دراسة المجتمعات الميكروبية في فيفو: نموذج من التفاعل بوساطة بين المضيف المبيضات البيض و الزائفة الزنجارية في الخطوط الجوية

الهدف العام من هذا الإجراء هو بناء نموذج لدراسة التفاعلات بين بكتيريا فردية وفطريات واحدة. يمكن أن تساعد هذه الرسالة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال تفاعلات مسببات الأمراض ، مثل العوامل التي تشارك في الحديث المتبادل واللهجة بين الأنواع. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن البيانات التي تم إنشاؤها من هذا النموذج في الجسم الحي لها أهمية سريرية.

لتثبيت الفطريات داخل الأنف ، قم أولا بتخفيف مرتين في عشرة إلى سادس CFU من C.albicans لكل مليلتر في PBS المعقم. بعد ذلك ، بعد التأكد من فقدان المنعكس الصحيح في فأر منخفض التوتر البالغ ، قم بشفط ما لا يقل عن 50 ميكرولترا من المعلق الفطري في ماصة سعة 200 ميكرولتر. الآن ، أمسك الفأر بيد واحدة وأدر بحيث يقع على ظهره مع توجيه بطنه في وضع مستقيم.

عندما يكون الماوس في موضعه، استخدم إصبع السبابة في اليد التي تمسك بالماوس لدعم الرأس، والإبهام لإبقاء الفك مغلقا، وحرك طرف الماصة بالقرب من أنف. بعد ذلك ، قم بتوزيع قطرة 50 ميكرولتر من الفطريات بعناية على فتحتي الأنف ، مما يسمح باستنشاق القطرة عن طريق التنفس التلقائي للفأر. ووضع الفأر بمفرده في قفص حتى يتعافى تماما.

بعد أربعة أيام من تركيب C.albicans ، احلق بطن القتل رحيم ، متبوعا بتعقيم الإيثانول للجلد المكشوف. بعد ذلك ، استخدم المقص لفتح الجلد من القص إلى منتصف البطن. بعد ذلك ، قم بتمديد الشق على طول القفص الصدري على جانبي خط الوسط وقم بطي الجلد للخلف على جانبي الصدر.

عندما يكون القفص الصدري مرئيا ، قم بعمل شق رأسي على جانبي الصدر باتجاه الترقوة ، واستخدم القص لإمالة جدار الصدر الأمامي بالكامل لتصور القلب والرئتين. بعد ذلك ، باستخدام حقنة هبارية مسبقا ، قم بثقب القلب بجوار الشريان داخل البطين ، واسحب ما لا يقل عن 500 ميكرولتر من الدم. ضع عينة الدم على الثلج.

ثم قم بعمل شق عنق الرحم في خط الوسط للكشف عن القصبة الهوائية. قم بتشريح اللفافة حول القصبة الهوائية بعناية ، متبوعا بوضع خياطة تحت القصبة الهوائية. بعد ذلك ، استخدم إبرة تزقيم معدلة بقياس 20 لقسطرة القصبة الهوائية ، وتأمين القنية بالخياطة الموضوعة مسبقا.

لإجراء غسل القصبات الهوائية ، قم بتوزيع 500 ميكرولتر من PBS المثلج برفق في الرئة. بعد ذلك ، قم بشفط سائل الغسيل ونقل السائل إلى أنبوب طرد مركزي سعة ملليلترين على الجليد. بعد جمع عينتين أخريين سعة 500 ميكرولتر ، قم بإزالة الرئتين من الصدر ، ووضع قطعة من الرئة في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مليلتر للتخزين الفوري عند 80 درجة مئوية تحت الصفر.

بعد ذلك ، ضع قطعة أخرى من أنسجة الرئة في أنبوب انحلال الدم الموزون مسبقا يحتوي على PBS على الجليد. أخيرا ، قم بعمل شق في الجانب الأيسر من البطن. احصد الطحال في أنبوب انحلال الدم الثاني الذي يحتوي على مليلتر واحد من PBS وضع الأنبوب على الجليد.

يتم الحصول على نموذج ثبات لمدة أربعة أيام عن طريق التثبيت داخل الأنف من خمسة في عشرة إلى الخامس CFU من C.albicans لكل فأر. خلال هذه الأيام الأربعة ، تكتسب الفئران وزنا ، لكنها لا تظهر عليها إصابة في الرئة. ومع زيادة CFU لللقاح ، تزداد إصابة الرئة.

مع الحد الأقصى لإصابة الرئة التي لوحظت بين 24 إلى 36 ساعة بعد الإصابة. العبء البكتيري, على النقيض من ذلك, يوضح انخفاض CFU واحد سجل لكل مليلتر كل 24 ساعات, مع زيادة انتشار البكتيريا التراكمية لوحظت على مدى كل يوم. في غسل القصبات الهوائية التي يتم حصادها من الفئران المصابة ، يتم تجنيد العدلات على نطاق واسع ، حيث يظهر عدد الخلايا التفاضلية 90 في المائة من الخلايا الليمفاوية الضامة التي تتسلل إلى الخلايا المناعية.

باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل تحليل غسل القصبات الهوائية للإجابة على أسئلة إضافية حول توصيف الاستجابة الالتهابية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية بناء استعمار Pseudomonas. لا تنس أن العمل مع المبيضات المضيئة يمكن أن يكون خطيرا للغاية ، ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات ، مثل ارتداء معدات واقية لتجنب تلوث القطيرات ، أثناء تنفيذ هذا الإجراء.