والسكتة الدماغية تنوعا فأري موديل تحت القشرية الأبيض المسألة لدراسة محور عصبي تنكس والأبيض المواد بيولوجيا الأعصاب

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد موقع سكتة دماغية صغيرة بدقة داخل المادة البيضاء الفئرانية لنمذجة هذا الشكل الشائع من سكتة دماغية المادة البيضاء تحت القشرية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال السكتة الدماغية ، مثل آليات الإصابة المحورية ، والاستجابة العصبية للسكتة الدماغية تحت القشرية ، وكيف تستجيب العناصر الخلوية للمادة البيضاء خلال كل من المراحل الحادة والإصلاح للسكتة الدماغية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن استخدامها لتوطين السكتة الدماغية بدقة للمادة البيضاء ، ويمكن استخدامها مع مجموعة متنوعة من نماذج فأر الفئران.

بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة ، بسبب الكمية الصغيرة من المادة البيضاء التي تؤدي إلى سوء تحديد موقع السكتة الدماغية. قد تكون هناك حاجة إلى تعديلات طفيفة على زاوية الحقن أو الإحداثيات التجسيمية لكل سلالة من الماوس ، أو الإعداد التجسيمي. ابدأ أولا بلصق ماصة زجاجية مسحوبة على أنبوب متصل بخط تفريغ.

أدخل الطرف المسحوب في محلول L-Nio ، أو L-Nio plus tracer الفلورسنت. ابدأ الفراغ ، وقم بتطبيق الشفط حتى يتم ملء ملليمترين على الأقل من الجزء الذي يبلغ قطره 0.5 ملم من الماصة. ضع الماصة المملوءة على جانب واحد.

ثم ضع الماوس في جهاز تجسيمي مجهز بمجهر تجسيم. بعد تخدير الفأر وتجهيزه للجراحة وفقا للإجراءات المعتمدة ، تحقق من عمق التخدير بقرصة إصبع القدم. يجب ألا يكون هناك رد.

بعد ذلك ، اضبط ذراع الحقن على 36 درجة. قم بلصق حامل ماصة زجاجية مسحوبة على الطرف البعيد لنظام حقن الضغط منخفض الحجم ، وقم بتثبيته بذراع الحقن. بعد عمل شق في خط الوسط لفروة الرأس بطول 1.5 سم لكشف الجمجمة ، جفف الجمجمة السطحية بقطعة قطن.

بعد ذلك ، أثناء النظر من خلال المجهر التجسيمي ، بتكبير واحد إلى ثلاثة X ، استخدم أداة micropoint لإزالة أي أنسجة سمحاق مغطية. مارك بريجما بعلامة دقيقة. ثم استخدم مثقابا جراحيا مزودا بمثقاب جراحي ذو رؤوس دقيقة لحفر بضع قحف بيضاوي الشكل بحجم ملليمترين ، بدءا من الخلف عند بريجما ، ويمتد إلى الأمام على يسار خط الوسط.

قم بإزالة شظايا العظام والأنسجة الرخوة المغطاة بحيث يمكن تصور القشرة الدماغية. حافظ على رطوبة السطح القشري عن طريق وضع قطرات من المحلول الملحي المعقم بشكل متقطع. بعد ذلك ، قم بتثبيت الماصة المملوءة بذراع الحاقن.

قم بمحاذاة الطرف البعيد للماصة مع بريجما، وقم بتصفير الإحداثيات التجسيمية. ادفع الماصة إلى نقطة الحقن الأولى باستخدام الإحداثيات الأمامية والخلفية والإنسية الجانبية المدرجة في الجدول الأول. بعد ذلك ، ادفع الماصة إلى السطح القشري ، وقم بصفر القياس الظهري البطني.

اخفض الماصة ببطء إلى الإحداثيات الظهرية البطنية. تأكد من ضبط تكبير المجهر التجسيمي على ثلاثة X ، وأنه يمكن رؤية الشبكة المعايرة بوضوح. اعرض الماصة المائلة من الجانب بحيث يكون للمغضروف المفصلي السائل الهوائي رؤية سهمية.

يجب أن يظهر الغضروف المفصلي في نفس المستوى البؤري لكل من الجدار الداخلي والخارجي للماصة. الآن ، باستخدام نظام حقن الضغط الموضعي المحدد على 20 رطل لكل بوصة مربعة لنبضات 20 مللي ثانية ، قم بحقن 100 نانولتر من L-Nio في الدماغ. بعد حقن الحجم الإجمالي ، انتظر خمس دقائق لمنع الارتجاع فوق مسار الماصة.

بعد ذلك، اسحب الماصة، وكرر إجراء الحقن في المجموعة الثانية والثالثة من الإحداثيات الواردة في الجدول الأول. بعد الحقن النهائي، قم بإزالة الماصة وضع ما يكفي من شمع العظام لملء موقع حج القحف. أخيرا ، قم بتقريب حواف جرح فروة الرأس ، واربطها بمادة لاصقة جلدية.

بعد إعطاء تسكين ما بعد الجراحة ، ضع في قفص نظيف. توفير المضادات الحيوية بعد الجراحة في مياه الشرب لمدة خمسة أيام ، أو حتى التضحية إذا كان أقل من خمسة أيام. بعد التضحية بالفأر وقطع رأسه وفقا للإجراءات المعتمدة ، استخدم مقصا معقما لفتح الجمجمة للخلف ، ثم استخدم ملعقة لإزالة الجمجمة العلوية برفق.

بعد ذلك ، أدخل ملعقة معقمة بحجم أربعة ملليمترات في مقدمة الدماغ لقطع البصلة الشمية والأعصاب البصرية. بعد ذلك ، ارفع الدماغ برفق من الكالفاريوم وضعه في محلول تشريح مثلج بارد. باستخدام كتلة دماغية وشفرات حلاقة معقمة ، قم بقص شريحتين إلى ثلاثة مليمترات تحتوي على المنطقة المصابة ، وضعها في مخزن مؤقت للتشريح البارد.

تحت مجهر تشريح ، حدد المادة البيضاء الكامنة وراء القشرة الحركية في نصف الكرة المحقون. في فترات مبكرة بعد السكتة الدماغية ، يمكن أن يسمح حقن L-Nio الممزوج بأصباغ المختبر الشائعة ، مثل Fast Green ، بالتعرف البصري على السكتة الدماغية. في فترات أطول بعد السكتة الدماغية ، يمكن تحديد المنطقة بصريا عن طريق النخر البؤري وشحوب المايلين.

بمجرد تحديده ، استخدم مشرطا لتشريح منطقة المادة البيضاء التي تحتوي على السكتة الدماغية بعناية. قم بإزالة القشرة المغطى والمخطط الأساسي حسب الرغبة. كما هو موضح هنا ، يوضح وضع العلامات المناعية الفلورية للخيوط العصبية ، كما هو موضح باللون الأحمر ، درجة فقدان المحور بعد سبعة أيام من السكتة الدماغية ، باستخدام النهج الإنسي.

باستخدام النهج الخلفي الزاوي ، يتم استهداف آفة سكتة دماغية المادة البيضاء فوق البطين الجانبي مباشرة وتظهر تفاعلا مكثفا للدبقية الصغيرة ، كما تم اكتشافه بواسطة الملصقات المناعية ل IBA-1. تكشف علامتان من علامات خيوط الخلايا النجمية الوسيطة ، فيمنتين ، الموضحة باللون الأحمر ، والبروتين الحمضي الليفي الدبقي ، الموضح باللون الأخضر ، عن تغيرات في مورفولوجيا الخلايا النجمية للمادة البيضاء بعد السكتة الدماغية. يسمح الحقن المشترك لأمين ديكستران الفلورسنت في وقت تحريض السكتة الدماغية بتحديد الخلايا العصبية الفردية ذات المحاور المصابة بالسكتة الدماغية.

تحدث معظم الملصقات في المحاور داخل الطبقة الخامسة والسادسة من الخلايا العصبية في القشرة الحسية الحركية الأولية التي تغطي السكتة الدماغية. تمثل هذه الصورة سبعة أيام بعد السكتة الدماغية. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في 45 دقيقة ، إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنتاج ضربة المادة البيضاء البؤرية في الماوس ، وإعداد الدماغ لمجموعة متنوعة من المعالجة النهائية ، وهي مفيدة للإجابة على الأسئلة المهمة في السكتة الدماغية وإصلاح الأعصاب.