الكميات من البينية البريتوني ورم خبيث سرطان المبيض

الهدف العام من هذه التجربة هو تحديد عبء الورم النسبي للورم الخبيث لسرطان المبيض داخل الصفاق في نموذج الفئران المتلازمة تقويم العظام. يمكن أن تساعدنا هذه الطريقة الجديدة لتصوير وقياس عبء الورم النسبي في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في تنظيم ورم خبيث لسرطان المبيض. الميزة الأساسية لهذه التقنية هي أنه من خلال إلغاء خلط أطياف الفلورسنت ، تتم إزالة التألق التلقائي للأنسجة من الصور ، مما يتيح قياس عبء الورم النسبي القياسي.

هذه التقنية رؤى حول ورم خبيث لسرطان المبيض البشري مع الآثار المترتبة على مراقبة فعالية العلاجات. يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية لأننا نقرن تقنية تصوير قوية بإجراء تحليلي لاستخراج البيانات الكمية من الصور. سيوضح الإجراء اليوم Yueying Liu ، مدير برنامج المختبر في Stack Lab.

بعد 10 أسابيع من نمو الخلايا السرطانية، ضع جسم كل فأر مخدر في نظام تصوير بصري حيواني صغير، واحدا تلو الآخر. افحص جميع الفئران في المجموعة في كل نقطة زمنية. لمراقبة الخلايا السرطانية المصنفة بالفلورسنت ، قم بتنفيذ عملية استحواذ متعددة الأطياف لجمع ما مجموعه خمس صور.

حدد تعريضا ضوئيا قياسيا لمدة 15 ثانية، واثنين في اثنين، ومجال رؤية 16 سم، ونقطة توقف F 1.1. بعد ذلك ، احصل على صورة انعكاس للحيوان بأكمله باستخدام الضوء الأبيض من مرشح الإثارة المفتوح ، ومرشح انبعاث مفتوح ، وتعريض قياسي لمدة 0.2 ثانية مع اثنين في اثنين ، ومجال رؤية 16 سم ، مع توقف F 2.8. بعد القتل الرحيم ، استخدم مقص تشريح مدبب لقطع الجلد من الأمام على طول الخط الأوسط البطني للفأر ، من أعلى الفخذين إلى أسفل القفص الصدري.

افصل الجلد برفق عن الأنسجة البريتونية ، مع التأكد من عدم ثقب الجدار البريتوني. ثم قم بقصها بشكل جانبي ، على طول الجزء السفلي من القفص الصدري ، وأعلى الفخذين ، لإنشاء سدائل من الجلد. ضع الماوس على جانبه البطني في الماسح الضوئي ، بحيث يكون التجويف البريتوني متجها لأسفل مع سحب اللوحات الجلدية.

امسح الماوس بأعضائه في الموقع ، باستخدام نفس المعلمات التي كانت تستخدم سابقا للماوس الحي. الآن ، استمر في تشريح الفأر عن طريق استخراج الكبد والثرب والبنكرياس والمعدة والحجاب الحاجز والأمعاء الدقيقة والغليظة باستخدام التقنيات القياسية. أيضا ، قم بإزالة الصفاق الأيسر والأيمن والمبيضين والكلى والمساريق وأخيرا الوسادة الدهنية.

مراقبة وتعداد وتسجيل كل من الأورام المرئية على الأعضاء. استخدم الفرجار لقياس قطر كل ورم. قم بتعيين الأورام التي يقل قطرها عن ملليمترين على أنها صغيرة، وتتراوح بين ملليمترين وخمسة ملليمترات متوسطة، وأكبر من خمسة ملليمترات.

بعد ذلك ، ضع الأعضاء على قالب مسح الأعضاء ، الموجود في الشكل الرابع من بروتوكول النص المصاحب ، واستخدمه لتنظيم موقع كل عضو أثناء الفحص التالي. استخدم PBS للحفاظ على رطوبة الأعضاء. امسح كل ورقة من الأعضاء باستخدام نظام التصوير البصري للحيوانات الصغيرة والمعلمات التي تم استخدامها سابقا.

بعد المسح ، ضع الأعضاء في 10٪ فورمالديهايد ، وقم بمعالجتها من أجل علم الأنسجة باستخدام التقنيات القياسية. من أجل تقليل كمية التألق التلقائي في كل مسح متعدد الأطياف ، قم أولا بتحميل البروتين الفلوري الأحمر في ملف طيفي في الجسم الحي متبوعا بالأرضية التلقائية في ملف أحمر في الجسم الحي في نافذة الصور غير المختلطة ، وحدد un-mix. ثم قم بتصدير ملفات dot bip بتنسيق dot tif غير مقاس 16 بت ، وقم بتحميلها في الصورة J ، بالانتقال إلى ملف ، وافتحه ، ثم تحديد ملف tif النقطي الصحيح 16 بت.

بعد ذلك ، انتقل إلى قائمة الصور ، وحدد ضبط ، ثم تباين السطوع ، واضبط الحد الأدنى للقيمة المعروضة على الصفر ، والحد الأقصى للقيمة المعروضة إلى زائد 35353. ثم ضمن قائمة الصور مرة أخرى ، انتقل إلى البحث عن الجداول ، وحدد الأحمر الساخن. تتطلب النماذج الحيوانية المختلفة مستويات سطوع مختلفة ، ولكن من المهم الحفاظ على ثبات السطوع خلال دراسة معينة.

باستخدام أداة اختيار اليد الحرة ، ارسم منطقة ذات شكل حر لاختيار الاهتمام حول كل عضو. وينبغي أن تكون منطقة الشكل الحر محل الاهتمام قريبة من حدود الجهاز. بعد ذلك ، اكتب التحكم و M لاستخدام أداة القياس لحساب مساحة سطح كل عضو.

سجل هذه البيانات في جدول بيانات. مع منطقة الاهتمام التي تم رسمها حول كل عضو ، انقر بزر الماوس الأيمن وحدد مكرر لتضمين العضو فقط. ثم ، ضمن الصورة ، انتقل إلى ضبط ، ثم العتبة ، واضبط مستوى العتبة الأدنى على زائد 1 ، 200 ومستوى العتبة الأعلى إلى زائد 1 ، 700.

تحقق أيضا من الخلفية الداكنة ، ثم حدد موافق. سيؤدي هذا إلى تحديد المناطق الأكثر سطوعا فقط في المناطق الفلورية. قد تتطلب الصور معالجة يدوية لأشرطة تمرير العتبة في الصورة J بحيث يتم تحديد المناطق الأكثر سطوعا سابقا لخطوة التحليل، كما هو موضح أعلاه.

تتطلب نماذج المرض المختلفة قيودا عتبة مختلفة ، ولكن من المهم الحفاظ على مستويات العتبة متسقة طوال دراسة معينة. ضمن التحليل ، حدد تحليل الجسيمات ، وقم بتغيير حجم البكسل التربيعي إلى 10 إلى ما لا نهاية. اختر إظهار المخططات التفصيلية، وحدد تحديد عرض النتائج فقط، ثم انقر فوق موافق.

سيقيس هذا كلا من المناطق والكثافات المتكاملة الخام للمناطق الساطعة التي تعتبر أوراما. سجل قيم مساحة السطح والكثافة المتكاملة الخام لكل اختيار من الورم معا في نفس ورقة الانتشار التي تحتوي على مناطق سطح الأعضاء. ثم ، ضمن التحليل ، حدد الأدوات ، وانتقل إلى شريط المعايرة.

أضف شريط مقياس معايرة إلى صور الأعضاء. يمكن أن تحتوي المونتاج على أعداد أكبر أو أقل من الأعضاء كما تمليها دراسة معينة. بعد ذلك ، ضمن ملف ، انتقل إلى حفظ باسم ، واحفظ المونتاج كنقطة تيف ونقطة jpeg.

بعد ذلك ، افتح ملف dot jpeg للأعضاء ، وانتقل إلى قائمة الإدراج لإضافة مربع نص إلى كل صورة. أضف تسميات الأعضاء عن طريق إنشاء مربع نص أسفل كل صف من الصفوف الثلاثة للأعضاء. افتح كل ملف من ملفات tif النقطية 16 بت لعمليات المسح الضوئي بالكامل في الصورة J بترتيب رقم الماوس.

ثم انتقل إلى قائمة الصور ، وحدد ضبط ، ثم تباين السطوع. قم بتعيين الحد الأدنى للقيمة المعروضة على صفر، والحد الأقصى للقيمة المعروضة إلى زائد 35353. بعد ذلك ، ارجع إلى قائمة الصور ، وللبحث عن الجداول ، ثم حدد الأحمر الساخن.

بمجرد اكتمال ذلك ، احفظ المونتاج كملف dot tif وملف dot jpeg. خط خلايا سرطان المبيض الفئران ID8 الذي يتم حقنه في الفئران قبل 10 أسابيع من تصوير التألق في القناة الحمراء ، ويستمر في القيام بذلك طوال فترة النمو. التصوير المباشر باستخدام نظام التصوير البصري للحيوانات الصغيرة قادر على عرض خلايا ID8 المتوسعة في الفأر ويوفر نهجا أكثر دقة من مجرد وزن الفأر من أجل تقييم عبء الورم.

بعد القتل الرحيم وإزالة طبقة الجلد البطني ، يمكن رؤية الأعضاء السليمة بمزيد من التفصيل. ومع ذلك ، فإن الأعضاء الفردية الموضوعة على قالب مسح الأعضاء تعرض عبء الورم بوضوح في كل عضو. عبء الورم في الثرب والبنكرياس والمبيضين والمساريق للفأر الموضح على اليسار أكبر بكثير من نفس الأعضاء في الفأر الموضحة على اليمين.

يتم تأكيد ملاحظة عبء الورم التفاضلي كميا من حيث منطقة خدمة الورم وشدة إشارة الورم. بمجرد إتقانها ، يمكن استخدام هذه التقنية لتصوير ما يصل إلى 18 فأرا حيا في الساعة. يستغرق التشريح والتصوير خارج الجسم الحي للأعضاء الفردية حوالي 20 دقيقة لكل عينة.

بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل الرنين المغناطيسي الكمي من أجل معالجة فرضيات مثل تأثير السمنة على ورم خبيث لسرطان المبيض ، كما هو موضح في مقالتنا البحثية عن السرطان لعام 2015.