الحليب مجموعة في الفئران عن طريق أنابيب شعرية وتقدير من الحليب الدسم المحتوى من قبل Creamatocrit

الهدف العام من هذا الإجراء هو وصف كيفية جمع الحليب يدويا من الفئران المرضعة لتحليل تركيبة الحليب في المختبر. يمكن استخدام هذه الطريقة للمساعدة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال صحة الأم والطفل ، مثل كيف يمكن أن يؤثر النظام الغذائي للأم على تكوين الحليب. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن إجراؤها بواسطة محقق واحد دون أي فراغ أو معدات شفط متخصصة.

No.To البدء ، افصل السد عن نسلها لمدة خمس دقائق على الأقل قبل الحلب. بعد ذلك ، اجمع جميع المواد المطلوبة لإجراء الحلب كما هو موضح هنا. ثم ضع وسادة مقعد ماصة على طاولة جراحية ساخنة ، أو استخدم وسادة حرارية منفصلة لمنع فقدان الحرارة من السد أثناء إجراء الحلب.

بعد ذلك ، تحقق من نظام التخدير للتأكد من أن النظام يحتوي على كمية كافية من الأكسجين والفلور الأيزو قبل الإجراء. ثم قم بتوصيل القناع الذي سيتم استخدامه لتحريض التخدير الأولي بالجهاز واضبط قناع الصيانة في مكان قريب. افتح خزان الأكسجين واضبط التدفق على لتر واحد في الدقيقة.

ثم قم بتشغيل تدفق الفلور وضبط تدفقه على 5٪ بمجرد التخدير ، قم بتبديل السد إلى قناع الصيانة. تأكد من مستوى كاف من التخدير عن طريق التحقق من عدم وجود منعكس الدواسة. ثم ضع السد في وضع ضعيف على وسادة المقعد الماصة.

تقليل تدفق الفلور إلى اثنين إلى 3٪ مراقبة السد باستمرار طوال الإجراء وضبط تدفق الفلور حسب الضرورة لتجنب الألم والاكتئاب التنفسي. بعد ذلك ، استخدم منديل كحولي معقم أو وسادة تنظيف لتطهير قارورة من الأوكسيتوسين باستخدام حقنة سعة ملليلتر واحدة مزودة بإبرة قياس 25 ، واسحب 0.1 مل من الأوكسيتوسين. ثم أدخل الإبرة في الربع الأيمن السفلي من بطن السد مع توجيه الإبرة نحو الرأس بزاوية من 15 إلى 30 درجة ، بعمق حوالي 0.5 سم.

اسحب المكبس للخلف لضمان الضغط السلبي قبل الحقن. إذا لم يتم استنشاق أي سائل ، فقم بحقن الأوكسيتوسين وتخلص من الإبرة والحقنة على الفور في حاوية بيولوجية. انتظر حوالي خمس إلى 15 دقيقة حتى يحفز الأوكسيتوسين الحليب.

خذل خلال هذا الوقت ، اختر التيتس التي سيتم جمع الحليب منها. استخدم أدوات التشذيب لإزالة الفراء برفق حول التيتس المحددة لأن الفراء قد يسبب صعوبة في جمع العينات. ثم نظف التيتس بالماء الفاتر.

قم بإعداد موقعين على الأقل حيث قد تكون هناك حاجة إلى أكثر من موقع واحد لجمع الحليب. بمجرد أن ينخفض الحليب ، اضغط برفق على قاعدة Tet لطرد الحليب يدويا. للتجميع ، اجمع قطرات الحليب في أنبوب شعري سعة 50 ميكرولتر.

بمجرد امتلائه، قم بتوزيع الحليب من الأنبوب الشعري في أنبوب طرد مركزي دقيق معقم عن طريق لمس نهاية الأنبوب الذي تم استخدامه لسحب الحليب من الحلمة إلى جانب أنبوب الطرد المركزي الصغير. ثم استخدم إبرة قياس 18 متصلة بحقنة سعة مليلتر واحد لتفجير أي حليب لم يتم سحبه في الأنبوب. كرر جمع الحليب وانقله إلى أنبوب الطرد المركزي الدقيق حتى يتم جمع كمية كافية من الحليب.

بالنسبة للتحليل المختار ، حاول تحديد الوقت الإجمالي الذي يخضع فيه السد للتخدير بأقل من ساعة واحدة. عند اكتمال الحلب ، قم بإيقاف تشغيل تدفق الفلور والأكسجين وإزالة القناع من السد. استمر في مراقبة السد حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الرقيق

إذا لم تكن هناك حاجة إلى مزيد من التحليلات ، فقم بنسيم الحليب عند سالب 80 درجة. للتحضير لقياس CCR ، قم بتحميل 15 إلى 20 ميكرولترا من الحليب في أنبوب الهيماتوكريت الدقيق مباشرة من Tet. ثم أغلق نهاية الأنبوب بمادة مانعة للتسرب من الطين.

ضع الأنبوب الشعري في الدوار الهيماتوكريتي مع توجيه دبع مانع التسرب نحو الخارج وتأكد من توازن جهاز الطرد المركزي. ثم قم بتدوير العينة عند 13 ، 700 مرة G لمدة دقيقتين. بمجرد انتهاء العينة من الدوران ، قم بإزالة الأنبوب من جهاز الطرد المركزي.

لاحظ فصل العينة إلى طبقة كريمية وطبقة واضحة. قم بقياس وتسجيل الطول الكلي للسائل في الأنبوب وطول طبقة الدهون أو الكريمة باستخدام مسطرة أو فرجار. استخدم هذه المعلومات لحساب CCR كما هو موضح في بروتوكول النص المصاحب لتحديد كيفية تأثير النظام الغذائي أثناء الحمل والرضاعة على تكوين الحليب.

تم جمع عينات الحليب عند الفطام من سدود Worcester التي تتغذى إما على نسبة عالية من البروتين أو الألياف الغنية بالبريبايوتيك أو نظام غذائي خاضع للرقابة. كان الحليب الذي تم جمعه من السدود على نظام غذائي عالي الألياف البريبايوتيك يحتوي على أعلى هيماتوكريت C ، وتركيز سيئ وقيمة طاقة. ومع ذلك ، لم تكن هذه الاختلافات ذات دلالة إحصائية عندما يتعلق الأمر بالبروتين.

ومع ذلك ، فإن الحليب الذي تم جمعه من السدود في النظام الغذائي الغني بالبروتين يحتوي على أعلى تركيز للبروتين. على الرغم من أن هذا الاختلاف لم يكن ذا دلالة إحصائية مرة أخرى. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في أقل من ساعة من النقطة الأولية لتخدير السد إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

عند محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر مراقبة السد باستمرار للتأكد من عدم حدوث تثبيط في التنفس أثناء التخدير بعد هذا الإجراء. يمكن استخدام طرق أخرى مثل قياس الطيف الكتلي للإجابة على أسئلة إضافية مثل تحديد تركيبة السكريات قليلة الحليب. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء الجمع اليدوي للحليب من الفئران المرضعة.