الستار العمود تدفق: تحسين الكفاءة والحساسية

الهدف العام من هذه الطريقة هو تحسين كفاءة وحساسية الفصل من خلال تحسين عمود تدفق الستارة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال العلوم البيئية والطب الشرعي وفي المجالات التي تتطلب تحليل العينات النزرة ، حيث يلزم وجود تقنية فصل فعالة وحساسة للغاية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تزيد من كفاءة الفصل وحساسية التحليل مقارنة بالطرق التقليدية لفصل HPLC.

يمكن أن توفر هذه الطريقة وسيلة لزيادة قوة الفصل ، وبالتالي قدرة السرعة ، بطريقة اقتصادية وفعالة من حيث الوقت. يعد عمود تدفق الستارة مفهوما جديدا لممارسي HPLC ، ومع ذلك ، فإن استخدامه ليس معقدا. يتطلب ببساطة تحسين نسب التدفق المناسبة.

أولا ، قم بإعداد زجاجات من الماء النقي للغاية بنسبة 100 في المائة ، و 100 ميثانول للمرحلتين المتنقلتين A و B من أداة HPLC. تطهير المضخات حسب متطلبات الشركة المصنعة. بعد التطهير ، افصل خط المضخة عن صمام حاقن جهاز أخذ العينات التلقائي.

قم بتوصيل قطعة T بالخط المنفصل. لكل منفذ من القطعة T ، قم بإرفاق أنبوب بقطر داخلي 0.13 ملم وطول 15 سم. قم بتوصيل أنبوب واحد من القطعة T بصمام حاقن جهاز أخذ العينات التلقائي.

أخيرا ، اضبط المضخة على معدل تدفق واحد مليلتر في الدقيقة. قم بتفريغ وعاني تجميع فارغتين وقم بتسميته المركزية والطرفية. لمدة 60 ثانية ، استخدم السفينة ذات العلامات المركزية لجمع المرحلة المتنقلة الخارجة من الخط القادم من الحاقن.

أعد وزن الوعاء المركزي وحدد كتلة المرحلة المتنقلة المجمعة. كرر هذه العملية عن طريق جمع التدفق عبر المنفذ المحيطي باستخدام الوعاء ذي العلامات الطرفية. حدد النسبة المئوية للتدفق ، أو المليلتر في الدقيقة ، من كل سطر باستخدام المعادلات المشار إليها.

يجب أن يكون المنفذ المركزي حوالي 40 بالمائة ، والمنفذ المحيطي حوالي 60 بالمائة. إذا اختلفت القيم بأكثر من اثنين بالمائة ، فقم بتغيير طول الأنبوب أو قطره لضبط نسبة التدفق. ثم كرر المجموعة وخطوات الحساب.

بعد ذلك ، قم بإيقاف تشغيل تدفق المضخة وقم بتوصيل خط الحاقن بالمنفذ المركزي لمدخل العمود. قم أيضا بتوصيل الخط من القطعة T بالمنفذ الطرفي لمدخل العمود. قم بتكثيف معدل التدفق ببطء إلى مليلتر واحد في الدقيقة من المرحلة المتنقلة بنسبة 100 في المائة B.To الانتهاء من ضبط النظام ، وقم بتدفق الميثانول بنسبة 100 في المائة عند مليلتر واحد في الدقيقة لمدة 10 دقائق لموازنة العمود.

للبدء ، استخدم الأنابيب لتوصيل منفذ المخرج المركزي بكاشف الأشعة فوق البنفسجية. قم بتوصيل نفس نوع وطول الأنبوب بمنفذ المخرج المحيطي لعمود CF. ثم اضبط المضخة على معدل تدفق واحد مليلتر في الدقيقة.

ضعي وعاء تجميع فارغين ومرة أخرى ، أحدهما للتجميع المركزي والآخر للأجهزة الطرفية. لمدة 60 ثانية ، استخدم السفينة ذات العلامات المركزية لجمع المرحلة المتنقلة الخارجة من كاشف الأشعة فوق البنفسجية. أعد وزن وعاء التجميع لتحديد كتلة المحلول المراوغ.

كرر هذه العملية مع منفذ المخرج المحيطي ووعاء التجميع المسمى. حدد الآن النسبة المئوية للتدفق من كل سطر كما تم إجراؤه سابقا باستخدام تدفق المدخل. يجب أن يكون خط UV-Vis 21 بالمائة ، ويجب أن يكون تدفق المخرج المحيطي 79 بالمائة.

إذا انحرفت نسبة التدفق بشكل كبير ، فاضبط حجم الأنبوب المتصل بمخرج كاشف UV-Vis لتغيير نسبة التدفق المركزي. من المهم أن تتبع نسب التدفق بين المركزي والمحيطي عند مدخل ومخرج العمود هذا البروتوكول لضمان الأداء الأمثل لعمود تدفق الستارة. تم تطوير أعمدة تقنية التدفق النشط باستخدام تصميم فريت متخصص في تركيبات نهاية العمود متعدد المنافذ للتغلب على عدم تجانس قاع العمود وتحسين أداء الفصل.

تم تحليل خليط اختبار يحتوي على فينيتول وبوتيل بنزين وبنتيل بنزين على أعمدة تقليدية بقطر داخلي 4.6 و 2.1 ملم ، وعمود تدفق ستارة داخلي بقطر 4.6 ملم. يوضح فصل الخليط الأداء المحسن من حيث كفاءة وحساسية عمود تدفق الستارة بالنسبة للأعمدة القياسية. أدى استخدام عمود تدفق الستارة إلى زيادة إشارة البيوتيل بنزين على الرغم من انخفاض حجم الذروة.

بمجرد إتقانها ، يمكن إعداد هذه التقنية في أقل من نصف ساعة إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. يمكن إعادة استخدام إعداد عمود تدفق الستارة مرارا وتكرارا، ولكن يجب التحقق من نسب التدفق بشكل روتيني. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن تكون قريبا من نسب التدفق الموصوفة قدر الإمكان.

مهد عمود تدفق الستارة الطريق للباحثين في مجال HPLC لدفع حدود الأعمدة وأدوات UPLC للحصول على تحليل أسرع للعينات دون المساس بأداء الفصل. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن تفهم أهمية أعمدة تدفق الستارة ، حيث يمكن أن توفر فصلا أفضل من أعمدة HPLC التقليدية.