أداء الدائم القاصي الأوسط الدماغي مع السباتي المشترك انسداد الشريان في الجرذان المسنين لدراسة القشرية نقص التروية ذوي الإعاقة المستديمة

هنا نقدم بروتوكول لإنتاج دائم البعيدة انسداد الشريان الدماغي الأوسط في إناث الفئران المسنة مع انسداد في وقت واحد من الشرايين السباتية لتوليد عوائق القشرية الكبيرة والعجز المستمر. وتبين لنا تأكيدا لحجم الآفة باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي الهيكلي في 24 ساعة و 8 أسابيع بعد السكتة الدماغية.

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء شريان دماغي متوسط دائم ، أو انسداد MCA في نموذج فئران مسن. يتم تحقيق ذلك عن طريق تعريض الشرايين السباتية أولا ولفها بشكل فضفاض للربط لاحقا. في الخطوة الثانية ، يتم حفر الجمجمة للكشف عن MCA.

ثم يتم تخثر الوعاء بالملقط لبدء الانسداد. في الخطوة الأخيرة ، يتم ربط الشريان السباتي الأيمن بشكل دائم ويتم انسداد الشريان السباتي الأيسر بشكل عابر. في النهاية ، يتم استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي المرجح T2 لمراقبة حجم الآفة وتأكيد نجاح الإجراء.

يسمح هذا النموذج بالاحتشاء القابل للتكاثر في منطقة الشريان الدماغي الأوسط والعجز السلوكي المستمر في الفئران المسنة. قبل البدء في الإجراء ، تأكد من المستوى المناسب من التخدير من خلال عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم في فأر مسن من 16 إلى 18 شهرا ، وقم بإعطاء المسكن المناسب. بعد ذلك ، احلق الفراء على الرقبة البطنية والمناطق الصدغية في نصف الكرة الأيمن من ، واستخدم مسحات الإيثانول لتطهير الجلد المكشوف.

ضع الجرذ في وضع ضعيف على لوح من الفلين مغطى بستارة معقمة فوق وسادة تدفئة ، وقم بتطبيق كريم الليدوكائين على المناطق المحلوقة من الرأس والرقبة. أدخل مسبارا مستقيميا للحفاظ على درجة حرارة الجسم بين 36.5 و 37.5 درجة مئوية ، ووضع مرهم على عيون. ثم حقن الجرذ ب 0.05 مل من كبريتات الأتروبين لتقليل إفرازات القصبة الهوائية ، ووضع تحت مجهر استريو.

ابدأ العملية الجراحية بشق خط الوسط المركزي بطول سنتيمترين في الرقبة المكشوفة ، وحرك الغدد اللعابية برفق إلى القصبة الهوائية على جانبي. بعد ذلك ، على الجانب الأيمن من الرقبة ، قم بلف خياطة حريرية غير قابلة للامتصاص 5-0 عبر الجلد المغطى بالمنطقة المكشوفة ، واستخدم الغرز لسحب الجلد برفق بعيدا عن الشق. باستخدام شريط جراحي ، قم بتوصيل الغرز بلوحة الفلين للكشف عن الشريان السباتي المشترك.

ثم ، باستخدام الملقط ، قم بتشريح الشريان بعناية من اللفافة المحيطة. بمجرد انكشاف الشريان السباتي المشترك ، استخدم ملقطا دقيقا لعكس تشريح الشريان من العصب المبهم ، مع الحرص على عدم ملامسة العصب. قم بلف الوعاء بخياطة غير قابلة للامتصاص ، وقم بلصق أطراف الخيط بشريط جراحي.

ثم قم بإزالة الغرز التي تمنع الجلد المغطى ، مما يضمن عدم التداخل مع الخيط الملتف حول الشريان السباتي. كرر الإجراء على الجانب الأيسر كما هو موضح للتو. بعد لف كلا الشرايين وإزالة الغرز الإضافية ، ضع شاشا معقما مبللا بالمحلول الملحي في الجرح للحفاظ على رطوبة الأنسجة ، وخياطة الجلد بشكل فضفاض.

ضع شاشا آخر مبلل بالمحلول الملحي على المنطقة لمنع المزيد من الجفاف ، وقم بتغيير الجرذ إلى وضع جانبي. شق الجلد عند نقطة المنتصف بين المدار الأيمن والقناة السمعية الخارجية. بعد ذلك ، قم بتشريح العضلة الصدغية بشكل حاد للكشف عن الجمجمة.

بعد ذلك ، باستخدام ما يصل إلى خمسة ضاعات خطاف مرنة بثلاثة ملليمترات ، قم بسحب الجلد وتثبيته على لوح الفلين. ثم ضع تنقيطا ملحيا معدلا بعجلة الإبهام مدفوعة بالجاذبية فوق الموقع المفتوح في أعلى نقطة في الجمجمة بالقرب من الأذن ، وقم بإعداد نظام شفاط مع الفوهة في أدنى نقطة لإزالة أي بقايا عظمية وإزالة أي نزيف طفيف من الموقع المكشوف. اضبط العجلة لتصور مصدر النزيف حسب الضرورة.

استخدم الآن مثقاب أسنان مع لدغ حفر خشن مطلي بالماس مقاس 1.6 ملم عند حوالي 8 ، 000 دورة في الدقيقة لإجراء بضع قحف بمقدار خمسة ملليمترات في خمسة ملليمترات على المنطقة المكشوفة ، مع الحرص على تطبيق ضغط دائري وجانبي ، ولكن ليس لأسفل أثناء الحفر. عندما تصبح شفافة تماما ، استخدم الملقط لإزالة العظام. بعد ذلك ، باستخدام خطاف جافي محلي الصنع ، افتح الجافية بعناية ، مع الحرص على تجنب تمزق الأوعية الدموية السطحية الكبيرة.

بعد ذلك ، استخدم زوجا من ملقط الإنفاذ الحراري للمجوهرات بزاوية مع أطراف مدببة 0.25 ملم لتخثر MCA من حيث يعبر الوريد الدماغي السفلي إلى نقطة تشعب الشريان ، ثم على طول الفرع الذيلي ل MCA حتى يتم انسداد الأوعية بالكامل. بعد ذلك ، للتأكد من اكتمال الانسداد ، استخدم مقص الأوعية الدموية الدقيقة لقطع جزء MCA المغلق الذي يقع أسفل المكان الذي يعبر فيه الوريد الدماغي السفلي MCA. الآن قم بتغطية المنطقة المكشوفة بقطعة شاش مبللة بالمحلول الملحي ، وأعد الفئران إلى وضع ضعيف.

أعد فتح الخيط المربوط بشكل فضفاض على الرقبة لإعادة تعريض الشرايين السباتية ، واربط عقدة في الخيط حول الشريان على نفس جانب MCA المسدود لربط الوعاء بشكل دائم. ثم استخدم مشبك شريان من الفولاذ المقاوم للصدأ مقاس 13 ملم مع ضغط يبلغ حوالي 125 جراما لربط الشريان السباتي الأيسر بشكل عابر لمدة ساعة واحدة. أثناء الانسداد المؤقت ، قم بخياطة الشق في الرقبة بشكل غير محكم ، ووضع شاش معقم آخر مبلل بالمحلول الملحي فوق الشق.

بعد ذلك ، قم بخياطة الشق في المنطقة الصدغية ، متبوعا بأربع حقن تحت الجلد خمسة ملليلتر من المحلول الملحي. في نهاية فترة الانسداد المؤقتة ، قم بإزالة المشبك وتطبيق المحلول الملحي موضعيا على العضلات المحيطة. بعد ذلك ، باستخدام خياطة مستمرة تحت الجلد من خيوط قابلة للامتصاص 4-0 ، أغلق الشق في الرقبة ، واسمح للحيوان بالتعافي من التخدير لمدة أربع ساعات في حاضنة 31 درجة مئوية.

إذا أظهر الفئران فقدان الوزن بعد الجراحة ، فافحص الأسنان العلوية والسفلية. بعد ذلك ، مع وضع في وضع ضعيف ، ضع برميل حقنة بطول ملم واحد خلف الأسنان لحماية الأنسجة الرخوة ، واستخدم منشارا دائريا محمولا باليد بسرعة دوران عالية وحركات يد بطيئة وثابتة لتقليم أسنان. لقياس حجم الاحتشاء ، بعد 24 ساعة من تحريض انسداد الشريان الدماغي الأوسط ، استخدم التصوير بالرنين المغناطيسي الهيكلي للحصول على فحوصات T2 الموزونة.

ثم قم بقياس مساحة المقطع العرضي للاحتشاء في 20 مجلدا للحصول على أحجام الآفة في عبوة عرض الصور الطبية ، واضرب مجموع هذه المناطق في السماكة للحصول على الحجم الكلي للاحتشاء. لحسابات حجم الآفة المئوية ، احصل على أحجام نصفي الكرة الأرضية والمقابلة أيضا. لحساب حجم العينة للدراسات المستقبلية ، استخدم برنامج تحليل الطاقة لتحديد حسابات حجم العينة لتقدير أحجام المجموعات المطلوبة لتحديد تأثيرات المعالجة بأحجام مختلفة الحجم.

في هذه التجربة ، تم تقييم نتيجة السكتة الدماغية بعد 24 ساعة وثمانية أسابيع من انسداد MCA كما هو موضح للتو ، مع تحديد حجم الاحتشاء على أنه مناطق دماغ الفئران تظهر إشارة شديدة الكثافة. في هذه التجربة التمثيلية ، في 24 ساعة ، كان حجم الآفة الخام غير المعدل 62.8 ملم مكعب ، حيث تشغل الآفة 9.8 في المائة من نصف الكرة المصاب. عند تصحيح تورم الدماغ باستخدام صيغة Gerriets ، تم تخفيض هذه القيمة إلى 4.5 بالمائة.

تم قياس شدة السكتة الدماغية أيضا باستخدام اختبار درج مونتويا ، مع انخفاض بنسبة 40 في المائة تقريبا في استرجاع حبيبات السكر لوحظ في السكتة الدماغية الانسدادية MCA. عند محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تشريح الأعصاب المبهمة بعناية عند التلاعب بالشرايين السباتية للربط ، لأن تلف هذه الأعصاب يمكن أن يؤثر سلبا على تعافي. بعد هذا الإجراء ، يمكن إعطاء العلاجات من أجل الإجابة على أسئلة إضافية ، مثل كيف يمكن أن تؤثر الحماية العصبية على حجم الاحتشاء ، وما هي العلاجات التي قد تكون قادرة على تحسين النتائج بعد السكتة الدماغية.