حقن Intracerebroventricular من الببتيدات اميلويد β في الفئران العادية للحث تماما العجز الإدراكي الزهايمر تشبه

الهدف العام من هذا الإجراء الجراحي هو إجراء الحقن داخل المخ البطيني لبيتا الأميلويد بدون أدوات تجسيمية ، والحث بشكل حاد على تشوهات سلوكية شبيهة بمرض الزهايمر في الفئران العادية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأعصاب ، مثل اكتشاف الأدوية لمرض الزهايمر. الفائدة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكننا إجراء الحقن المباشر ل A beta في منطقة المخ البطيني للفئران دون مساعدة من الأدوات التجسيمية ، وتسمح لنا بتقليد تشوهات السلوك الشبيهة بمرض الزهايمر في الفئران دون انتظار عملية الشيخوخة.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو علاج أو تشخيص مرض الزهايمر ، لأنه يمكن استخدامها لدراسة أمراض المصب لبيتا النشواني ، وفحصها بحثا عن الأدوية المرشحة. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة ، لأن العثور على الموقع الدقيق للبريجما على جمجمة قد يكون صعبا. لبدء هذا الإجراء ، اصنع مليمولار A beta مع DMSO.

ثم قم بتخفيفه عشرة أضعاف في PBS. بعد ذلك ، قم بإعداد محلول PBS يحتوي على 10٪ DMSO كوسيلة لحقن القيمة المحلية المضافة. بعد ذلك ، قم بلف المحقنة الدقيقة بإبرة من الفولاذ المقاوم للصدأ قياس 26 باستخدام شرائط Parafilm لضبط طول الإبرة للحقن الذي يتم التحكم فيه بالعمق.

لف المحقنة بكثافة عدة مرات حتى لا يتم ضغط البارافيلم أثناء إدخال الإبرة ، ويظل طول الإبرة ثابتا. بعد ذلك ، قم بقص طبقات شرائط Parafilm لضبط طول الإبرة إلى 3.8 ملم بين طرف الإبرة والبارافيلم. بعد ذلك ، اغسل المحقنة مرتين بنسبة 70٪ من الإيثانول.

بعد ذلك ، شطف المحقنة بالماء المقطر. جففها تماما في غطاء الدخان لمدة 30 دقيقة على الأقل ، واترك المحقنة النظيفة تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 20 دقيقة أخرى قبل الحقن. في هذه الخطوة ، ضع فأرة مخدرة عمرها سبعة أسابيع على حصيرة دافئة.

بعد ذلك ، ضع قطرات أو مرهم معقم PBS على كلتا العينين لمنع جفاف القرنية أثناء العملية. بعد ذلك ، تأكد من التخدير الكافي من خلال تقييم منعكس الانسحاب الباسطة لقرص إصبع القدم. بعد ذلك ، قم بإعداد مرآتين بخطوط رأسية متعددة مرسومة على الأسطح لتوفير مراجع للحقن العمودي للحقنة.

ضع مرآة بجوار جسم الماوس مباشرة ، والأخرى أمام الرأس. حافظ على M1 موازيا لخط الوسط الوهمي بين عيني الماوس ورتب M2 عموديا على M1 ، بحيث تشكل الطائرتان زاوية 90 درجة. بعد ذلك ، رش 70٪ من الإيثانول على جبهة الماوس ، وافركه بمسحات قطنية جافة.

لتحديد موقع البريجما ، ضع أصابع الإبهام والسبابة مباشرة فوق العينين واضغط قليلا على الجبهة لأسفل لدرجة أن كلتا العينين تبرز. في الوقت نفسه ، اسحب جلد الجبهة للخلف لتقليل حركة الجمجمة تحتها. حدد موقع الحقن بشريط خياط على عمق 2.4 ملم تحت الجمجمة.

املأ المحقنة ب 10 ميكرولتر من محلول A-beta أو السيارة. ضع المحقنة بحيث تكون عمودية على مستوى موقع الحقن. بعد ذلك ، قم بمحاذاة الصور المنعكسة للحقنة في كلتا المرآتين مع الخطوط المرسومة على المرايا.

ابدأ بإدخال الإبرة حتى يلامس غلاف البارافيلم الجلد. أمسك المحقنة بيد واحدة ، وحقن خمسة ميكرولترات من محلول A-beta أو السيارة باليد الأخرى ، ببطء أكثر من خمس ثوان دون توقف ، وتأكد من بقاء المحقنة عمودية طوال الوقت. بعد الانتهاء من الحقن، انتظر من ثلاث إلى خمس ثوان قبل إخراج المحقنة.

ضع أصابع الإبهام والسبابة مرة أخرى على الرأس ، واضغط عليها لمنع الجمجمة من أي حركات غير ضرورية. ثم قم بإزالة المحقنة دون إمالة. بعد ذلك ، ضع الماوس على وسادة دافئة للتعافي.

للتأكد مما إذا كان A-beta قد تم حقنه في منطقة ICV المستهدفة ، تحقق من أثر إدخال الإبرة في أنسجة المخ لمعرفة ما إذا كانت قد وصلت إلى أحد البطينين. إذا لم ينجح الحقن ، فاستبعد بيانات هذا الشخص من تحليل النتائج التجريبية. في هذه التجربة ، تم استخدام ببتيد A-beta كامل الطول المكون من 42 من الأحماض الأمينية لإنتاج خليط من مونومرات بيتا A ، والأوليغومرات ، والألياف.

من خلال خطوة الأحادية المستحثة عن HFIP ، تم الحصول على مونومرات متجانسة نسبيا. بعد الحضانة التي استمرت سبعة أيام ، تم تطوير أحجام متنوعة من مجاميع A-beta ، حيث كانت المقاطعات والرباعيات هي الأنواع السائدة بين أشكال القلة من A-beta. في هذه الدراسة ، تم تقييم الذاكرة العاملة المكانية في الفئران المحقونة A-beta في اختبار المتاهة Y ، حيث تم تسجيل تسلسل خيارات الذراع وعدد إدخالات الذراع الإجمالية بينما سمح لكل فأر باستكشاف المتاهة بحرية.

أظهرت مجموعة الفئران المحقونة A-beta معدلات تناوب أقل بكثير ، مما يشير إلى تطور العجز المعرفي. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في 20 دقيقة ، بما في ذلك إجراءات التخدير ، إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذه الإجراءات ، من المهم أن تتذكر جعل الإبرة عمودية على مستوى الحقن.

بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال اكتشاف أدوية مرض الزهايمر لاستكشاف الفحص في الجسم الحي للأدوية المرشحة في نماذج القوارض لمرض الزهايمر التي يسهل الوصول إليها. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء الحقن داخل المخ البطيني بدون أدوات تجسيمية.