طريقة بسيطة لالآلي المرحلة الصلبة استخراج عينات المياه للتحليل المناعية من الملوثات الصغيرة

العام لطريقة تحضير العينات هذه هو التركيز المسبق للملوثات العضوية الصغيرة من عينات المياه ، بطريقة سهلة الاستخدام وفعالة من حيث التكلفة ومؤتمتة. يمكن أن تحل هذه الطريقة محل عمليات SPE القياسية عند دراسة تلوث عينات المياه باستخدام طرق الكشف المناعي ، مثل المقايسات المناعية لألواح الآبار أو أجهزة الاستشعار الحيوية. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أن إجراء SPE مؤتمت في حين أن بصمة وتكلفة الأدوات منخفضة مقارنة بالأساليب التقليدية.

بالإضافة إلى ذلك ، يتطابق أداء عملية التخصيب مع متطلبات تحليل المقايسات المناعية من حيث محتوى المذيبات المنخفض وكفاءة التركيز المسبق. أولا ، قم بتصفية عينة ماء 100 ملم باستخدام مرشح بحجم صب نقطتين ميكرومتر. ضع العينة المفلترة في زجاجة زجاجية بخيط GL 45.

قم بإعداد 300 ميكرولتر من المادة المزيلة عن طريق تخفيف الميثانول في الماء منزوع الأيونات ، إلى حجم 50 بالمائة في أنبوب محكم. بعد ذلك ، قم بإعداد معلق 20 ملليغرام لكل مليلتر من جزيئات ماصة السيليكا أوكتاديسيل عن طريق إضافة 1 ، 600 ميكرولتر من الميثانول متبوعا ب 400 ميكرولتر من الماء منزوع الأيونات إلى 40 ملليغرام من المواد الماصة العكسية في زجاج حقير. أغلق الغطاء بإحكام ، وحرك بخلاط دوامة.

ضع غشاء نايلون بحجم المسام 11 ميكرومتر على طبقة مزدوجة من الأنسجة المضادة للغبار. قطع جزأين صغيرين في الغشاء بكمة قطرها ثلاثة ملليمترات. بعد ذلك ، أمسك الأغشية الصغيرة بملقط مرشح مسطح ، وضعه على جانب واحد من العمود.

بعد ذلك ، قم بربط الموصل السفلي المسطح بالأنبوب وشده. ثم ارسم سهما على جسم العمود ، مشيرا إلى النهاية حيث تم وضع الغشاء. في هذه المرحلة ، قم بتأمين العمود على الحامل مع توجيه السهم نحو الأسفل.

قم بتوصيل حقنة فارغة سعة 10 ملليلتر يمكن التخلص منها بنهاية أنبوب العمود باستخدام موصلات القفل السفلية. قم بتحريك التعليق الماص باستخدام الخلاط الدوامي ، وقم بتحريك الماصة بسرعة 100 ميكرولتر في وسط العمود. أثناء الحقن ، قم بشفط المحلول الماصة برفق عبر الغشاء باستخدام المحقنة باليد الأخرى.

يعد إعداد عمود SPE مهما جدا. عليك التأكد من شفط المحلول بشكل صحيح من خلال الغشاء باستخدام المحقنة أثناء حقن تعليق الجسيمات في العمود. خلاف ذلك ، لن يتم تعبئة الجسيمات بكثافة.

كرر العملية السابقة مرتين أخريين ، عن طريق تحريك تعليق المخزون بين جميع خطوات سحب العينة ، لضمان التعليق المتجانس للجزيئات في المحلول. بعد تحميل المعلق بالكامل وتجفيفه عن طريق الشفط باستخدام حقنة ، احتفظ بالحقنة في موضعها وضع غشاء النايلون الثاني في الأعلى باستخدام الملقط باليد الأخرى. ثم قم بربط الموصل الثاني بأنبوب وتخلص من المحقنة.

في هذه المرحلة ، قم بإحكام ربط العمود الموجود على جهاز SPE باستخدام موصلات القفل السفلية. قم بتوصيل الزجاجة التي تحتوي على العينة بالجهاز عن طريق شد غطاء الأمان GL 45 المرفق عليها. قم بتحميل 200 ميكرولتر من مادة الميلونت في خزان المزيح.

ثم قم بتحميل 800 ميكرولتر من الماء منزوع الأيونات في خزان التخفيف. تحقق من أن منظم الضغط في الوضع المغلق عن طريق تدويره في اتجاه عقارب الساعة حتى يتعذر المزيد من الحركة. بعد تشغيل النموذج الأولي ، أدخل القيم 580 ل pset و 30 ل delta pset.

لضبط منظم الضغط ، ابدأ تشغيل المضخة. بعد ذلك ، قم بتدوير منظم الضغط يدويا حتى تصبح القيمة المقروءة للبريج أقل شأنا ولكن قريبة من 320 ملليبار. بعد إيقاف المضخة ، ابدأ إجراء SPE بالضغط على بدء التشغيل في زاوية الوضع الآلي.

بمجرد اكتمال إجراء SPE ، أغلق العينة الصغيرة وخزنها عند أربع إلى خمس درجات مئوية في الظلام ، حتى تحليل ELISA. لتنظيف النظام ، قم بإعداد محلول 10 مليلتر من 70 في المائة من الميثانول من حيث الحجم في زجاجة زجاجية بخيط GL 45. افصل عمود SPE ، وقم بتوصيل الأنبوب بالموصلات.

في الوضع التلقائي، حدد ملف التنظيف وابدأ تشغيله بنفس إعدادات الضغط المستخدمة سابقا ل pset و delta pset و preg. تم تقييم قابلية استنساخ عبوات المواد الماصة عن طريق تجفيف ووزن المادة الماصة الماصة في الزجاج. تم اختبار قابلية استنساخ وقت الحقن لعينات 100 ملليلتر.

تم تحديد تركيزات العينات الأولية والمركزة مسبقا باستخدام مجموعة ELISA تجارية مكونة من 17 بيتا استراديول. يتضح من منحنيات المعايرة أن نسبة الميثانول من العينة المخصبة لا تؤثر على حساسية المقايسة المناعية. تم حساب استرداد 128 ، زائد أو ناقص 22 في المائة ، و 107 زائد أو ناقص ستة في المائة ، للمياه منزوعة الأيونات ومياه البحر الاصطناعية على التوالي.

بمجرد إتقانها ، يمكن إعداد عمود SPE في أقل من خمس دقائق ، إذا تم إجراؤه بشكل صحيح. يمكن إكمال إجراء SPE بأكمله في أقل من ساعة واحدة. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال العلوم البيئية لاستكشاف تطوير طرق الكشف عن المناعة لمراقبة الملوثات العضوية الصغيرة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير عينات المياه باستخدام أداتنا الآلية الفعالة من حيث التكلفة لتحليل الملوثات عن طريق المقايسات المناعية. لا تنس أن العمل مع الملوثات العضوية والمذيبات يمكن أن يكون خطيرا ، ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء القفازات المناسبة ونظارات واقية عند إجراء هذه العملية.