Delivery of Proteins, Peptides or Cell-impermeable Small Molecules into Live Cells by Incubation with the Endosomolytic Reagent dfTAT

Kristina Najjar; Alfredo Erazo-Oliveras; Jean-Philippe Pellois

doi:10.3791/53175

تسليم والبروتينات، والببتيدات أو خلية بردة الجزيئات الصغيرة إلى الخلايا الحية التي الحضانة مع End...

JoVE Journal
Bioengineering

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Bioengineering

Delivery of Proteins, Peptides or Cell-impermeable Small Molecules into Live Cells by Incubation with the Endosomolytic Reagent dfTAT

تسليم والبروتينات، والببتيدات أو خلية بردة الجزيئات الصغيرة إلى الخلايا الحية التي الحضانة مع Endosomolytic الكاشف dfTAT

Full Text

10,744 Views

10:30 min

September 2, 2015

DOI: 10.3791/53175-v

Kristina Najjar¹, Alfredo Erazo-Oliveras¹, Jean-Philippe Pellois¹

¹Biochemistry and Biophysics,Texas A&M University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

نصف كيفية توصيل البروتينات والجزيئات الصغيرة غير المنفذة للخلايا إلى خلايا الثدييات المستنبتة من خلال بروتوكول حضانة مشترك بسيط مع كاشف يتسبب في تسرب العضيات الداخلية الخلية.

الهدف العام من التجربة التالية هو توصيل الجزيئات الكبيرة إلى الخلايا الحية باستخدام كاشف ثنائي أو فلورسنت أو df tat يمكنه اختراق الخلايا بكفاءة عالية دون إتلافها. يتم تحقيق ذلك عن طريق إنشاء وتنقية عامل التوصيل أولا. Dfta كخطوة ثانية.

يتم تحضين Dfta بالخلايا لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في وجود شحنة الجزيئات الكبيرة ذات الأهمية ، يحفز df tat امتصاص الشحنة داخل الحويصلات الداخلية. تنضج الحويصلات إلى الجسيمات الداخلية المبكرة ، وتصل أخيرا إلى مرحلة الجسيمات الداخلية المتأخرة حيث يكون DF tat قادرا على إطلاق الشحنة في الفضاء العصاري الخلوي للخلايا. بعد ذلك ، يتم تصوير الخلايا بواسطة المجهر الفلوري من أجل تقييم كفاءة تسليم دتا والبضائع ذات الأهمية.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos