح الوريد الأجوف السفلي بشكل أقصى من الكلى. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بوابة ريدي كيفية تركيب الكانيولا (استخدام قنية أعدت في القسم 1.2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق الأسماك الفم في الوريد البابي البعيدة. فتح شق مع ملقط ويقني؛ يدخل القنية الوريد البابي. مسح الكبد مع 20 مل قارع الأجراس حل حتى decolorizes الكبد وإصلاح قنية مع الحروف المركبة (الحرير 6-0). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشرياني كيفية تركيب الكانيولا (استخدام قنية أعدت في القسم 1.3) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الشريان الأبهر فوق الجذع الاضطرابات الهضمية. تحرير قطاع الشريان الأورطي من الفضاء خلف الصفاق. قطع الجزء الشريان الأورطي طوليا لتوليد التصحيح الأبهر. إدراج قنية يتم بناؤه ذاتيا إلى حامل ثابت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 2 ملقط لتنزلق التصحيح الأبهر خلال قنية. Ligate الشريان الكبدي مع الحرير 6-0 على قنية وإصلاح التصحيح في دعمة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Explantation الكبد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الحجاب الحاجز، وجعل شق دائري وتشريح الكبد من الهياكل المحيطة بها. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ستوإعادة الكبد في العقيمة دبابة 500 مل مليئة 350 مل قارع الأجراس حل حتى الاستخدام. </li></ol></li></ol> 2. حلول منظفات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10٪ محلول تريتون X-100 الأوراق المالية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء زجاجة 1000 مل مع 900 مل ماء مقطر. وإضافة 100 مل تريتون X-100 (99،9٪). استخدام النمام بحل تريتون X-100. ملء زجاجة مع ماء مقطر. حتى بلغ حجم التداول الإجمالي ل1000 مل يتم التوصل إليه. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1٪ تريتون X-100 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 100 مل من محلول المخزون (10٪) لزجاجة 1000 مل. إضافة 900 مل ماء مقطر. ويهز زجاجة مرتين. تصفية 1٪ تريتون X-100 حل من خلال تصفية العقيمة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10٪ SDS محلول المخزون <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء زجاجة 1000 مل مع 900 مل ماء مقطر. وإضافة 66.99 ز SDS (99.9٪، والكثافة 0،67). استخدام النمام إلى حل SDS. ملء زجاجة مع ماء مقطر. حتى بلغ حجم التداول الإجمالي ل1000 مل يتم التوصل إليه. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1٪ SDS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 100 مل من محلول المخزون (10٪) لبوت 1000 ملTLE. إضافة 900 مل ماء مقطر. ويهز زجاجة مرتين. تصفية 1٪ SDS الحل من خلال تصفية العقيمة. </li></ol></li></ol> 3. Decellularization <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انشاء التروية الأجهزة <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/53029/53029fig1.jpg" /></li></ol> الشكل 1: مخطط الجهاز الإرواء عن الانتقائية الشرياني والوريدي بوابة الإرواء من أربعة الأكباد الجرذ تحت ظروف الضغط تتأرجح (. معدلة من Struecker وآخرون 14) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط هجرة إلى محبس ثلاثي وتمديد هايدلبيرغر لتنظيم مستوى التعبئة والتعبئة المفاعل مع 500 مل 0،9٪ كلوريد الصوديوم. <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/53029/53029fig2.jpg" /></li></ol> الشكل 2: مخطط نضح انشاء ربط غرفة التروية (1400 سم 3) (1) إلى نهاية البعيدة (4) من فخ فقاعة (5) عن طريق وصول الوريدي البابي (2) أو عن طريق تيار الدمسيس (3). يجب أن تكون مجهزة فخ فقاعة (5) مع سد (4) في نهاية القاصي وتنفيس (6). ربط فخ فقاعة (5) على تمديد هايدلبيرغر (7). ربط تمديد هايدلبيرغر إلى الجزء مضخة (8). وعلاوة على ذلك، ربط الجزء مضخة (8) لتمديد هايدلبيرغر آخر (9). إدراج تمديد هايدلبيرغر الماضي (9) في زجاجة محلول منظف (10). توصيل جهاز التنفس الصناعي (11) إلى غرفة نضح (أو إلى الموزع الضغط في حالة perfusions متعددة). لاستنزاف السوائل المفاعل، وربط التدفقات إلى زجاجة النفايات (12). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج شريحة مضخة إلى المضخة. بدء تشغيل المضخة لملء دورة مع PBS، إغلاق نهاية البعيدة للفخ فقاعة وفتح تنفيس. عندما يتم تغطية الجزء السفلي من فقاعة آمن مع PBS (2-3 سم)، وإغلاق تنفيس وفتح النهاية البعيدة من فخ فقاعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تركيب الكبد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط ثلاثي محبس للقنية الوريد البابي إلى الوصول مفاعل ذات الصلة. Connect قنية الشرياني إلى الوصول الشرايين. كن حذرا لضمان عدم وجود الهواء يدخل الأنظمة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق الشروط ضغط تتأرجح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام جهاز التنفس الصناعي مع تردد من 15 نبضة في الدقيقة وسعة 26 ملي بار (دقيقة. 4 م بار، كحد أقصى. 30 مليبار). توصيل جهاز التنفس الصناعي لغرفة توزيع الضغط وربط غرفة للمفاعل. بدء تطبيق الضغط. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بروتوكول Decellularization <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ الخطوات نضح بمعدل تدفق 5 مل / دقيقة. بدء decellularization مع نضح من الكبد مع 1٪ تريتون X-100 لمدة 90 دقيقة. السماح دفق النفايات عبر تدفق الجهاز نضح للحفاظ على مستوى السوائل داخل ثابتة غرفة نضح وفوق الكبد perfused ل. بعد 90 دقيقة، وتغيير المنظفات ل1٪ SDS. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/53029/53029fig3.jpg" /> <img alt="الجدول 1" src="/files/ftp_upload/53029/53029table1.jpg" /></li></ol></li></ol> &lt;P&gt; الشكل (3): بروتوكول الإرواء لجميع المجموعات التجريبية.

<ol><li>Struecker, B., Raschzok, N., Sauer, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+support+strategies%3A+cutting-edge+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Liver support strategies: cutting-edge technologies.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 11, 166-176 (2014).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32, 3233-3243 (2011).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+liver+scaffolds+effectively+support+the+proliferation+and+differentiation+of+mouse+fetal+hepatic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">Decellularized liver scaffolds effectively support the proliferation and differentiation of mouse fetal hepatic progenitors.</a> J Biomed Mater Res A. , (2013).</li>
<li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nat Med. 16, 814-820 (2010).</li>
<li>Shupe, T., Williams, M., Brown, A., Willenberg, B., Petersen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+the+decellularization+of+intact+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Method for the decellularization of intact rat liver.</a> Organogenesis. 6, 134-136 (2010).</li>
<li>Bao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+a+portal+implantable+functional+tissue-engineered+liver+using+perfusion-decellularized+matrix+and+hepatocytes+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+transplantation%22%5BJournal%5D)">Construction of a portal implantable functional tissue-engineered liver using perfusion-decellularized matrix and hepatocytes in rats.</a> Cell transplantation. 20, 753-766 (2011).</li>
<li>Baptista, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+whole+organ+decellularization+for+the+generation+of+a+vascularized+liver+organoid%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The use of whole organ decellularization for the generation of a vascularized liver organoid.</a> Hepatology. 53, 604-617 (2011).</li>
<li>Soto-Gutierrez, A., Wertheim, J. A., Ott, H. C., Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspectives+on+whole-organ+assembly%3A+moving+toward+transplantation+on+demand%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Perspectives on whole-organ assembly: moving toward transplantation on demand.</a> J Clin Invest. 122, 3817-3823 (2012).</li>
<li>Soto-Gutierrez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+whole-organ+regenerative+medicine+approach+for+liver+replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">A whole-organ regenerative medicine approach for liver replacement.</a> Tissue engineering. Part C, Methods. 17, 677-686 (2011).</li>
<li>De Kock, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+quick+method+for+whole-liver+decellularization%3A+a+novel+in+vitro+three-dimensional+bioengineering+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+toxicology%22%5BJournal%5D)">Simple and quick method for whole-liver decellularization: a novel in vitro three-dimensional bioengineering tool.</a> Archives of toxicology. 85, 607-612 (2011).</li>
<li>Park, K. M., Woo, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+decellularization+for+multi-organ+scaffolds+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+proceedings%22%5BJournal%5D)">Systemic decellularization for multi-organ scaffolds in rats.</a> Transplantation proceedings. 44, 1151-1154 (2012).</li>
<li>Shirakigawa, N., Ijima, H., Takei, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+liver+as+a+practical+scaffold+with+a+vascular+network+template+for+liver+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Decellularized liver as a practical scaffold with a vascular network template for liver tissue engineering.</a> J Biosci Bioeng. , (2012).</li>
<li>Ren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+two+decellularization+methods+in+the+development+of+a+whole-organ+decellularized+rat+liver+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold.</a> Liver Int. 33, 448-458 (2013).</li>
<li>Struecker, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+rat+liver+decellularization+by+arterial+perfusion+under+oscillating+pressure+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Improved rat liver decellularization by arterial perfusion under oscillating pressure conditions.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2014).</li>
<li>Struecker, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+Liver+Decellularization+Under+Oscillating+Pressure+Conditions%3A+A+Technical+Refinement+to+Improve+the+Homogeneity+of+the+Decellularization+Process%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Porcine Liver Decellularization Under Oscillating Pressure Conditions: A Technical Refinement to Improve the Homogeneity of the Decellularization Process.</a> Tissue engineering. Part C, Methods. , (2014).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

على الرغم من أن هذه التقنية المقدمة للحصاد كبد الفئران وdecellularization هي استنساخه بسهولة، وهناك بعض الخطوات الحاسمة للنظر: أثناء التحضير للحصاد الكبد، فمن المهم تجنب نزيف حاد لأنه سيتم تنشيط تجلط الدم ويمكن أن يؤدي إلى تشكل جلطة دموية داخل الكبد. في رأينا، فإنه من المفيد أن شق الشريان الأورطي البطني مباشرة قبل إقناء؛ إدخال القنية من الوريد البابي لتجنب تدفق الدم عبر الشريان الكبدي خلال نضح عبر الوريد البابي. ...

Decellularization وrecellularization قد تمكن من توليد وظيفية، وأجهزة للزرع في المختبر 1. عن طريق إزالة الخلايا والمواد المستضدات (على سبيل المثال، DNA، الحواتم ألفا غال) من الجهاز، المصفوفة خارج الخلية غير أو أقل مناعة (ECM) ويمكن الحصول على. هذه المصفوفة تحافظ عليه التشريح المجهري ثلاثي الأبعاد للجهاز ويمكن أن تكون بمثابة بايوماتريكس مثالية لإعادة تعمير مع خلايا مختلفة، والأصل ربما xenogeneic 2. وبالتالي، يمكن إسكانها على decellularized الفئران مصفوفة الكبد بخلايا الكبد الإنسان. هذا أنسنة الكبد الجزئي يمكن أن تكون بمثابة نموذج فيفو السابقين للبحث في الأمراض (على سبيل المثال، الأمراض الاستقلابية الخلقية والأمراض الفيروسية أو الأورام الخبيثة) أو لاختبار الأدوية قبل السريرية 3. وقد تم بالفعل نشر عدة بروتوكولات مختلفة للكبد الفئران نضح decellularization 13/04. في جميع البروتوكولات، decellularوقد تحقق سعودة التي نضح من المنظفات الأيونية أو غير الأيونية القلوية عن طريق الوريد البابي مقنى. إلى حد علمنا، كنا المجموعة الأولى أن يقدم الفئران decellularization الكبد عن طريق نضح انتقائية عبر الوريد البابي و / أو الفئران الشريان الكبدي 14. تمكين نضح الانتقائي للأنظمة الأوعية الدموية المختلفة في الكبد قد تمكن النتائج decellularization أفضل وعلاوة على ذلك، يمكن أن تلعب دورا هاما في إعادة تعمير الخلوية. في دراسة مفصلة هنا، تم perfused لكبد في جهاز نضح الملكية حسب الطلب، مما نضح تحت ظروف الضغط تتأرجح. هذه الشروط ضغط تحاكي نضح الجهاز التنفسي التي تعتمد فيزيولوجي الكبد: في الوضع الطبيعي، توقف الكبد تحت حباك من الحجاب الحاجز، الذي تنقل خلال التنفس لديها تأثير مباشر على نضح الكبد. إلهام يؤدي خصيصا لتخفيض الضغط على الحجاب الحاجز والكبد، وتحسينأمراض الكبد وريدي تدفق، في حين انقضاء يؤدي إلى ارتفاع في الكبد وخفض الضغط داخل البطن لتحسين تدفق بوابة الوريدي 15. كان هدفنا لتقييم ما إذا كانت تتأرجح ظروف الضغط يكون لها تأثير على تجانس كبد الفئران نضح decellularization عن طريق محاكاة الظروف داخل البطن خارج الحي. تجانس عملية decellularization قد يكون عاملا في التقليل من نضح decellularization. جميع مواد معروفة تستخدم لdecellularization الكبد سبب تعديلات على ECM. تبقى الخلايا في المناطق ضعيفة perfused لداخل ECM، في حين أن مناطق أخرى هي بالفعل decellularized تماما. لإذابة الخلايا المتبقية، يجب أن تكون مرتفعة مدة نضح أو ضغط، مما تسبب في مزيد من التعديلات على المناطق perfused لجيدا. وبالتالي، منظفات للdecellularization ينبغي توزيع متجانس داخل الجهاز.

<table><tbody><tr><td colspan = "4" >قنية شريانية ذاتية البناء</td></tr><tr><td>&nbsp; أنابيب البولي إيثيلين غير المعقمة</td><td>Portex SIMS Portex</td><td>REF 800/110/100</td><td>0.28 مم معرف 0.61 مم OD</td></tr> <tr><td>& nbsp ؛ أنابيب البولي إيثين غير المعقمة Portex</td><td>SIMS Portex</td><td>REF 800/110/200</td><td>0.58 مم معرف 0.96 مم OD</td></tr><tr><td>Venodrop قسطرة فراشة آمنة</td><td>Fresenius Kabi</td><td>3275851</td><td>21 G</td></tr><tr><td colspan = "4" > قنية الوريد</td></tr><tr><td>المحيطي القسطرة الوريدية</td><td>BD</td><td>393224</td><td>BD Venflon Pro 20G</td></tr><tr><td>حدادين محبس ثلاثي الاتجاهات</td><td>طبي</td><td>888-101RE</td><td></td></tr> <<tr>td colspan = "4" >العصي القطنية الجراحية</td></tr><tr><td></td><td>Hecht-Assistent</td><td>4302</td><td></td></tr><tr><td>وسادات قطنية &nbsp ؛</td><td>Shaoxing Zhengde ضمادة جراحية</td><td>13H118-03</td><td></td></tr><tr><td>ضمادة شاش</td><td>Hubei Haige &nbsp ؛ الأدوات الطبية</td><td>14388</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; رينجر سولوشن</td><td>فريسينيوس كابي</td><td>13 HKP022</td><td>1000 مل</td></tr><tr><td>10 مل حقنة</td><td>براون</td><td>4606108 فولت</td><td>10 مل / لوير سولو</td></tr><tr><td>5 مل حقنة</td><td>براون</td><td>4606061 فولت</td><td>5 مل /</td></tr><tr><td>خياطة لور سولو (حرير 6/0)</td><td>ريسوربا</td><td>H1F</td><td>LOT 105001.81</td></tr><tr><td>ثنى طبي</td><td>شاوشينغ تشنغده ضمادة جراحية</td><td>D0613011</td><td></td></tr><tr><td colspan = "4" >surgical حامل</td></tr><tr><td>إبرة</td> الأدوات <td>Geuder</td><td>17570</td><td></td></tr><tr><td>ملقط صغير</td><td>Inox-Electronic</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>مقص صغير</td><td>Martin</td><td>11-740-11</td><td></td></tr><tr><td>ملقط صغير</td><td>S & T&nbsp;</td><td>112314</td><td></td></tr><tr><td>المشبك</td><td>Aesculap</td><td>BH111R</td><td></td></tr><tr><td>مقص</td><td>F S T & nbsp ؛</td><td>14501-14</td><td></td></tr><tr><td>ملقط جراحي</td><td>Aesculap</td><td>دينار بحريني 557</td><td></td></tr><tr><td colspan = "4" > جهاز التنفس الصناعي لإزالة الخلايا</td></tr><tr><td></td><td>Resmed</td><td>14.24.11.0004</td><td>جهاز التروية SmartAIR ST</td></tr><tr><td></td><td>Charite ، مختبر الهندسة الطبية</td><td>جهاز</td><td>إزالة الخلايا حسب الطلب جهاز إزالة الخلايا</td></tr><tr><td>مضخة التمعج ismatec reglo ICC</td><td>IDEX</td><td>ISM4408&nbsp;</td><td>4 قنوات</td></tr><tr><td>امتداد هايدلبرغر 75 سم &nbsp;</td><td>Fresenius Kabi</td><td>2873</td><td>75 سم</td></tr><tr><td>MS / CA مضخة قطعة</td><td>IDEX</td><td>IS 3510 &nbsp;</td><td>MS / CA / click'n'go / POM-C</td></tr><tr><td>CA 2-سدادة أنبوب</td><td>Pharmed</td><td>BPT NSF-51</td><td></td></tr><tr><td>فخ الفقاعات &nbsp;</td><td></td> موصل خرطوم Luer Lock <td>المصنوع</td><td></td>حسب الطلب</tr><tr><td></td><td>Neolab</td><td>رقم 02-1887</td><td></td></tr><tr><td colspan = "4" > المنظفات</td></tr><tr><td>كريات SDS</td><td>Carl Roth & nbsp ؛</td><td>CN30.4&nbsp;</td><td>2.5 كجم</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Carl Roth&nbsp;</td><td>3051.1&nbsp;</td><td>10 لتر</td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>DPBS</td></tr><tr><td colspan = "4" > تلطيخ</td></tr><tr><td>Eosin 1٪</td> <td>Morphisto</td><td>10177</td><td></td></tr><tr><td>Mayer hematoxylin</td><td>AppliChem</td><td>A4840</td><td></td></tr><tr><td>gomori تلطيخ</td><td>Morphisto</td><td>11104</td><td></td></tr><tr><td>AlcainBlue-PAS تلطيخ</td><td>Morphisto</td><td>11388</td><td></td></tr><tr><td>Direct Red 80 & nbsp ؛</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>365548</td><td></td></tr></tbody></table>

إجراءات decellularization من الجرذ الأكباد في تتأرجح ضغط الإرواء الأجهزة

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

قد يؤدي إزالة الخلايا وإعادة خلية الأعضاء المتني إلى تمكين توليد الأعضاء الوظيفية في المختبر ، وقد تم بالفعل نشر العديد من البروتوكولات لإزالة الخلايا من كبد القوارض. كنا نهدف إلى تحسين عملية إزالة الخلايا من خلال بناء جهاز تروية خاص يتيح التروية الانتقائية عبر الوريد البابي و / أو الشريان الكبدي. علاوة على ذلك ، سعينا إلى إجراء التروية في ظل ظروف الضغط المحيطة المتذبذبة لتحسين تجانس إزالة الخلايا. كان تجانس إزالة الخلايا بالتروية عاملا تم التقليل من شأنه حتى الآن. أثناء إزالة الخلايا ، قد لا تزال المناطق داخل العضو سيئة الانتشار تحتوي على خلايا ، في حين أن المصفوفة خارج الخلية (ECM) في المناطق جيدة الانتشار قد تتأثر بالفعل بالمنظفات القلوية. يمكن أن تحاكي تغيرات الضغط المتذبذبة تغيرات الضغط داخل البطن التي تحدث أثناء التنفس لتحسين التروية الدقيقة داخل الكبد. في الدراسة المعروضة هنا ، تم تحليل مصفوفات كبد الفئران منزوعة الخلايا عن طريق التلوين النسيجي وتحليل محتوى الحمض النووي وصب التآكل. أظهر التروية عبر الشريان الكبدي نتائج أكثر تجانسا من التروية الوريدية البابية. أدى تطبيق ظروف الضغط المتذبذب إلى تحسين فعالية إزالة الخلايا بالتروية. أظهرت الكبد التي تتغذى عبر الشريان الكبدي وتحت ظروف الضغط المتذبذب أفضل النتائج. تتيح التقنيات المقدمة لحصاد الكبد والقنية والتروية باستخدام جهازنا الخاص إعدادات التروية المتطورة لتحسين تجارب إزالة الخلايا وإعادة الخلية في كبد الفئران.

تم تقييم تجانس وبالتالي فعالية بروتوكولات decellularization مختلفة عن طريق الملاحظة العيانية، التحليل النسيجي، وتحليل محتوى الحمض النووي المتبقية ضمن مصفوفات الكبد decellularized. وعلاوة على ذلك، تم إجراء التآكل الصب لتصور التشريح المجهري سليمة من كبد بعد decellularization. الفحص العياني خلال decellularization، كبد تصبح لوسنت، مما يدل على إزالة ...

تتيح التقنيات المقدمة لحصاد الكبد والقنية والتروية باستخدام جهازنا الخاص إعدادات التروية المتطورة لتحسين تجارب إزالة الخلايا وإعادة الخلايا في كبد الفئران.

إجراءات Decellularization من الجرذ الأكباد في تتأرجح ضغط الإرواء الأجهزة

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

يتمثل الهدف العام من التجربة التالية في تقييم دور جذر التروية في تحسين تجانس عملية إزالة الخلايا من كبد الجرذ عن طريق التروية. ويتم تحقيق ذلك أولاً من خلال قسطرة الأوردة البابية والشرايين الكبدية في أكباد الجرذان المعزولة حديثاً. وفي خطوة ثانية، يتم توصيل الأكباد بجهاز تروية لإجراء تروية انتقائية للأوردة البابية أو الشرايين الكبدية.بعد ذلك، يتم تطبيق تغييرات في الضغط المتذبذب على غرفة التروية لمحاكاة تغييرات الضغط داخل البطن التي تحدث أثناء التنفس. ومن خلال تحسين التروية الدقيقة للكبد، تظهر الأكباد المروية عبر الشريان الكبدي تحت ظروف الضغط المتذبذب عملية إزالة خلوية أكثر تجانساً وأسرع، كما تم تقييمه من خلال الملاحظة العينية والتحليل النسيجي والكيميائي الحيوي. وتتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية، مثل إزالة الخلوية عن طريق التروية الوريدية البابية، في أن التروية الشريانية باستخدام ظروف الضغط المتذبذب تؤدي إلى نتيجة إزالة خلوية أكثر تجانساً.ومع ذلك، يمكن لهذه الطريقة أن توفر رؤية حول تقنيات إبطاء السرعة في وقت أقصر. كما يمكن تطبيقها على أنظمة أخرى مثل تجارب التعقيم الشمسي، وتجهيزات التروية خارج الفم، ونماذج الأعضاء. وبشكل عام، قد يواجه الأشخاص المبتدئون في هذه الطريقة بعض الصعوبات لأن عمليات حصاد وقسطرة الشرايين في الكبد الأحمر قد تكون معقدة.قبل حصاد الكبد، قم بإجراء قطع مائل في طرف قطعة بطول 1.5 سنتيمتر من قثطرة وريدية محيطية G 20. قم بتوصيل القثطرة بصمام إيقاف ثلاثي الاتجاهات واستخدم سرنجة سعة 10 ملليلتر مملوءة بمحلول رينجر لتفريغ الهواء من النظام. بعد ذلك، قم بقص إبرة كانيولا الفراشة لتصل إلى طول خمسة مليمترات واستخدم الغراء الفائق لتثبيت أنبوب بطول خمسة سنتيمترات بالإبرة.أدخل أنبوباً بطول سنتيمترين في الأنبوب الأكبر، وثبّت هذا الأنبوب باستخدام الغراء السريع أيضاً. ثم مرر أنبوباً آخر فوق هذا الهيكل وقم بلصقه في مكانه لإنشاء دعامة. بعد ذلك، استخدم حقنة سعة 5 mL مملوءة بمحلول رينجر لترطيب القنية الشريانية التي تم إنشاؤها حديثاً لإصلاح الكبد من أجل الاستئصال.ابدأ باستخدام ضمادة مبللة لتثبيت الفصين الإنسي والأيسر لكبد جرذ بالغ تحت قبة الحجاب الحاجز بعد تخديره. قم بكشف الرباط الكبدي الاثني عشري والفص العلوي للكبد في هذه المرحلة أيضاً. بعد ذلك، استخدم ملقطين دقيقين ومقصاً نابضاً لتشريح الرباط المتصل بالفص الثربي العلوي بعناية حتى يصبح الفص متحركاً.ثم يتم تثبيت الفصين الإنسي والأيسر في مكانهما. استخدم مسحات قطنية مبللة لتحريك الفص تحت ضاغطة GRE والمعدة إلى يسار الحيوان. قم بتثبيت المعدة بمشبك وتشريح الثرب الصغير.ثم قم بتشريح الفص الكبدي السفلي أو الذقني حتى يصبح متحركاً، وحرّك الفص إلى الخلف في تجويفه باستخدام مشبك backhouse لتثبيت الاثني عشر، ثم حرّك الاثني عشر إلى اليسار لكشف الرباط الكبدي الاثني عشري. قم بتحديد القناة الصفراوية المشتركة. ثم قم بتشريح القناة الصفراوية من الأنسجة الدهنية والبنكرياسية، مع قطع القناة على مسافة 1.5 centimeters من تفرع القناة الصفراوية.قم بتشريح الوريد السال من الأنسجة الدهنية المحيطة، وذلك للكشف عن الوريد المعدي الاثني عشري. ثم قم بربط الوريد المعدي الاثني عشري مرتين باستخدام خيوط جراحية عيار 6/0 واقطع الوريد بين العقدتين. قم بتشريح الجذع الزلاقي والشريان الكبدي المشترك من الأنسجة المحيطة حتى تظهر جميع الفروع الشريانية.بعد الانتهاء من تشريح جميع الشرايين، قم بإحاطة الوريد الأجوف السفلي بين الكلية اليمنى والفص الجانبي الأيمن للكبد، ثم قم بتشريح الوريد من الحيز خلف الصفاق. تتبع الجذع الزلاقي للكشف عن الأبهر. بعد ذلك، قم بتشريح النسيج الدهني خلف الصفاق وإحاطة الأبهر فوق الجذع الزلاقي.الآن قم بحقن 1000 وحدة من heparin في واحد ملليلتر من saline في الوريد الأجوف السفلي. غطِّ الشق بقطعة قطن وانتظر لمدة دقيقة إلى دقيقتين حتى يبدأ مفعول heparin. بعد ذلك، أحِط الأبهر بملاقط، ثم قم بتشريح الأبهر والوريد الأجوف السفلي بعيداً عن الكلية.لوضع كانيولا الوريد البابي، قم بإجراء شق يشبه فم السمكة في الجزء القاصي من الوريد البابي وافتح الشق باستخدام الملاقط. ثم قم بتطبيق الكانيولا في الوريد البابي واغسل الكبد باستخدام 20 milliliters من محلول رينجر حتى يزول تروية الكبد، مع استخدام رباطات حريرية 6/0 لتثبيت الكانيولا في مكانها. ولوضع الكانيولا الشريانية، قم بتشريح الأبهر فوق الجذع الزلاقي حتى يمكن تحرير جزء من الأبهر من الحيز خلف البريتوني.اقطع قطعة الشريان الأبهر طولياً لتكوين رقعة أبهرية، وأدخل القنية المُصنعة ذاتياً في حامل ثابت. بعد ذلك، استخدم ملقطين لتمرير الرقعة الأبهرية فوق القنية، وقم بربط الشريان الكبدي باستخدام خيط حريري 6/0 فوق القنية. قم بتثبيت الرقعة عند نقطة الاتصال لإجراء عملية إزالة الخلايا. صِل الصمام ثلاثي الاتجاه الموجود في قنية الوريد البابي بمدخل المفاعل ذي الصلة، وقم بتوصيل القنية الشريانية بالمدخل الشرياني مع الحرص على عدم دخول الهواء إلى الأنظمة.بعد ذلك، قم بتوصيل جهاز التنفس بغرفة توزيع الضغط، ثم صل الغرفة بالمفاعل. ابدأ بتطبيق الضغط، ومن ثم ابدأ عملية إزالة الخلايا.قم بنقع الكبد باستخدام 1%tritton X 100 بمعدل خمسة ملليلتر في الدقيقة. اسمح بتدفق الفضلات عبر مخرج جهاز التروية للحفاظ على مستوى السائل داخل غرفة التروية ثابتاً وفوق الكبد المروى. بعد 90 دقيقة، استبدل المنظف بـ 1%SDS. تظهر الأكباد المروية عبر الوريد البابي تفتيحاً متجانساً يشير إلى إزالة الخلايا مع وجود خلايا متبقية مرئية عيانياً أثناء وبعد العملية، بينما تظهر الأكباد المروية عبر الشريان الكبدي مساراً أكثر تجانساً في إزالة الخلايا مع وجود عدد أقل من الخلايا المتبقية المرئية.في حال تم تروية الكبد تحت ظروف ضغط متذبذب، لم تظهر أي خلايا متبقية، بغض النظر عن عملية التروية. وتدعم التقييمات النسيجية لجذور مصفوفات الكبد منزوعة الخلايا النتائج العيانية، لا سيما في الأكباد التي تمت ترويتها عبر الشريان الكبدي.لم تُلاحظ أي خلايا متبقية، سواء تم التروية تحت ظروف ضغط متذبذب أم لا. ومع ذلك، أظهرت الأكباد التي تم ترويتها عبر الوريد البابي مناطق تحتوي على خلايا متبقية، حتى عند ترويتها تحت ظروف ضغط متذبذب، رغم أن هذه الظروف قللت من كتلة الخلايا المتبقية في هذه الأكباد؛ يُلاحظ الحفاظ على المصفوفات خارج الخلية للأكباد بغض النظر عن ظروف إزالة الخلايا. كما انخفض محتوى DNA لكل وزن جاف من مصفوفة الكبد في جميع المجموعات التجريبية مقارنة بالأكباد الأصلية، رغم أن الفروق كانت ذات دلالة إحصائية فقط في المجموعات التي خضعت للتروية تحت ظروف ضغط متذبذب.بالإضافة إلى ذلك، أكد صب التآكل لمصفوفات الكبد منزوعة الخلايا الحفاظ على التشريح الدقيق للكبد أثناء عملية التروية. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية حصاد وقسطرة وتروية أكباد الجرذان من أجل عملية إزالة خلايا متجانسة وقابلة للتكرار. لا تنسَ أن العمل باستخدام Triton X 100 وSDS قد يكون خطيراً للغاية، ويجب أيضاً اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء القفازات عند تنفيذ هذا الإجراء.

procedure-for-decellularization-rat-livers-an-oscillating-pressure

Research

JoVE Journal

Bioengineering

الهندسة الحيوية

decellularization التروية هو تقنية جديدة لإنتاج السقالات الكبد كله أن يحتفظ تكوين الجهاز في المصفوفة خارج الخلية والمعمارية المصغرة. هنا ، وصفت طريقة إعداد السقالات الجهاز بأكمله باستخدام decellularization نضح وإعادة تعمير لاحقة مع خلايا الكبد. يمكن أن تتولد ترقيع الكبد الوظيفية وزرع باستخدام هذه التقنية.

وDecellularization Recellularization الأكباد من الجامعة

يوصف تقنية لعزل الخلايا الليفية بوابة من كبد الفئران. وperfused الأكباد...

عزل الخلايا الليفية بوابة الجرذ من قبل<em&gt; في الموقع</em&gt; الكبد الإرواء

خلايا الكبد الأولية توفير أداة قيمة لتقييم البيوكيميائية، وظائف الجزيئية، والتمثيل الغذائي في نظام تجريبي ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية. وصفنا بروتوكول موثوق لفأر في تروية الكبد الموقع، الذي يولد باستمرار خلايا الكبد قادرة على البقاء حتى to1.0 ×...

العزلة والثقافة الأساسي في الخلايا الكبدية الجرذ

ترقيع هامشية، مثل الكبد الدهنية، الطعوم من المانحين القديمة، أو كبد استرجاع بعد وفاة القلب (DCD) تتسامح التقليدي والتخزين البارد ثابت سيئة فقط. وضعنا نموذجا جديدا من subnormothermic فيفو السابقين نضح الكبد للمحافظة، والتقييم، وإصلاح الطعوم الكبد هامشية قبل الزرع.

تقنية Subnormothermic<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الكبد الإرواء للتخزين، تقييم، وإصلاح الطعوم الكبد الهامشية

وهناك نقص كبير من المانحين كبد، وجرى توسيع نطاق معايير المانحين الكبد. وقد وضعت نورموثيرميك السابقين فيفو الكبد التروية (نيفلب) لتقييم وتعديل وظيفة الجهاز. يوضح نموذج الفئران من نيفلب هذه الدراسة واختبارات قدرة سي-الكاتالاز، للتخفيف من حدة الضرر الحفاظ على الكبد.

نموذج حيوانات صغيرة من نضح الكبد نورموثيرميك السابقين فيفو

نقوم بإنشاء تقنية جراحية رواية لنموذج نضح فص كبد واحد في فيفو في الفئران كشرط مسبق لمواصلة دراسة في فيفو الكبد الجزئي الهندسية في المستقبل.

رواية تقنية جراحية كأساس في فيفو جزئي الهندسة الكبد في الفئران

يفصل هذا البروتوكول استخدام قسطرة وريدية خاصة ، وأنابيب معقمة موحدة يمكن التخلص منها ، والتحكم في درجة الحرارة تكملها مراقبة في الوقت الفعلي ، ونظام إنذار لإجراء تروية الكولاجيناز المكون من خطوتين لتحسين الاتساق في صلاحية خلايا كبد الفئران الأولية المعزولة وإنتاجيتها ووظائفها.

عزل خلايا كبد الفئران الأولية مع التحكم في التروية متعدد المعلمات

يصف البروتوكول الشراء الجراحي وإزالة الخلايا اللاحقة لسدائل الخنازير الوعائية عن طريق تروية منظف كبريتات دوديسيل الصوديوم من خلال الأوعية الدموية في مفاعل حيوي مخصص للتروية.

شراء ونزع الخلايا من اللوحات الوعائية الخنازير في مفاعل حيوي مخصص للتروية

وصفنا التقنية الجراحية وعملية إزالة الخلايا للأطراف الخلفية للفئران المركبة. يتم إجراء عملية إزالة الخلايا باستخدام كبريتات دوديسيل الصوديوم منخفضة التركيز من خلال نظام تروية آلة خارج الجسم الحي .

شراء وإزالة الخلايا من الأطراف الخلفية للفئران باستخدام مفاعل حيوي قائم على التروية خارج الجسم الحي لزراعة الخيول المركبة الوعائية

تم إنشاء نظام نضح الكبد خارج الجسم الحي (NEVLP) لكبد الفئران. يتطلب هذا النظام خبرة في الجراحة المجهرية ولكنه يسمح بنتائج نضح قابلة للتكرار. تسهل القدرة على استخدام كبد الفأر التحقيق في المسارات الجزيئية لتحديد إضافات الفوسات الجديدة وتمكن من تنفيذ التجارب التي تركز على إصلاح الأعضاء.

نورموذرميك خارج الجسم الحي آلة الكبد التروية في الماوس

يقدم هذا البروتوكول تقنية تروية كبد كولاجيناز محسنة من خطوتين في نموذج الفئران ويظهر استخدام خلايا الكبد المعزولة للثقافة طويلة الأجل في المختبر من عضويات 3D.

نضح كبد الفئران وعزل خلايا الكبد الأولية: إجراء قديم حاسم لثقافة المواد العضوية 3D المتطورة

تعلم تقنية إزالة الخلايا من أكباد الجرذ باستخدام جهاز الضغط المتأرجح. يُحسّن التروية الشريانية توحيد النتائج ويسرّع العملية لأبحاث الهندسة الحيوية والطب التجددي.

إجراءات Decellularization من الجرذ الأكباد في تتأرجح ضغط الإرواء الأجهزة

استكشف المزيد من الفيديوهات