تقييم محيط بالغدد التناسلية حساسية والبروستات ماست تنشيط خلية في نموذج الفأر من فصل الأمهات حديثي الولادة

الهدف العام من التجربة التالية هو تحديد تأثير الإجهاد في وقت مبكر من الحياة على الجهاز البولي التناسلي عن طريق قياس الحساسية الميكانيكية حول الأعضاء التناسلية وتنشيط الخلايا البدينة داخل البروستاتا في ذكور C 57 ستة فئران سوداء خضعت لانفصال الأمهات حديثي الولادة. يتم تحقيق ذلك من خلال إجراء فصل الأمهات حديثي الولادة أولا على فضلات C 57 ستة صغار فأر سوداء للحث على إجهاد الحياة المبكر لمدة 20 يوما متتاليا. الخطوة الثانية هي قياس الحساسية الميكانيكية حول الأعضاء التناسلية عن طريق تطبيق سلسلة من الشعيرات الأحادية Von Fre على المنطقة التناسلية المحيطة.

بعد ذلك ، يتم إجراء تلطيخ التولودين الأزرق المحمض على أقسام التبريد من البروستاتا الفأرية. من أجل تحديد تنشيط الخلايا البدينة. تظهر النتائج أن انفصال الأمهات حديثي الولادة يزيد من الحساسية الميكانيكية حول الأعضاء التناسلية وتنشيط الخلايا البدينة الاصطناعية بناء على تحليلاتنا السلوكية والنسيجية.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل التهاب البروستاتا المناعي الذاتي التجريبي ، هي أنها تتضمن التعرض للإجهاد أثناء التطور المبكر ، مما يعجل بالأعراض في وقت لاحق من الحياة ، على غرار ما لوحظ في المرضى الذين يعانون من التهاب البروستاتا المزمن. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال آلام الحوض المزمنة ، مثل تأثير ضغوط الحياة المبكرة على السلوك ، وتقديم دليل نسيجي على حالات الألم المتغيرة. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لالتهاب البروستاتا المزمن ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على متلازمات الألم الوظيفي الأخرى مثل التهاب المثانة الخلالي أو متلازمة المثانة المؤلمة أو الفرج أو الألم العضلي الليفي أو الصداع النصفي.

يمكن تطبيقه حتى على الأمراض النفسية المصاحبة الشائعة الأخرى مثل القلق والاكتئاب في اليوم التالي للولادة ، قم بإزالة السد من قفص المنزل ووضعه في حاوية ثانوية نظيفة. افركي حفنة من الفراش بين الأيدي النظيفة التي ترتدي القفازات للحفاظ على رائحة قفص المنزل ، ثم انقل عمق من سنتيمتر إلى سنتيمترين من فراش قفص المنزل إلى مكبر صوت زجاجي نظيف سعة لترين ومسمى بشكل مناسب. بالإضافة إلى ذلك ، عند ما يقرب من نصف أي مواد فراش تخصيب إضافية موجودة في قفص المنزل مثل الأعشاش أو ورق التجعد إلى السماعة الزجاجية التالية بشكل فردي ، ضع كل الجراء من فضلات واحدة في الدورق المحضر وضع الدورق على الفور عند 33 درجة مئوية و 50٪ رطوبة لمدة 180 دقيقة.

خلال فترة الحضانة المنفصلة ، قم بإزالة السد من الحاوية الثانوية وإعادته إلى قفص المنزل. أعد قفص المنزل إلى موقع السكن المناسب داخل الحيمة. في نهاية فترة الانفصال ، استرجع قفص المنزل وقم بإزالة السد ، ووضعها في حاوية ثانوية نظيفة.

ثم أخرج الدورق من الحاضنة وقم بإسقاط حفنة من الفراش بين الأيدي النظيفة التي ترتدي القفازات للحفاظ على رائحة قفص المنزل أثناء التعامل مع الجراء. انقل الجراء برفق بشكل فردي من الدورق إلى قفص المنزل وأعد أي تخصيب وفراش متبقي في الدورق إلى قفص المنزل. بمجرد إعادة جميع الجراء ، انقل السد من الحاوية الثانوية إلى قفص المنزل وأعده إلى موقع السكن المناسب داخل الحيمة.

كرر هذا الإجراء بأكمله لكل فضلات تخضع لفصل الأمهات حديثي الولادة كل يوم حتى اليوم 21 بعد الولادة. ثم فطم الجراء وإيوائهم في نفس ظروف الفئران الضابطة طوال مدة التجربة. جهز منطقة الاختبار عن طريق وضع وسادة سفلية ماصة أسفل طاولة علوية شبكية سلكية مرتفعة بارتفاع 55 سم.

يجب أن توفر الطاولة مساحة كافية للسماح للمحقق بالاقتراب من الجانب السفلي دون إذهال الفئران. ضع ما يصل إلى 12 فأرا يبلغ من العمر ثمانية أسابيع بشكل فردي تحت غرف بلاستيكية مثقبة شفافة أعلى طاولة الشبكة السلكية. ضع جسما ثقيلا فوق الغرف لمنع الفئران من الهروب.

امسك قاعدة شعيرات أحادية إطار von بثلاث نقاط 22 جراما وفضح الشعيرات الأحادية المتراجعة. ضع المسبار بحيث يكون الشعيرات الأحادية موجهة رأسيا. عندما يكون الماوس في حالة تأهب ، يتم توزيع وزن جسمه بشكل متساو بين الكفوف الخلفية.

ضعه على الجانب الأيسر أو الأيمن من كيس الصفن ، وتجنب خط الوسط حتى يلاحظ انحناء طفيف في الفتيل. أمسك الشعيرات الأحادية في مكانها لمدة 10 ثوان أو حتى يظهر استجابة إيجابية مثل رعشة سريعة أو قفزة أو لعق أو سلوك عض موجه نحو الشعيرات الأحادية. إذا لم يتحرك الفأر ، ولم يظهر أي استجابات إيجابية أثناء تطبيق الشعيرات الأحادية لمدة عشر ثوان ، فقم بتسجيل اختبار استجابة سلبية لجميع الفئران باستخدام نفس الفتيل ، ثم قم بالتبديل إلى الشعيرات الأحادية المناسبة التالية.

استمر في اختبار كل ماوس باستخدام الشعيرات الأحادية الأكبر أو الأصغر التالية حسب الاقتضاء لأربعة تطبيقات إضافية. بعد ملاحظة الاستجابة الإيجابية الأولى ، قم بتشريح ثم قسم التبريد ، وأنسجة البروستاتا الثابتة من الفئران البالغة من العمر تسعة أسابيع إلى أقسام التبريد بسمك سبعة ميكرون. بعد ذلك ، قم بإعداد محلول مخزون بلو 1٪ من تولويدين عن طريق إضافة جرام واحد من التولودين الأزرق O إلى 100 مل من 70٪ من الإيثانول ودوامة الخليط حتى يدخل في المحلول.

قم بتخزين محلول المرق في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى ثلاثة أسابيع. في دورق آخر ، أضف غراما واحدا من كلوريد الصوديوم إلى 100 مل من الماء الموضوعة فوق طبق التحريك. اضبط درجة الحموضة في محلول الملح باستخدام حمض الهيدروكلوريك 12 مولار حتى يتم تحقيق نطاق الأس الهيدروجيني من 0.5 إلى 1.0.

ثم قم بإعداد محلول عمل أزرق محمض بنسبة 0.25٪ عن طريق الجمع بين ثمانية ملليلتر من محلول مخزون أودين الأزرق و 32 مل من محلول كلوريد الصوديوم الحمضي بنسبة 1٪. قم بتثبيتها لأعلى ولأسفل لضمان الدمج الكامل لمحلول المخزون الأزرق المادي وخلطه باستخدام دوامة ، قم بإعداد محلول العمل طازجا لكل دفعة من الشرائح. اغسل أقسام الأنسجة عن طريق غمس الشرائح بشكل فردي لمدة ثانية واحدة تقريبا في أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر يحتوي على حجم كاف من PBS لغمر الأنسجة تماما.

اترك الشرائح تجف في الهواء على منشفة ورقية. بعد ذلك ، ضع الشرائح في وعاء زجاجي قائم يحتوي على ما يكفي من محلول العمل الأزرق 0.25٪ من تولويدين لضمان غمر أقسام الأنسجة بالكامل. احتضن الشرائح لمدة 10 إلى 15 دقيقة أثناء وجودك على منصة هزاز مضبوطة على 15 دورة في الدقيقة.

ثم اغمس الشرائح في PBS لمدة ثانية واحدة تقريبا لغسل أي زائدة من اللون الأزرق الطويل ووضع الشرائح في صندوق الشرائح بحيث تكون الشرائح على جوانبها. للسماح بالصرف. جفف الشرائح في فرن على حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين على الأقل أو طوال الليل في درجة حرارة الغرفة.

بمجرد أن تجف ، اغمر الشرائح في 95٪ من الإيثانول لمدة ثانية واحدة تقريبا ، ثم اترك القسم يجف تماما. كرر هذا الإجراء من مرة إلى 10 مرات حتى يجف النسيج باللون الأزرق أكثر من الأرجواني. بعد ذلك ، اغمر الشرائح في 100٪ من الإيثانول لمدة ثانية واحدة تقريبا واترك القسم يجف تماما.

كرر هذا الإجراء مرة إلى 10 مرات حتى يصبح النسيج داكنا إلى أزرق متوسط ولكن ليس أرجوانيا. أخيرا ، قم بإصلاح البقعة عن طريق احتضان الشرائح في 100٪ زيلين لمدة ثلاث دقائق. اتركها تجف ثم قم بتغطيتها ، وانزلق الشرائح باستخدام الجلسرين PPS أو وسائط التثبيت الدائمة القائمة على الزيلين.

قم بتصريف أي وسائط زائدة وقم بتخزين الشرائح المكتملة في درجة حرارة الغرفة. عند اختبارها باستخدام سلسلة متدرجة من Von Frame Monofilaments ، انفصال الأمهات حديثي الولادة البالغة من العمر ثمانية أسابيع ، أظهرت الفئران ألودينيا ميكانيكية حول الأعضاء التناسلية عند مقارنتها بنظرائها الساذجين. يتضح هذا على أنه انخفاض كبير في عتبة الانسحاب الميكانيكي التي أثارت استجابة سلوكية إيجابية.

يمكن رؤية دليل إضافي على التهاب البروستاتا المزمن متلازمة آلام الحوض المزمنة من الناحية النسيجية هنا هي أقسام ناجمة عن الجليد من أنسجة البروستاتا تم تلطيخها ب o التولودين الأزرق المحمض لمراقبة حبيبات التربتاز الموجودة داخل الخلايا البدينة. لوحظت نسبة أعلى بكثير من الخلايا البدينة المحببة في أقسام البروستاتا من الفئران المنفصلة حديثي الولادة. عند مقارنتها بالفئران الساذجة أثناء إجراء فصل الأمهات حديثي الولادة ، من المهم أن تتذكر الحفاظ على رائحة القفص المنزلي لتجنب رفض الجراء من قبل السد باتباع هذا الإجراء.

يمكن استخدام طرق أخرى مثل اختبار المجال المفتوح أو تفضيل سائل الاختيار لتقييم الأدلة السلوكية لاضطرابات المزاج المرضية المرضية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقييم الحساسية الميكانيكية حول الأعضاء التناسلية وتنشيط الخلايا البدينة في البروستاتا كدليل سلوكي ونسيجي على التهاب البروستاتا المزمن والفئران بعد انفصال الأمهات حديثي الولادة.