ضبط عمود مقطع التدفق الموازي وتمكين الكشف المضاعفة

الهدف العام من إجراء HPLC هذا هو ضبط عمود تدفق مجزأ متوازي لتمكين الكشف عن تعدد الإرسال. تجيب هذه الطريقة على الأسئلة الرئيسية في مجالات الصحة والرفاهية والعلوم البيئية والطب الشرعي وأي مجالات تتطلب تحليل عينات معقدة مثل الاكتشاف الحيوي. تسمح هذه التقنية بتحليل شامل للعينات مع تقديم معلومات حول الطبيعة الكيميائية والنشطة بيولوجيا للمواد في المخاليط المعقدة.

بروتوكولات الكشف المتعددة أيضا بالتحليل السريع. تتيح هذه الطريقة تطوير استراتيجيات لتحديد البصمة الكيميائية للمخاليط المعقدة ، مثل القهوة والنبيذ ، مما يسمح للمصنعين بمعرفة الفرق بين منتجاتهم والأصناف المقلدة الرخيصة. في البداية ، قد يكون من غير المعتاد عدم إرسال العينة بأكملها إلى كاشف واحد فقط لإجراء تحليل دقيق.

ومع ذلك ، فإن تركيز المادة التحليلية داخل كل تيار تدفق أعلى من تيار التدفق الكلي للعمود التقليدي. للبدء ، قم بإعداد أداة HPLC بماء UE بنسبة 100٪ وميثانول نقي للمرحلتين المتنقلتين A و B على التوالي. إذا كان كاشف MS المراد استخدامه ، أضف 0.1٪ حمض الفورميك إلى كلتا المرحلتين المتنقلتين ، ثم قم بتطهير مضخات HPLC وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.

قم بتجميع MS UV VS. وكاشفات DPPH. حسب تعليمات الشركة المصنعة. تأكد من ترتيب المكونات بشكل مناسب ، بحيث يكون الحجم الميت في خطوط الكاشف ضئيلا.

ثم اضبط الطول الموجي لكاشف الأشعة فوق البنفسجية VISTA على الطول الموجي الخاص بالعينة هنا. 280 نانومتر لكاشف MS. استخدم الوضع الإيجابي لإجمالي عدد الأيونات أو تحليل TIC باستخدام طريقة الكشف عن المسح الكامل.

قم بموازنة درجة الحرارة وتدفق الغاز لكاشف MS إلى القيم التالية. درجة حرارة المرذاذ 500 درجة مئوية ، درجة حرارة الشعيرات الدموية 350 درجة مئوية ، تدفق الغاز الإضافي 40 وحدة ، تدفق غاز الاجتياح لخمس وحدات ، معدل غاز غمد 60 وحدة ، جهد رش 3.5 كيلو فولت. لتحضير الكاشف الجذري DPPH ، ابدأ بإذابة 25 ملليغرام من جذر DPPH في 250 مل من الميثانول في قارورة حجمية.

أضف 250 ميكرولتر من حمض الفورميك إلى المحلول وقم بصوتنة المحلول لمدة 10 دقائق. ثم قم بتغطية القارورة والرقائق لمنع التعرض للضوء. بعد ذلك ، قم بتطهير المضخة باستخدام محلول جذري DPPH كما نصحت الشركة المصنعة لإعداد نظام DPPH الجذري.

تأكد من تثبيت خط المضخة بمدخل قطعة T ، ثم قم بتوصيل ملف التفاعل سعة 100 ميكرولتر بمخرج القطعة T. قم بتوصيل الكاشف بالطرف الآخر من علبة ENC لملف التفاعل وملف التفاعل وسخان العمود. أخيرا ، اضبط كاشف الأشعة فوق البنفسجية الجذرية DPPH على 520 نانومتر.

لإنشاء التدفق المتوازي المجزأ أو عمود PSF ، قم أولا بتوصيل مدخل العمود بأداة HPLC. بعد ذلك ، استخدم قطعة من الأنابيب لتوصيل المنفذ المركزي بكاشف MS. استخدم أنابيب من نفس الأبعاد لتوصيل منفذ عمود محيطي بكاشف الأشعة فوق البنفسجية VS وآخر بالقطعة T من نظام الكشف الجذري DPPH.

حظر أي منافذ طرفية غير مستخدمة باستخدام سدادات الأعمدة. اضبط معدل تدفق HPLC على مليلتر واحد في الدقيقة من المرحلة المتنقلة B بنسبة 100٪ لعمود 4.6 ملم وقطر داخلي وطول 250 ملم. توازن لمدة 20 دقيقة.

لبدء ضبط نظام PSF ، قم أولا بالتمزق إلى أوعية التجميع الفارغة. استخدم هذه القوارير لجمع المرحلة المتنقلة بشكل منفصل من الأشعة فوق البنفسجية VS. ومنافذ DPPH الجذرية. قم بتدوين الفترة الزمنية للتجميع وجمع ما لا يقل عن 500 ملليغرام من المذيبات في كل وعاء.

بعد ذلك ، قم بوزن أوعية التجميع لتحديد كتلة المرحلة المتنقلة وقسم الكتلة على كثافة الميثانول لحساب حجم المرحلة المتنقلة التي تم جمعها من كل منفذ. أخيرا ، حدد معدل التدفق إلى كاشف MS واحسب نسب التدفق لجميع أجهزة الكشف كنسبة مئوية من إجمالي التدفق كما هو موضح في بروتوكول النص. إذا انحرفت نسب التدفق بشكل كبير عن القيم المثالية ، فأضف أنبوبا إضافيا عند الضرورة لضبط الضغط الخلفي وتكرار عملية التجميع والحساب.

أخيرا ، اضبط معدل تدفق مضخة الكاشف الجذري DPPH لتتناسب مع معدل تدفق منفذ المخرج المتصل بالكاشف. تم إجراء تحليل HPLC متعدد الإرسال على عينة من القهوة. القدرة على تسجيل الأشعة فوق البنفسجية الجذرية DPPH VS. وتسمح Ms.Chromatograms في نفس الوقت للمركبات الموجودة في العينة التي استجابت بشكل إيجابي لجذر DPPH بأن تتطابق بسهولة مع استجابات الأشعة فوق البنفسجية مقابل

استجابات MS بناء على محاذاة وقت الاستبقاء حيث شوهدت استجابة إيجابية من كاشف MSS TIC ، تم تسجيل الكتلة الجزيئية للذروة. تسمح السهولة في مطابقة القمم بين عمليات الكشف المختلفة بشكل سريع وأكثر كفاءة من الفحص والتوصيف لعينة معقدة مثل القهوة بمجرد إتقانها ، يمكن إعداد هذه التقنية في غضون ساعة تقريبا وتكون جاهزة لتحليل العينة باتباع هذا الإجراء. يمكن استخدام أجهزة الكشف الأخرى مثل مضان معامل الانكسار والكشف الكيميائي مثل التلألؤ الكيميائي من أجل الحصول على معلومات عينة إضافية.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن تدرك أهمية عمليات الكشف عن تعدد الإرسال لاكتساب فهم أكبر لعينة معقدة. علاوة على ذلك ، يعد الكشف عن تعدد الإرسال باستخدام أعمدة التدفق المجزأة المتوازية طريقة فعالة للغاية لإجراء الاستكشاف الحيوي.