A السريع المظهري العصبية نظام تسجيل النقاط لتقييم مرض في التقدم SOD1-G93A نموذج الفأر من ALS

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم الوظيفة العصبية العضلية للفئران SOD one G 93 بسرعة وموثوقية من خلال التقييم اليومي لوظيفة الأطراف الخلفية باستخدام نظام تسجيل عصبي بسيط النمط الظاهري. يتم تحقيق ذلك عن طريق مراقبة الأطراف الخلفية للفئران أولا أثناء تعليقها من الذيل. الخطوة الثانية هي السماح للفئران بالمشي أثناء مراقبة مشيتها.

بعد ذلك ، يتم وضع الفئران على جانبيها لاختبار وجود أو عدم وجود منعكس الكتابة. الخطوة الأخيرة هي إجراء تحليل البيانات عن طريق تركيب بيانات الدرجات العصبية لأفواج الفئران في نموذج انحدار لوجستي ترتيبي. في النهاية ، يتم استخدام نظام التسجيل العصبي الظاهري الخاص بنا لتقييم تطور المرض في SOD one G 93 ، وهو نموذج فأر ل LS لغرض تمييز فعالية التدخلات العلاجية.

الميزة الرئيسية لهذه الطريقة على جميع التقنيات الأخرى الموجودة هي أنها سريعة وبسيطة وموثوقة ومرهقة للفئران. تمتد الآثار المترتبة على هذه الطريقة إلى علاج التصلب الجانبي الحديثة أو LS لأنها تسمح بالتقييم السريع للتدخلات العلاجية في نموذج الفئران الأكثر شيوعا للمرض. يعد العرض المرئي أمرا بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم طريقة التسجيل العصبي لأن الاختلافات العصبية يمكن أن تكون دقيقة.

ابدأ بإسكان ذكور SOD واحد G 93 الفئران بحيث يكون هناك فأر واحد لكل منزل قفص ، وأنثى SOD واحدة G 93 A الفئران تصل إلى اثنين لكل قفص. توفير الإثراء البيئي للفئران على شكل أكواخ بلاستيكية. زود الفئران بالطعام والماء في سجل Lido.

أوزان الجسم لجميع الفئران والدراسات في نفس الوقت. يعد وزن الجسم اليومي مؤشرا حساسا لتطور المرض وأي ضيق قد ينتج عن العلاج المزمن بالعقاقير. أثناء الدراسة ، قم بتقييم النتيجة العصبية لكل فأر يوميا من خلال نظام من ثلاثة اختبارات يتم إجراؤها بالتتابع.

راقب بعناية لأن تحديد الدرجات عند نقاط الانتقال المظهرية أمر صعب للغاية في الاختبار الأول. اختبار تعليق الذيل ، أمسك الماوس على بعد حوالي 1.5 بوصة من قاعدة الذيل فوق الجزء العلوي من السلك في قفص المنزل. راقب وظيفة الأطراف الخلفية لمدة ثانية إلى ثانيتين وكرر الاختبار ثلاث مرات.

لاختبار المشي. ضع الماوس على سطح نظيف يوفر بعض الجر ومسافة المشي لا تقل عن 25 سم. اسمح للفأر بالمشي حتى 75 سم أثناء مراقبة ga.

بالنسبة لاختبار رد الفعل الكتابي، ضع الماوس على جانبه واستخدم ساعة توقيت لقياس الوقت الذي تستغرقه الكتابة بنفسها دون مساعدة من كلا الجانبين. مطلوب تجربة واحدة فقط من هذا الاختبار. سجل كل طرف خلفي يسار أو يمينا بشكل مستقل على مقياس من صفر إلى أربعة بناء على النتيجة الجماعية لاختبارات المراقبة المظهرية الثلاثة.

درجة الجيوب الأنفية صفر تشير إلى أن الفأر ما قبل الأعراض. أثناء اختبار التعليق ، يتم تمديد الأطراف الخلفية بالكامل بعيدا عن خط الوسط الجانبي وتبقى في هذا الوضع لمدة ثانيتين أو أكثر. أيضا ، أثناء اختبار المشي ، لوحظت مشية طبيعية.

قم بتعيين درجة واحدة تشير إلى ظهور الأعراض الأولى. إذا كان الطرف الخلفي أثناء اختبار التعليق إما ينهار باتجاه خط الوسط الجانبي ، أو ينهار جزئيا باتجاه خط الوسط الجانبي يرتجف أو ينهار بشكل غير طبيعي بطريقة أخرى. بالإضافة إلى أعراض اختبار التعليق التي تم عرضها للتو ، يجب أن تظل مشية الفأر التي يجب أن تحصل على درجة واحدة طبيعية أو أقل قليلا.

قم بتعيين درجة اثنين تشير إلى بداية البارسيس. إذا انهار الطرف الخلفي جزئيا أو كليا أثناء اختبار التعليق ، بالإضافة إلى أثناء اختبار المشي ، يتم استخدام الأطراف الخلفية للحركة إلى الأمام. ومع ذلك ، فإن أصابع القدم إما تلتف لأسفل مرتين على الأقل أثناء المشي لمسافة 75 سم أو يسحب أي جزء من القدم للحصول على درجتين.

يجب أن يظل الماوس قادرا على كتابة نفسه بعد وضعه على كلا الجانبين في غضون 10 ثوان. درجة الجيوب الأنفية من ثلاثة تشير إلى الشلل. إذا أظهر الفأر أثناء اختبار التعليق شلا صلبا في الطرف الخلفي أو كان لديه الحد الأدنى من حركة المفصل ، فقد يظل الفأر يظهر حركة أمامية أثناء اختبار المشي ، ولكن ليس باستخدام أطرافه الخلفية.

بالإضافة إلى درجة الجيوب الأنفية البالغة ثلاثة ، يجب أن يظل الماوس قادرا على كتابة نفسه بعد وضعه على كلا الجانبين في غضون 10 ثوان. أخيرا ، درجة أربعة ، تحدد نقطة النهاية الإنسانية كلما أظهر الماوس شلل صلب أثناء التعليق. لا يظهر الاختبار أي حركة أمامية أثناء اختبار المشي باستخدام الأطراف الخلفية ، كما أنه غير قادر على كتابة نفسه في غضون 10 ثوان بعد وضعه على أي من الجانبين.

عادة ما يكون لدى ذكور الفئران تطور مرض أكثر عدوانية من إناث الفئران ، كما يتضح من نسبة أكبر من عمرها تظهر أعراضا يمكن تصنيفها بدرجة عصبية واحدة مقارنة بالإناث. مع زيادة الأعراض في نطاق الدرجة العصبية التي تبلغ درجتين أو ثلاث ، يكون عدد الأيام التي تقضيها في كل درجة متساويا في التكرار عبر الجنسين. تظهر هنا الرسوم اللوجستية الترتيبية ، الرسوم البيانية للتحليل الإحصائي التي تم إنشاؤها باستخدام بروتوكول neuroco الذي تم وصفه للتو.

هذه البيانات مأخوذة من دراسة علم الأدوية لفعالية الدواء حيث تتم مقارنة مجموعة من SOD واحد G 93 الفئران التي تتلقى مركب الاختبار TDI 1 73 بمجموعة من الفئران التي تتلقى السيارة. لم تلاحظ فروق ذات دلالة إحصائية عند تحليل الجنسين بشكل منفصل ، ولكن تم الوصول إلى دلالة إحصائية عند دمج الجنسين. على الرغم من إظهار اتجاهات مماثلة ، إلا أن تحليل كابلان ماير للبقاء على قيد الحياة لم يكن حساسا بما يكفي للكشف عن اختلافات كبيرة حتى عند دمج الجنسين.

بمجرد إتقانها ، يمكن تطبيق نظام التسجيل في أقل من دقيقة لكل ماوس إذا تم تنفيذه بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقييم تطور المرض في SOD one G 93 ، وهو نموذج فأر ل LS باستخدام نظام Neuroco.