النمذجة دماغي من الولادة المبكرة قبل الولادة عن طريق نقص الأكسجة-نقص التروية مع lipopolysaccharide في البينية الذي يحيط بالجنين في الفئران

الهدف العام من هذا الإجراء الجراحي هو توفير نموذج قابل للتكرار لإصابات الدماغ المرتبطة بالولادة المبكرة للغاية ، من خلال تحريض نقص الأكسجة الجهازي العابر في الرحم ونقص التروية والالتهاب الأمنيوسي داخل الرحم لتلخيص قصور المشيمة والتهاب المشيمة والسلى في الفئران. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول التسبب في إصابات الدماغ في الفترة المحيطة بالولادة التي تنشأ عن العمليات داخل الرحم مما يسهل تطوير استراتيجيات علاجية موجهة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تحفز الإصابة الجهازية التي تحاكي الإهانات داخل الرحم من كل من العدوى ونقص الأكسجة ، ونقص التروية مما ينتج عنه عجز عصبي وظيفي في الفئران الناضجة.

هذا النموذج مناسب بشكل خاص لتشريح آليات الإصابة المتعلقة بالالتهاب. نظرا لأنه يمكن اختبار نقص الأكسجة ونقص التروية والمحفزات المعدية بشكل فردي أو كإصابة مشتركة ، فإن ليندسي تشان ، فني من مختبرنا ، سيثبت الإجراء ذلك. قبل البدء في الإجراء ، استخدم مقصات الصغيرة لإزالة كل الشعر من منطقة أسفل البطن في يوم جنيني.

18 فأر حامل بنمط مستطيل ، مع الحرص على عدم تقطيع الحلمات أو توليد طفح جلدي حلاقة. بعد ذلك ، باستخدام مسحات قطنية معقمة ، افرك الجلد بثلاثة تطبيقات متناوبة من بوفيدون اليود و 70٪ إيثانول. عندما يجف الجلد ، تأكد من عمق التخدير المناسب عن طريق إصبع القدم ، واضغط على ولفه.

ثم استخدم مشرطا لعمل شق خط الوسط بطول ثلاثة سنتيمترات في بطن ، متبوعا بتشريح حاد لطبقة الجلد من لفافة البطن بالمقص. استخدام الملقط والمقص الجراحي. ارفع طبقة اللفافة البطنية وقم بعمل شق من خلال الكوع الخطي اللاوعائي.

عندما يتعرض التجويف البريتوني ، ضع الشاش الجراحي على الجزء الخارجي من الشق وبلل الشاش بمحلول ملحي معقم. ثم باستخدام ملقط حاد وضغط خارجي على البطن ، قم بإزالة قرون الرحم برفق من التجويف البريتوني وترتيب القرون على الشاش المبلل. مع الحرص على تجنب التشابك والتلامس مع الأمعاء ، استخدم فقط الأنسجة العضلية بين الأكياس السلوية الفردية لترتيب الأجنة.

ثم باستخدام تشريح حاد ، قم بكشف وعزل الشرايين الرحمية الأربعة. الحرص على عدم إتلاف أوعية الأم عند عزل الشرايين. ضع مشبك تمدد الأوعية الدموية للفئران عيار 30 على كل وعاء قبل تطبيق المشابك ، من المهم التأكد من أن جميع الأنسجة المحيطة نظيفة تماما.

عند وضع المشابك ، قم بتثبيتها بالملقط الحاد ثم ضعها بالتوازي. تعد مراقبة توقف النبض أمرا بالغ الأهمية لضمان نقص الأكسجة الكامل عند وضع جميع المقاطع. تأكد من توقف النبضات القريبة والبعيدة وتغميق الأوعية الرحمية ، بما في ذلك المشيمة الفردية.

ثم قم بتغطية المجال الجراحي بالكامل بالشاش وري الأنسجة بمحلول ملحي معقم. كل 10 دقائق لمدة ساعة بعد 60 دقيقة ، قم بإزالة الشاش وري الحقل مرة أخرى. عندما يتم ترطيب قرون الرحم والأوعية الدموية بشكل كاف ، استخدم الملقط لإزالة كل مقطع تمدد الأوعية الدموية برفق ، مع الحرص على عدم التسبب في صدمة للوعاء الدموي ، والحفاظ على سلامة الأنسجة.

ثم قم بري القرون والحقل جيدا. مرة أخيرة ، مع الحرص على إزالة أي خيوط طائشة من الشاش من الأكياس الأمنيوسية. لعلاج الأجنة المصابة ب LPS ، استخدم ملقطا حادا لتثبيت وتدوير كل كيس يسوي بحيث تكون قاعدة كل كيس يسوي فردي مرئية.

ثم قم بتحميل حقنة أنسولين دقيقة للغاية 0.3 ملليلتر بإبرة قياس ثمانية ملليمترات 31 مع محلول LPS وحقن 100 ميكرولتر من المحلول أمام كل صفيحة مشيمة. عند إزالة الإبرة ، قم بالضغط المباشر على الكيس الأمنيوسي لوقف أي تسرب للسوائل. يعد إدخال إبرة قياس 31 دقيقة للغاية في قاعدة الكيس الأمنيوسي أمرا بالغ الأهمية لتوصيل LPS بشكل صحيح دون السماح لأي سائل يسولي بالهروب.

بعد ري قرون الرحم ثلاث مرات بمحلول ملحي معقم ، استخدم الملقط لإعادة القرون إلى التجويف البريتوني. ثم استخدم خياطة حريرية بثلاثة أغراض لإعادة تقريب حواف طبقة اللفافة العضلية دون خياطة في كيس أو من خلاله ، متبوعا بإغلاق الجلد بخيطة حريرية أخرى 3.0. بعد ذلك ، استخدم إبرة قياس 26 تحت الجلد.

حقن ملليلتر واحد من 0.125٪ بوبيفاكائين حول حواف الجرح. جفف الفئران بالمنشفة حسب الضرورة ، وحقن 0.1 ملليغرام لكل كيلوغرام من البوبرينورفين في مؤخرة الرقبة. ضع في قفص منزلي نظيف مع المراقبة حتى يتعافى تماما.

بعد نقص تروية نقص الأكسجة الجهازي العابر وإعطاء LPS في اليوم الجنيني 18 ، كما هو موضح للتو ، يكشف تلطيخ الهيت واليوزين عن تشوهات نسيجية مرضية كبيرة في كل من المشيمة والدماغ. في الواقع ، المشيمة التي تم فحصها في الأيام الجنينية 19 و 21 تنبعث منها بشكل كبير مع نزيف دقيق ونخر في جميع أنحاء الترس والمتاهة. كما لوحظ تسلل التهابي كبير وزيادة الأوعية الدموية.

كشفت أدمغة أخرى تم فحصها في اليوم الثاني بعد الولادة عن ماغالي البطيني ، بالإضافة إلى فقدان المادة البيضاء والخلايا العصبية الفرعية مقارنة بنقص الأكسجة الجهازي العابر ونقص التروية و LPS أيضا قلل بشكل كبير من التعبير عن بروتين ناقل كلوريد البوتاسيوم ، ناقل كلوريد مركزي لتطوير تثبيط GABAergic في القشرة في اليوم 15 بعد الولادة ، وهو ما يتوافق مع ضعف التنظيم التنموي الذي لوحظ خلال فترة ما بعد الولادة الحرجة من نضوج الدائرة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم قوي لكيفية إجراء هذه الجراحة في الفئران الحامل وكيفية إحداث نقص تروية نقص الأكسجة العابر قبل الولادة عن طريق انسداد الشريان الرحمي مع التهاب داخل الرحم عن طريق الحقن داخل السائل السلوي لمحلول عديدات السكاريد الدهني. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في 90 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.