Name: ضبط عمود مقطع التدفق الموازي وتمكين الكشف المضاعفة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: تعلم ضبط أعمدة كروماتوغرافيا التدفق المتوازي المقسمة لتمكين الكشف المتعدد في العينات المعقدة. تُسرّع هذه التقنية تحليل المواد الكيميائية والحيوية النشطة في المخاليط مثل القهوة والنبيذ.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذا العمل من قبل UWS و ThermoFisher Scientific. يقر أحد المؤلفين (DK) بحصوله على جائزة الدراسات العليا الأسترالية.

ملاحظة: هذا البروتوكول يحتوي على إرشادات حول كيفية استخدام عمود PSF على نظام HPLC إلى جانب كشف متعددة للكشف عن المضاعفة. لقد كتب البروتوكول على افتراض أن القارئ لديه المعرفة الأساسية والخبرة في اللوني ومختلف طرق الكشف HPLC. تنبيه: يرجى الرجوع إلى ورقة بيانات سلامة المواد (MSDS) لجميع المواد والكواشف قبل الاستخدام (أي، MSDS للميثانول). ضمان استخدام جميع ممارسات السلامة المناسبة عند التعامل مع المذيبات وعالية الأداء اللوني السائل (HPLC) شاطف. ضمان الاستخدام الملائم للضوابط هندسية من HPLC والتوازن وكشف تحليلي الأجهزة، وضمان استخدام معدات الوقاية الشخصية (النظارات الواقية، والقفازات، معطف المختبر، وطول السراويل الكاملة، وأحذية مغلقة اصبع القدم). 1. إعداد صك من HPLC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الصك HPLC مع الماء عالى النقاء (على سبيل المثال، 100٪ ملي-Q الماء) للينه A و 100٪ الميثانول لخط B كما الطور المتحرك وتطهير المضخات وفقا لمتطلبات الشركة المصنعة. إذا كان أحد أجهزة الكشف المستخدمة غير MS، كما هو الحال هنا، إضافة حمض الفورميك بنسبة 0.1٪ لمرحلتي النقالة A و B. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد HPLC مكونات وأجهزة الكشف عن دور فعال كما هو موضح في الشكل (2). وهذا يتطلب وضع مناسب للكشف عن النسبية إلى العمود وذلك لتقليل حجم القتلى بين كشف والعمود. المرونة في تكوين النظام HPLC أمر مرغوب فيه. </li></ol> 2. الإعداد للأشعة فوق البنفسجية فيس وكشف MS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين كاشف الأشعة فوق البنفسجية فيس على الطول الموجي المطلوب تعتمد على عينة من الفائدة (على سبيل المثال، 280 نانومتر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين كاشف MS في وضع إيجابي لإجمالي عدد ايون (TIC) التحليل باستخدام مسح كامل طريقة الكشف. أيضا ضبط المعلمات MS التالية بناء على ذلك: درجة الحرارة المرذاذ 500 درجة مئوية، ودرجة الحرارة الشعرية 350 ° C، الغاز غمد تعيين بمعدل 60 وحدة، وتدفق الغاز المساعد40 واكتساح تدفق الغاز في 5 وحدات، ورذاذ الجهد 3،5 كيلو فولت. ويمكن تعديل هذه الإعدادات في وقت لاحق لمتطلبات المستخدم محددة تعتمد على العينة التي تم تحليلها. </li></ol> 3. إعداد 2،2-ثنائي الفينيل-1-picrylhydrazyl الراديكالي (DPPH •) الكاشف الإعداد من DPPH • للكشف عن نظام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن 25 ملغ من DPPH • وتذوب في 250 مل من الميثانول في قارورة حجمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 250 ميكرولتر من حمض الفورميك إلى DPPH • كاشف. تغطية قارورة في احباط لمنع التعرض للضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يصوتن القارورة التي تحتوي على DPPH • كاشف لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير DPPH • مضخة مع استعداد DPPH • كاشف وفقا لمتطلبات الشركة الصانعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد نظام DPPH • وفقا لشكل 2 عن طريق ربط خط ضخ إلى مدخل لT-قطعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق 100 ميكرولتر فائف رد الفعل إلى thمنفذ (ه) من T-قطعة ونعلق على الطرف الآخر من لفائف رد فعل على كاشف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غلف لفائف التفاعل في سخان العمود وضبط درجة الحرارة سخان عمود إلى 60 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين DPPH • الأشعة فوق البنفسجية فيس كاشف إلى 520 نانومتر. </li></ol> 4. الإعداد لPSF العمود <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط مدخل العمود PSF في الصك HPLC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط ميناء المركزي للكشف عن مرض التصلب العصبي المتعدد، وذلك باستخدام طول 15 سم من 0.13 ملم معرف الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاتصال منفذ الطرفية للكشف عن الأشعة فوق البنفسجية فيس باستخدام طول 15 سم من 0.13 ملم معرف الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط ميناء هامشية أخرى إلى T-قطعة من نظام الكشف DPPH • استخدام طول 15 سم من 0.13 ملم معرف الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منع ميناء الطرفية غير المستخدمة باستخدام سدادة العمود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل معدل تدفق مضخة HPLC إلى 1 مل دقيقة -1 في 100٪ خط B -٪ الميثانول 100 (حمض الفورميك 0.1٪). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتوازن العمود مع الميثانول بنسبة 100٪ المحمول فتاهبورصة عمان لمدة 20 دقيقة للحصول على 4.6 ملم × 250 ملم معرف طول العمود. يتم تحجيم هذه المرة وفقا لأبعاد الأعمدة الأخرى يمكن للمستخدم توظيف. </li></ol> 5. ضبط العمود PSF لكشف المضاعفة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس كتلة اثنين على الأقل من السفن جمع فارغة (واحد للمنفذ توصيل للكشف عن الأشعة فوق البنفسجية فيس واحد للDPPH • كاشف) باستخدام الميزان التحليلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الطور المتحرك من الأشعة فوق البنفسجية فيس وDPPH • الموانئ إلى سفينتين منفصلة، ​​وزنه قبل جمع (5،1). تسجيل فترة من الزمن لجمع. جمع ما لا يقل عن 500 ملغ من المذيبات في كل سفينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن الأوعية جمع وتحديد كتلة الطور المتحرك. ونظرا لكثافة الميثانول هو 0.791 ز مل -1، وتحديد حجم الطور المتحرك التي تم جمعها من كل منفذ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من قبل الفرق، وهذا هو، مضخة الاسمية مجموعة معدل تدفق ناقص معدل التدفق من خلال DPPH و• والأشعة فوق البنفسجية فيس كاشفالموانئ تدفق ص، وتحديد معدل التدفق للكشف عن مرض التصلب العصبي المتعدد. التعبير عن كل نسبة تدفق كنسبة مئوية من إجمالي التدفق. ملاحظة: من الناحية المثالية، ونسب التدفق هي: إلى MS هو 18٪ من معدل التدفق الكلي، إلى الأشعة فوق البنفسجية فيس 22٪، إلى DPPH • كشف 60٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إن لم يكن، وضبط نسب التدفق من خلال تغيير الضغط مرة أخرى على كشف الأشعة فوق البنفسجية فيس. على سبيل المثال، إذا كان تدفق للأشعة فوق البنفسجية فيس مرتفع جدا، وانخفاض نسبة بإضافة إضافة المادة 15 سم من 0.13 ملم معرف أنابيب إلى منفذ للكشف عن الأشعة فوق البنفسجية فيس. ثم كرر الخطوات 5،1-5،5. </li></ol> 6. شروط الإعداد النهائية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط معدل تدفق DPPH • مضخة كاشف لنفس معدل تدفق الخروج من الميناء منفذا متصلا DPPH • كاشف. ملاحظة: العمود PSF المضاعفة مع UV-فيس، DPPH • وMS هو الآن على استعداد لتحليلها. </li></ol>

<ol><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+a+new+concept+chromatography+column%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">The design of a new concept chromatography column.</a> Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+separation+performance+using+a+new+column+technology%3A+Parallel+segmented+outlet+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Enhanced separation performance using a new column technology: Parallel segmented outlet flow.</a> J. Chromatogr, A. 1232, 47-51 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+flow+management+in+preparative+chromatographic+separations%3A+A+preliminary+investigation+into+enhanced+separation+using+a+curtain+flow+inlet+fitting+and+segmented+flow+outlet%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Active flow management in preparative chromatographic separations: A preliminary investigation into enhanced separation using a curtain flow inlet fitting and segmented flow outlet.</a> 35 (3), 410-415 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradient+elution+chromatography+with+segmented+parallel+flow+column+technology%3A+A+study+on+4.6mm+analytical+scale+columns%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Gradient elution chromatography with segmented parallel flow column technology: A study on 4.6mm analytical scale columns.</a> J. Chromatogr., A. 1270, 204-211 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+HPLC+separation+performance+using+parallel+segmented+flow+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving HPLC separation performance using parallel segmented flow chromatography.</a> Microchem. J. 111, 3-7 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Ritchie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmented+flow+and+curtain+flow+chromatography%3A+Overcoming+the+wall+effect+and+heterogeneous+bed+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Segmented flow and curtain flow chromatography: Overcoming the wall effect and heterogeneous bed structures.</a> J. Chromatogr, A. 1335, 122-135 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+active+flow+technology+HPLC+columns+as+a+platform+for+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Evaluating active flow technology HPLC columns as a platform for multiplexed detection.</a> Microchem. J. 110, 473-479 (2013).</li>
<li>Camenzuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+outlet+flow+high+performance+liquid+chromatography+with+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented outlet flow high performance liquid chromatography with multiplexed detection.</a> Anal. Chim. Acta. 803, 154-159 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Camenzuli, M., Pereira, L., Ritchie, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns%3A+Conventional+analytical+scale+column+formats+presenting+as+a+%27virtual%27+narrow+bore+column%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns: Conventional analytical scale column formats presenting as a 'virtual' narrow bore column.</a> J. Chromatogr., A. 1262, 64-69 (2012).</li>
<li>Soliven, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+performance+of+narrow-bore+HPLC+columns+using+active+flow+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving the performance of narrow-bore HPLC columns using active flow technology.</a> Microchem. J. 116, 230-234 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection%3A+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

وتنطوي هذه الدراسة توصيف والتنميط من القهوة باستخدام HPLC مع الكشف عن المضاعفة توظف تدفق مجزأة (PSF) العمود المتوازي. المضاعفة HPLC باستخدام أعمدة PSF تمكن من توصيف وتحديد الكيانات الكيميائية الأساسية عن طريق الحد من تعقيد البيانات من عينة حين الحصول على قدر أكبر من المعلومات جزيء محددة داخل جزء من الوقت الذي يستغرقه باستخدام عمليات متعددة الكشف التقليدية. العمود PSF يسمح ليس فقط منبرا للكشف المضاعفة، ولكن أيضا على مزيج من الاثنين معا للكشف عن مدمرة وغير مدمرة، دون حجم القتلى إضاف...

أعمدة تكنولوجيا تدفق النشطة تم تطوير تكنولوجيا تدفق النشطة (AFT) الأعمدة اللوني مؤخرا للتغلب على عدم الكفاءة في فصل المرتبطة تدفق التجانس 1-6، وكذلك لتمكين الكشف المضاعفة. في هذا بعينه نحن الاتصالات بالتفصيل عملية التشغيلية للبالتوازي مجزأة تدفق (PSF) عمود مع الكشف عن المضاعفة. المزايا الوظيفية الرئيسية للعمود PSF هي: (1) يتم عزل التدفق من المنطقة الوسطى شعاعي من السرير العمود من المنطقة الطرفية أو جدار التدفق، (2) حجم الطور المتحرك التي يجب معالجتها بواسطة الكشف يتم تقليل المصدر، ويمكن المضاعفة مصادر (3) كشف لتوسيع المعلومات عينة من دون غرس التأخير كشف عبر كل عملية الكشف، أو في وقت لاحق يستلزم تقسيم عمود آخر تيار تدفق 7،8. السمة الرئيسية في تصميم العمود PSF تمكن لdvantage الكشف المضاعفة هي منفذ التجمع المناسب وفريت رواية الشكل 1 هو صورة من العمود الخلف مقارنة العمود التقليدي. من المهم أن نفهم أن عملية تقسيم الحصول عليها باستخدام أعمدة تدفق مجزأة موازية ليست هي نفسها كما تدفق تيار عمود آخر تقسيم. في تيار تدفق عمود آخر تقسيم كامل الفرقة عينة من حافة الرائدة إلى الحدود القصوى من الذيل وعينات بالتساوي (أي محوريا)، وبالتالي، كل تيار تدفق يساوي فيما يتعلق الكفاءة وحساسية. حجم حساسية مما يجري مقسوما على عدد الانشقاقات. في قوات الأمن الفلسطينية، ومع ذلك، فإن العينات عملية تقسيم الفرقة شعاعيا، وليس محوريا. على هذا النحو، وعينات الساحلية بوسط ذروة قمة - المنطقة الأكثر تركيزا من الذروة. وهكذا، فإن حساسية هنا هي أعلى كما لا تضعف الذروة التي كتبها المنطقة منتشر المخلفات. عينة يبلغ حجمه من الموانئ الطرفية ليست فعالة كما هو الحال في سنترامنطقة لتر، ولكن، منذ يتم أخذ عينات الفرقة شعاعيا، وليس محوريا، عرض ذروة أضيق مما هو الحال بالنسبة لعملية أخذ العينات التي تقسم الذروة في الاتجاه المحوري، أي انشقاق العمود آخر. وبالتالي لا يتم تقليل حساسية مع كاشف تعتمد التركيز. في العمود قوات الأمن الفلسطينية، ويشمل تركيب منفذ منافذ الخروج متعددة وعلى داخل هذه الغاية المناسب ويقع هناك فريت الحلقي. الجزء الداخلي من هذه القنوات فريت الحلقي تتدفق من عمود شعاعي عبر منفذ ميناء المركزي، في حين أن الجزء شعاعي الخارجي للقنوات منفذ فريت تتدفق من العمود عن طريق الموانئ تدفق منفذ الطرفية أو منطقة الجدار. يتم فصل الأجزاء الداخلية والخارجية للفريت منفذ بجدار كتيمة تمنع تدفق المتبادل بين هذه المناطق تدفق 2. ونتيجة لهذا التصميم يتم فصل التيار تدفق شعاعي المركزي من خلال السرير عمود من خصوصيات تدفق منطقة الجداربيئة تطوير متكاملة العمود. الجزء النسبي للتدفق من هاتين المنطقتين يمكن أن تختلف على أي نسبة المطلوبة تقريبا من خلال إدارة الضغط من أجل تحسين مختلف الجوانب الفنية للتكنولوجيا العمود، مثل كفاءة الانفصال أو حساسية الكشف. في جوهرها، وهذا التصميم وتحدد بشكل فعال ضمن أكبر العمود شكل عمود &quot;الظاهري&quot;، التي يبلغ قطرها الداخلي الضيق، وبالتالي وظائف العمود كعمود الجدار أقل صحيح، والتغلب على عمود التجانس السرير وآثار الجدار 9،10. الفوائد الرئيسية من الأعمدة PSF هي التحسينات في كفاءة العمود، والحد من تجهيز المذيبات لمصدر كشف (ق) وتمكين الكشف المضاعفة. ومع ذلك، ميزة إضافية هي أنه منذ تتم إزالة المخلفات والمناطق المواجه من أي فرقة من شطف العام ملف المذاب في شطف أو الكشف موجود في أعلى تركيز من لولاها ملاحظتها لنفس الصورةolute الحقن وتحميل تركيز على عمود التقليدية، اعتمادا على نسبة تجزئة المستخدمة. ونتيجة لذلك كثيرا ما لوحظ هناك مكاسب في كثافة إشارة للفصل أجريت على الأعمدة PSF 2. في الواقع، إذا تم تعديل نسبة تجزئة مثل أن 25٪ من مخارج تدفق من كل من منافذ خروج أربعة، وشدة إشارة إلى أن لوحظ استخدام الأشعة فوق البنفسجية (UV) كشف وتبين عمليا بالضبط نفس كثافة إشارة تظهر بشكل واضح باستخدام التقليدية العمود حيث كامل (100٪) من الطور المتحرك ويتم تحليل 7. وعلاوة على ذلك، ضبط نسبة منفذ بين المناطق تدفق الوسطى والجدار يسمح كفاءة العمود على الوجه الأمثل. لاحظت مكاسب في الكفاءة العمود باستخدام أعمدة AFT لا يمكن القول أن قيمة واحدة، لأن هذه المكاسب الكفاءة هي وظيفة من ثلاثة عوامل هي: (1) معدل التدفق، (2) نسبة تجزئة، و (3) عامل الاحتفاظ المذاب . ومع ذلك، وتحقيق مكاسب في الكفاءة مقارنة التحويلويلاحظ دائما تقريبا الأعمدة entional، وأحيانا هذه المكاسب أكثر من 100٪ في عدد من لوحات النظرية 1،2. القدرة على ضبط نسبة تجزئة يسمح المحلل لتكييف فعال قطر عمود &quot;الظاهري&quot;، وهذا هو عامل مهم في ما يتعلق بعملية الكشف. على سبيل المثال، يتم تأسيس 2.1 مم القطر الداخلي (ID) عمود الظاهري من 4.6 ملم عمود معرف البدني عندما تكون نسبة تجزئة هي 21٪ من المرحلة المتنقلة يبلغ حجمه من شعاعي ميناء الخروج المركزي. في ظل هذه الظروف، ينفذ الظاهري 2.1 ملم عمود الهوية مع الكفاءة التي قد تكون أكبر أكثر من 70٪ من التقليدية 2.1 ملم عمود الهوية، اعتمادا على معدل التدفق، والمذاب الاحتفاظ عامل 10. تصميم عمود PSF الحالي الذي يستخدم للكشف عن المضاعفة يشتمل على 4 منافذ منفذ المناسب، ولكن يمكن تركيبها على عمود مع 2-الميناء أيضا تركيب النهاية، ومع ذلك، وهذا يحد كشف رس اثنين فقط من كشف. العملية الأساسية من هذه الأعمدة، مع ذلك، في نفسه، إلا يمكن أن يقترن أن أربعة كشف في وقت واحد إلى 4 منافذ منفذ العمود PSF توسيع نطاق الكشف المضاعفة. وبصرف النظر عن عمود أنابيب الضام قبل وبعد، ومتطلبات إضافية الوحيدة التي تشغل عمود PSF غير الأنابيب التي يمكن توصيلها إلى الموانئ منفذ الطرفية، والوسائل التي يمكن قياس كمية الطور المتحرك مرورا كل أنبوب، عادة إما قياس كتلة أو القياس الحجمي. لسهولة ضبط، ويجب أن يكون القطر الداخلي لجميع أنابيب تدفق مخرج نفسه. ثم اختلفت نسبة التدفق بين موانئ الخروج المركزية الطرفية وشعاعي من خلال استخدام إدارة الضغط، وذلك ببساطة عن طريق تغيير طول الأنبوب الموجود على منفذ الطرفية المناسب، أو طول كاشف آخر الأنابيب على شعاعي الميناء منفذا المركزي. كشف المضاعفة عن طريق أعمدة PSF </stroنانوغرام&gt; ميزة هامة من الأعمدة PSF هي أن كل من منافذ الخروج منفذ يمكن ان تكون مرتبطة مباشرة إلى المصدر الكشف، وبالتالي تمكين الكشف المضاعفة. في نظام الكشف مصممة تصميما جيدا لتحليل واحد مع الكشف عن المضاعفة يمكن أن توفر معلومات كبيرة في ما يخص طبيعة المكونات داخل العينة. الأهم من ذلك، يمكن إجراء الاختبارات المدمرة وغير المدمرة في نفس الوقت بالضبط، دون تأخير الكشف. وهذا يسمح للاحالة المطلق، على سبيل المثال، المواد المضادة للتأكسد باستخدام DPPH • كاشف، مع مكونات احظت أن أزل مع الأشعة فوق البنفسجية و / أو قياس الطيف الكتلي (MS) ردود الكشف عن 7،11. ولذلك، يمكن تشغيل أربعة أجهزة كشف مستقلة في وقت واحد مع الأجزاء المناسبة من تدفق الموجهة إلى كل كاشف عن طريق أي من منافذ مأخذ الأربعة. منذ تدفق من خلال هذه المنافذ يمكن تعديلها بسهولة كمية من المذاب الوصول إلى أي من أجهزة الكشف يمكن تعديلها لتناسبحساسية مصدر كاشف معين. وتجدر الإشارة إلى أنه، مع ذلك، أن الهجرة المذاب الأكثر فعالية لوحظ من خلال شعاعي الميناء منفذا المركزي. كل من الموانئ الطرفية تقديم كفاءة الفصل ما يعادلها، والتي عند تعيينها إلى 25٪ من خلال كل ميناء، ليست سوى أقل قليلا كفاءة من عمود التقليدي. على هذا النحو، فمن المهم أن يتم تعيين كاشف الكمي لتحليل عينة من شعاعي ميناء الخروج المركزي. عند إعداد عمود PSF لغرض الكشف عن الإرسال المتعدد هناك عدد من الاعتبارات التي يجب القيام بها لتحقيق نتائج فعالة وعالية الجودة؛ هذا هو أبعاد أنبوب لكل منفذ، واختيار أي منفذ لنوع من كشف وضبط التدفق. الأبعاد أنبوب لكل منفذ في اللوني طول عمود آخر أنابيب يلعب دورا حاسما في كفاءة وأداء الانفصال. وكالة مكافحة المخدرات كبيرةود الحجم نتيجة طويلة أو واسعة أنابيب معرف من منفذ عامود لكشف يؤدي إلى فقدان الكفاءة والقرار، وحساسية. وبالتالي، يجب أن تستخدم أبعاد أنابيب المناسبة عند إعداد العمود PSF لتحقيق أقصى قدر من إمكانات في توفير الفصل كفاءة وفي الوقت ذاته توفير فوائد مضاعفة. الميناء لالكاشف الرقم 2 هو التوضيح لإعداد سبيل المثال الكشف المضاعفة (البنفسجية المرئية (U فيس)، مطياف الكتلة (MS) و2،2-ثنائي-1-picrylhydrazyl (DPPH •) كشف). ويبين الرسم التوضيحي يتم إرفاق ميناء المركزي للكشف عن مرض التصلب العصبي المتعدد، في حين DPPH و• ويتم إرفاق كشف عن الأشعة فوق البنفسجية فيس إلى الموانئ الطرفية. منذ MS هو كاشف الأكثر حساسية من الثلاثة، وتدفق للكشف عن هذا كان موجها من ميناء منفذ المركزي. كما DPPH • الكشف غير انتقائية لpresencوجهت ه من المواد المضادة للاكسدة، وأقل حساسية والأكثر تسامحا لفرقة توسيع، تتدفق إلى هذا كاشف من ميناء الطرفية. كان للأشعة فوق البنفسجية فيس كاشف &#39;عام&#39; الثانوية، حتى تتدفق إلى هذا كاشف كان موجها من ميناء الطرفية الثاني. ضبط تدفق مرة واحدة وقد تم إرفاق الأنبوب المناسب من ميناء إلى كشف، وتدفق الخروج من كل من كشف يمكن تعديلها لالمبلغ المطلوب. وهناك طريقة بسيطة لقياس كمية تدفق الخروج من كل كاشف هو لوزن كمية من المرحلة المتنقلة التي elutes من خلال كل ميناء على مدى فترة معينة من الزمن. وهكذا يمكن تحديد تدفق مئوية، ونسب التدفق يمكن تعديلها من قبل أي تقصير أو إطالة الأنابيب التي تعلق على خط منفذ على كشف وفقا لذلك لتتناسب مع متطلبات كشف في الاختيار. كشف المختلفة لها متطلبات مختلفة من التدفق، على سبيل المثال، الخلية تدفقكاشف مضان (FLD) لا تتدفق نسبة محدودة، ولكن يجب توخي الحذر لتجنب الضغط الزائد للخلايا التدفق. وبالتالي السيطرة على تدفق من خلال FLD عادة ما يتحقق عن طريق ضبط هبوط الضغط عبر أجهزة الكشف الأخرى وما تبقى من تدفق ثم يمر عبر الكبد الدهني. وكشف عن أن تراعي كمية تدفق التي يتم تسليمها هو MS. عموما، يمكن الطيف الحالية كتلة الراقية معالجة بسهولة في جميع أنحاء 1-1،5 مل / دقيقة من الطور المتحرك المائية باعتدال. فوق هذا معدل التدفق والفيضانات من مصدر قد جعل MS غير صالحة للعمل. ومع ذلك، استفاد حساسية الكشف في معظم الطيف الجماهيري باستخدام انخفاض معدلات تدفق؛ وبالتالي قدرات تقسيم تدفق PSF مفيدة للغاية للتطبيقات التي تنطوي على كشف MS. ويمكن استخدام عمود ارتفاع معدلات التدفق الحجمي، ولكن مع الأحمال انخفاض حجم نقلها إلى كشف MS. ضبط تدفق للكشف عن مرض التصلب العصبي المتعدد، ولكن يجب أن يتم عن طريق ضبط هبوط الضغط مسبق للكشف MS، MS بدلا من آخر. هنا، واستخدام أنابيب ضيق تجويف (0.1 ملم معرف) مفيد جدا، حيث أن الضغط يمكن تعديلها بسهولة دون إضافة حجم القتلى غير مناسب. اعتمادا على نوع من كاشف تعديل نسبة التقسيم يمكن أن يتم إما قبل أو بعد كشف. إذا كاشف غير المدمرة، مثل استخدام الأشعة فوق البنفسجية فيس، سيتم قياس نسبة تدفق وضبطها للكشف عن آخر. إذا تم استخدام جهاز كشف المدمرة واحد في متعدد إعداد يتم تحديد نسبة التدفق عن طريق حساب الوراء فيما يتعلق أخرى نسب تدفق الميناء. إذا تم استخدام جهاز الكشف عن أساس كاشف مثل DPPH •، يتم قياس نسبة تدفق للكشف عن آخر دون إضافة كاشف. وإذا تم استخدام اثنين أو أكثر تدميرا للكشف عن، ثم يتم قياس نسبة تدفق ما قبل كاشف. الأنظمة التي قد تتطلب أجهزة إضافية، مثل DPPH • الكشف، وسوف يكون نظام الضغط الإضافي الذي قد يغير تدفقنسبة تعلق مرة واحدة لنظام الكشف. ولذلك، ينبغي إيلاء دراسة متأنية لضغوط النظام من كشف مدمرة، عند ضبط نسبة تدفق ما قبل كاشف. بغض النظر عن نسبة تدفق التي تم تعيينها من خلال أي من المنافذ، يجب الحصول على معلومات كمية عن طريق توحيد المناسب. مرة واحدة يتم تعيين نسب التدفق، ومع ذلك، فهي قوية، وأنها لا تتغير حتى في ظل ظروف شطف التدرج 7، ويهدف البروتوكول فيديو مفصل يرافق هذه المخطوطة لإظهار كيفية استخدام وتوليف أداء العمود PSF في وضع المضاعفة من الكشف.

<table><tbody><tr><td>أداة</td><td></td><td></td> HPLC <td>كاشفات متعددة من الاختيار للكشف عن تعدد الإرسالات. قد تتطلب أجهزة الكشف المختارة أجهزة إضافية ، < > على سبيل المثال ، مضخة.</td></tr>تدفق <tr><td>متوازي مجزأ HPLC عمود</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>لم يتم تعريفه</td><td>قريبا سيتم تسويقه</td></tr><tr><td>الميثانول</td><td>أي علامة تجارية</td><td></td><td>HPLC الصف</td></tr><tr><td>PEEK الأنابيب</td><td>أي علامة تجارية</td><td></td><td>أطوال مختلفة ومعرف.</td></tr><tr><td>سدادات الأعمدة</td><td>أي علامة تجارية</td><td></td><td>لحجب المنافذ الطرفية غير المستخدمة.</td></tr><tr><td>نظرة خاطفة أنبوب القاطع</td><td>أي علامة تجارية</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ميزان تحليلي</td><td>أي علامة تجارية</td><td></td><td></td></tr><tr><td>توقف ساعة</td><td>أي علامة تجارية</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eluent سفن تجميع</td> يمكن <td>استخدام أي علامة تجارية</td><td></td><td>1-2 مل قوارير عينة كأوعية تجميع مواد مائل</td></tr></tbody></table>

ضبط عمود مقطع التدفق الموازي وتمكين الكشف المضاعفة

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

تقنية التدفق النشط (AFT) هي شكل جديد من تقنيات الأعمدة التي تم تصميمها للتغلب على عدم تجانس التدفق لزيادة أداء الفصل من حيث الكفاءة والحساسية وتمكين الكشف متعدد الإرسال. يستخدم هذا الشكل من AFT عمود تدفق مجزأ متوازي (PSF). يتكون التركيب النهائي لمخرج عمود PSF من 2 أو 4 منافذ ، والتي يمكن تعدد الإرسال لتوصيل ما يصل إلى 4 كاشفات. لا يسمح عمود PSF بمنصة للكشف عن الإرسال المتعدد فحسب ، بل يسمح أيضا بمزيج من كل من أجهزة الكشف المدمرة وغير المدمرة ، بدون أنابيب إضافية ذات حجم ميت ، في وقت واحد. يمكن أيضا ضبط مقدار التدفق عبر كل منفذ من خلال إدارة الضغط ليناسب متطلبات كاشف (كاشفات) معين. لتحقيق الكشف المتعدد باستخدام عمود PSF ، هناك عدد من المعلمات التي يمكن التحكم فيها لضمان أداء الفصل الأمثل وجودة النتائج ؛ هذا هو أبعاد الأنبوب لكل منفذ ، واختيار المنفذ لكل نوع من أنواع الكاشف وتعديل التدفق. يهدف هذا البروتوكول إلى إظهار كيفية استخدام عمود PSF الذي يعمل في وضع اكتشاف متعدد الإرسال.

وأجري تحليل HPLC المضاعفة خارج باستخدام عمود الخلف في وضع PSF (الشكل 1)، وإعداد كما هو موضح في الشكل (2). يسمح هذا النوع من الإعداد عينة القهوة ليتم تحليلها في وقت واحد باستخدام الأشعة فوق البنفسجية فيس، DPPH • وMS في إجمالي عدد ايون (TIC) واسطة. المركبات من العينة القهوة التي ردت على DPPH • يمكن أن يتم مطابقتها بسهولة حتى أشعة فوق البنفسجية فيس وMS - الردود TIC على أساس المواءمة بين الوقت الاحتفاظ كما هو موضح في الشك...

هنا ، نقدم بروتوكولا لتشغيل وضبط أعمدة كروماتوغرافيا التدفق المجزأ المتوازي لتمكين الكشف عن الإرسال المتعدد.

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

الهدف العام من إجراء الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) هذا هو ضبط عمود تدفق مجزأ متوازي لتمكين الكشف المتعدد. تجيب هذه الطريقة على أسئلة رئيسية في مجالات الصحة والعافية، والعلوم البيئية، والطب الشرعي، وأي مجالات تتطلب تحليل عينات معقدة مثل الاكتشافات الحيوية. تتيح هذه التقنية إجراء تحليل شامل للعينة مع تقديم معلومات حول الطبيعة الكيميائية والنشاط الحيوي للمواد في المخاليط المعقدة.تسمح بروتوكولات الكشف المتعدد أيضًا بإجراء تحليل سريع. تُمكّن هذه الطريقة من تطوير استراتيجيات لتحديد البصمة الكيميائية للمزيجات المعقدة، مثل القهوة والنبيذ، مما يتيح للمصنعين التمييز بين منتجاتهم والأصناف المقلدة الرخيصة. في البداية، قد يبدو من غير المألوف عدم إرسال العينة بأكملها إلى كاشف واحد فقط لإجراء تحليل دقيق.ومع ذلك، فإن تركيز المادة المُحللة داخل كل تيار تدفق أعلى من إجمالي تيار التدفق في العمود التقليدي. للبدء، قم بتجهيز جهاز HPLC باستخدام ماء 100%UE وميثانول نقي كمراحل متحركة A وB على التوالي. في حال استخدام كاشف MS، أضف 0.1% حمض الفورميك إلى كلتا المرحلتين المتحركتين، ثم قم بتطهير مضخات HPLC وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة.قم بتجميع كواشف MS UV VS و DPPH وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. تأكد من ترتيب المكونات بشكل مناسب، بحيث يكون الحجم الميت في خطوط الكواشف في حدوده الدنيا.ثم اضبط الطول الموجي لكاشف UV VISTA على الطول الموجي الخاص بالعينة هنا. 280 نانومتر لكاشف MS. استخدم الوضع الموجب لتحليل إجمالي عدد الأيونات أو TIC مع طريقة الكشف بالمسح الكامل.قم بموازنة درجة الحرارة وتدفق الغاز في كاشف MS وفقاً للقيم التالية: درجة حرارة المبخر 500 °C، ودرجة حرارة الشعيرة 350 °C، وتدفق الغاز المساعد 40 وحدة، وتدفق غاز المسح 5 وحدات، ومعدل غاز الغلاف 60 وحدة، وجهد الرش 3.5 kV. ولتحضير كاشف جذور DPPH، ابدأ بإذابة 25 mg من جذور DPPH في 250 mL من الميثانول في دورق حجمي.أضف 250 µL من حمض الفورميك إلى المحلول وقم بمعالجته بالموجات فوق الصوتية لمدة 10 دقائق. بعد ذلك، قم بتغطية الدورق وبورق الألمنيوم لمنع التعرض للضوء. بعد ذلك، قم بتطهير المضخة باستخدام محلول جذور DPPH وفقاً لإرشادات الشركة المصنعة لإعداد نظام جذور DPPH.تأكد من تثبيت خط المضخة في مدخل قطعة T، ثم قم بتوصيل ملف التفاعل بسعة 100 µL بمخرج قطعة T. قم بتوصيل الكاشف بالطرف الآخر من غطاء حالة ملف التفاعل ENC، وملف التفاعل، ومسخن العمود. أخيرًا، اضبط كاشف UV V لجذور DPPH على 520 nm.لبناء عمود التدفق المجزأ المتوازي (PSF)، قم أولاً بتوصيل مدخل العمود بجهاز HPLC. بعد ذلك، استخدم قطعة من الأنابيب لتوصيل المنفذ المركزي بكاشف MS. استخدم أنابيب بنفس الأبعاد لتوصيل أحد منافذ العمود الطرفية بكاشف UV VS والآخر بالقطعة T الخاصة بنظام الكشف عن جذور DPPH.قم بسد أي منافذ طرفية غير مستخدمة باستخدام سدادات الأعمدة. اضبط معدل تدفق جهاز HPLC على 1 mL في الدقيقة من الطور المتحرك B بنسبة 100% لعمود قطره الداخلي 4.6 mm وطوله 250 mm. اترك النظام للوصول إلى حالة التوازن لمدة 20 دقيقة.لبدء ضبط نظام PSF، قم أولاً بالتصريف في أوعية تجميع فارغة. استخدم هذه القوارير لجمع الطور المتحرك بشكل منفصل من منافذ UV VS وDPPH radical. دوّن فترة زمنية التجميع واجمع 500 milligrams على الأقل من المذيب في كل وعاء.بعد ذلك، قم بوزن أوعية الجمع لتحديد كتلة الطور المتحرك، ثم اقسم الكتلة على كثافة الميثانول لحساب حجم الطور المتحرك الذي تم جمعه من كل منفذ. وأخيرًا، حدد معدل التدفق إلى كاشف MS واحسب نسب التدفق لجميع الكواشف كنسبة مئوية من إجمالي التدفق كما هو موضح في البروتوكول النصي. إذا انحرفت نسب التدفق بشكل كبير عن القيم المثالية، أضف أنابيب إضافية عند الضرورة لضبط الضغط العكسي، ثم كرر عملية الجمع والحساب.أخيرًا، اضبط معدل تدفق مضخة كاشف جذر DPPH ليتطابق مع معدل تدفق المنفذ الخارجي المتصل بالكاشف. تم إجراء تحليل HPLC متعدد على عينة من القهوة. تتيح القدرة على تسجيل كروماتوغرامات UV و MS لجذر DPPH في آن واحد مطابقة المركبات الموجودة في العينة والتي استجابت إيجابيًا لجذر DPPH بسهولة مع بيانات UV.وبناءً على محاذاة زمن الاستبقاء للاستجابات الناتجة عن مطياف الكتلة (MS)، حيث تم تسجيل الكتلة الجزيئية للقمة عند ظهور استجابة إيجابية من كاشف التيار الأيوني الكلي (TIC) لمطياف الكتلة (MSS). وتتيح سهولة مطابقة القمم بين عمليات الكشف المختلفة شكلاً سريعاً وأكثر كفاءة من الفرز والتوصيف لعينة معقدة مثل القهوة. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن إعدادها في غضون ساعة واحدة تقريباً وتصبح جاهزة لتحليل العينة باتباع هذا الإجراء. كما يمكن استخدام كاشفات أخرى مثل كاشف معامل الانكسار والفلورة، والكشف القائم على التفاعلات الكيميائية مثل التلألؤ الكيميائي، وذلك للحصول على معلومات إضافية عن العينة.بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تدرك أهمية عمليات الكشف متعددة الإرسال (multiplexing) لتحقيق فهم أعمق للعينة المعقدة. علاوة على ذلك، يعد الكشف المتعدد باستخدام أعمدة التدفق المجزأة المتوازية طريقة فعالة للغاية لإجراء الاستكشاف الحيوي.

tuning-parallel-segmented-flow-column-enabling-multiplexed

Research

JoVE Journal

Chemistry

الكيمياء

ويقدم وسيلة لتحديد الآلية المناسبة اللوني تفاعل مسعور (HIC) وسائل الاعلام لاستخدامها في عملية تنقية البروتين. أسلوب يستخدم لاللوني السائل المتوسطة بما في ذلك الضغط نظام مزج العازلة الآلي، وحقن الديناميكية حلقة العينة، واختيار عمود متسلسلة، وتحليل متعدد الطول الموجي، وجمع الانقسام شطافة الكسر.

آلية التفاعل اللوني مسعور اختيار عمود للاستخدام في تنقية البروتين

يتم تقديم بروتوكول لاستخدام أعمدة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء لتدفق التفاعل للطرق التي تستخدم اشتقاق العمود اللاحق (PCD).

آخر العمود اشتقاق عن طريق رد الفعل أعمدة تدفق عالية الأداء اللوني السائل

هنا، نقدم بروتوكولا لتشغيل وتحسين عمود تقنية التدفق النشط (AFT) في وضع تدفق الستارة (CF) لتحسين أداء الفصل.

الستار العمود تدفق: تحسين الكفاءة والحساسية

يتم تقديم بروتوكول سريع للهضم المحلل للبروتين مع مفاعل دقيق مدمج للتدفق الداخلي مقترن بمطياف كتلة تأين الرش الكهربائي (ESI). يتم وصف تصنيع المفاعل الصغير والإعداد التجريبي وعملية الحصول على البيانات.

سريع المعالجة الأنزيمية من البروتينات للكشف عن مرض التصلب العصبي المتعدد مع Microreactor التدفق من خلال

عادة ما يتضمن الكشف عن التألق متعدد الألوان &lt; فئة = 'jove_content '&gt; متعدد الألوان في الموائع الدقيقة للقطرات أنظمة الكشف الضخمة والمعقدة القائمة على المجهر الفائي فلوري. نصف هنا مخطط كشف متعدد الألوان مضغوط ومعياري يستخدم مجموعة من الألياف الضوئية لتشفير البيانات متعددة الألوان التي تم جمعها مؤقتا بواسطة كاشف ضوئي واحد.

متعدد الألوان كشف الإسفار عن القطرة على microfluidics عن طريق الألياف البصرية

علينا أن نظهر منصة ميكروفلويديك مع شبكة القطب سطح المتكاملة التي تجمع بين الاستشعار عن نبض مقاوم (RPS) مع سي دي إم أيه (CDMA)، إلى تعدد كشف والتحجيم من الجزيئات في قنوات ميكروفلويديك متعددة.

منصة ميكروفلويديك مع تعدد كشف الالكترونية لتتبع المكانية من الجسيمات

ويبين هذا البروتوكول مقايسة تمتد تدفق جزيء واحد بسيطة وقوية وعالية إنتاجية لدراسة نشرها (1-د) أحادي الأبعاد للجزيئات على طول الحمض النووي.

جزيء واحد بسيطة وقوية وعالية إنتاجية تدفق تمتد مقايسة التنفيذ لدراسة نقل جزيئات على طول الحمض النووي

هذه الوثيقة بالتفصيل هي بروتوكولات العملية والجمعية من منصة فحص وحدات موائع جزيئية لتوصيف منهجي لأشباه الموصلات الغروية نانوكريستال التوليفات. من خلال ترتيبات نظام قابل للتعديل تماما، قد تتم عمليات جمع الأطياف ذات كفاءة عالية عبر مقاييس زمنية رد فعل 4 من حيث الحجم ضمن مساحة كتلة تسيطر عليها نقل عينات.

وحدات تقنية موائع جزيئية لدراسات منهجية الغروية أشباه الموصلات نانوكريستالس

هنا نقدم بروتوكولا لإجراء التعبئة العمود الشعرية FlashPack الأمثل. تطبيق بروتوكول الأمثل لإعداد قنبلة ضغط 100 بار مشترك يسمح التعبئة أسرع 10 مرات وتصنيع أعمدة الشعرية طويلة فائقة الأداء.

بسيطة في المنزل فائقة الأداء تصنيع العمود الشعرية مع نهج FlashPack

يتم تسهيل الكيمياء الحيوية البصرية أحادية الجزيء التي تمت دراستها من خلال غرف الموائع الدقيقة بشكل كبير باستخدام برميل زجاجي ، ومحاقن مانعة لتسرب الغاز ، ووصلات مستقرة للأنابيب بخلايا التدفق ، والقضاء على الفقاعات عن طريق وضع صمامات التبديل بين المحاقن والأنابيب. يصف البروتوكول الفخاخ البصرية المزدوجة التي تمكن من تصور معاملات الحمض النووي والتفاعلات بين الجزيئات.

استخدام الملقط البصري المزدوج والموائع الدقيقة للدراسات أحادية الجزيء

تعمل هذه الدراسة على تحسين دقة مقياس الجريان الكهرومغناطيسي من خلال تحسين أشكال موجات الإثارة ، وتطبيق التصفية متعددة المراحل ، واستخدام التصحيح القائم على جهاز المنطق القابل للبرمجة المعقد (CPLD). تعمل طريقة الكشف عن الأنابيب الفارغة القائمة على شكل الموجة الجديدة على تحسين الموثوقية. تظهر التجارب دقة 0.1٪ في حدود 0.1-15 م / ث ، مما يتحقق من قابلية التطبيق الصناعي.

مقياس الجريان الكهرومغناطيسي عالي الدقة مع الكشف عن الأنابيب الفارغة عبر التعرف على شكل الموجة القائم على جهاز المنطق القابل للبرمجة المعقد

تعلم ضبط أعمدة كروماتوغرافيا التدفق المتوازي المقسمة لتمكين الكشف المتعدد في العينات المعقدة. تُسرّع هذه التقنية تحليل المواد الكيميائية والحيوية النشطة في المخاليط مثل القهوة والنبيذ.

ضبط عمود مقطع التدفق الموازي وتمكين الكشف المضاعفة

استكشف المزيد من الفيديوهات