وحديثي الولادة ماوس الحبل الشوكي ضغط إصابة نموذج

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء إصابة ضغط الحبل الشوكي القابلة للتكرار في فأر حديثي الولادة. يتم تحقيق ذلك عن طريق تخدير الماوس أولا بعمق. ثم إجراء استئصال الصفيحة الفقرية الظهرية للكشف عن الحبل الشوكي.

وأخيرا عن طريق إحداث إصابة الضغط. لقد أنشأنا مؤخرا نموذجا للفأر حديثي الولادة لإصابة الحبل الشوكي وأظهرنا أن الفئران حديثي الولادة تظهر درجة مذهلة من اللدونة التكيفية. قد توفر دراسة هذه الآلية الكامنة وراء التعافي رؤى مهمة يمكن استخدامها في علاج إصابة الحبل الشوكي.

في هذا الفيديو ، سوف نوضح كيفية إجراء إصابة ضغط الحبل الشوكي في فأر عمره يوم واحد. يشمل هذا الإجراء الجراحي التخدير واستئصال الصفيحة الفقرية وضغطتين فوق الجافية مدفوعة بالمشبك. التحضير للجراحة.

يتم إجراء الجراحة تحت مجهر استريو. ضع وسادة تسخين تحت المجهر. من الأهمية بمكان الحفاظ على دفء الجرو لتجنب الموت المفاجئ أثناء الجراحة.

ضع بطانية جراحية أو ورقة كبيرة من ورق المختبر الناعم النظيف فوق وسادة التدفئة. بالنسبة للمسكن قبل الجراحة ، قم بإعداد حقنة الأنسولين ، مقياس 0.3 مل 30 ، مملوءة بالتخدير الموضعي ، الماركيين ، المخفف ب PBS المعقم ، إلى تركيز نهائي يبلغ 2.5 ملليغرام لكل مليلتر. لشق الجلد وإزالة العضلات واستئصال الصفيحة الفقرية ، استخدم سكينا دقيقا وملقطا دقيقا ومقصا دقيقا لاستئصال القزحية الدقيقة.

لاحظ أننا هنا نستخدم أيضا الملقط الذي ثنيناه عند الأطراف لتشكيل الأسنان. تعمل هذه بشكل أفضل من الملقط المسنن المتاح تجاريا لأن الأسنان يجب أن تكون صغيرة جدا. لضغط الحبل الشوكي ، استخدم مشبك Yasargil Temporary Aneurysm Miniclip المعدل خصيصا ، والذي سنصفه لاحقا.

الضروري أيضا وجود طول صغير من الأنابيب الشعرية البلاستيكية لعمل سدادة لمنع الإغلاق الكامل للمقطع ، وقضيب مشبك لوضع المقطع. للخياطة ، استخدم حامل إبرة ومقص صغير لقطع الخيط. لعلاج الألم ، قم بتخفيف Temgesic في PBS المعقم ، إلى 0.03 ملليغرام لكل ملليلتر.

تتضمن إصابة الحبل الشوكي ضغطا مدفوعا بمشبك ، باستخدام مشبك تمدد الأوعية الدموية المؤقت Yasargil. قبل الاستخدام ، يجب تعديل المشبك ميكانيكيا ، عن طريق تقليم سمك الشفرات إلى 150 ميكرومتر باستخدام حجر شحذ. قبل الجراحة مباشرة ، قم بقص امتدادا قصيرا من الأنابيب البلاستيكية وضعها فوق إحدى شفرات المشبك.

يعمل الأنبوب كسدادة لمنع الإغلاق الكامل للمشبك. التخدير والمسكن. للتخدير بالغاز ، نستخدم مبخر سوبران متصل بخزان أكسجين.

الأيزوفلوران هو المخدر الذي يتبخر في الأكسجين النقي. لتوزيع خليط الأكسجين Isoflurane على الفأر ، تحتاج إلى بناء قناع أنف يتكيف مع الأطفال حديثي الولادة. الفئران حديثي الولادة صغيرة جدا ، بحيث يمكن صنع القناع من طرف المحقنة ، والتي تعمل كمدخل للأنابيب البلاستيكية المتصلة بمخرج المرذاذ.

على جانب القناع ، قم بحفر ثقب صغير لتوصيل أنبوب تفريغ ينتهي إما بمضخة تفريغ منظمة ، مع وحدة تجميع ، أو ببساطة في غطاء الدخان. اصنع غرفة تخدير فائض باستخدام طبق بتري بلاستيكي سعة 150 × 25 مل. على جانب واحد ، قم بعمل ثقب كبير بما يكفي لرأس الماوس.

على الجانب الآخر ، قم بعمل فتحتين أصغر بقطر الأنبوب البلاستيكي. أخيرا ، قم بعمل فتحة إخلاء ، أصغر من غيرها ، في الجزء العلوي من الطبق. قم بقص طرف ماصة سعة 250 ميكرولتر وأدخله في هذه الفتحة الأخيرة.

يعمل طرف الماصة كموصل لأنبوب الإخلاء المتصل بجهاز تفريغ يتم ضبطه لضغط سلبي طفيف. باستخدام البلاستيسين ، اربط القناع داخل فتحة رأس الفأر مباشرة. باستخدام الشريط اللاصق أو البلاستيسين ، قم بتثبيت الأنبوب البلاستيكي على سقف الغرفة ، وتأكد من وضع الأنابيب بشكل جيد في الثقوب المناسبة.

ضع الغرفة على البطانية الجراحية تحت المجهر. يتم تمثيل النظام بأكمله في هذا المخطط. يتم وضع محبس ثلاثي الاتجاهات على إخراج المرذاذ.

هنا ، يكون المسار إلى غرفة النوم مجانيا ، بينما يتم حظر المسار المؤدي إلى القناع ويمكن وضع الماوس في غرفة النوم لبدء التخدير. يسمح تدوير محبس ثلاثي الاتجاهات إلى اليمين للغاز بالتدفق إلى القناع ويسد الطريق إلى غرفة النوم. في هذا التكوين ، يمكن نقل الماوس إلى القناع.

تتم إزالة تسرب الغاز عن طريق الفراغ من غرفة الفائض. حدد جرو فأر يشرب الحليب مؤخرا ، كما يتضح من اللون الأبيض المرئي من خلال الجلد. ضع الجرو في غرفة النوم وأدخل الأيزوفلوران المتبخر بنسبة 4٪ لتحقيق تخدير سريع.

انقل الجرو إلى القناع. ضع خطم الفأر جيدا في القناع لضمان التعرض الكافي لغاز التخدير. أدر محبس ثلاثي الاتجاهات لتحويل الغاز نحو القناع.

حقن تحت الجلد ، 50 ميكرولتر من Marcaine بمعدل 2.5 ملليغرام لكل مليلتر ، في الموقع المطلوب للجراحة. احرص على عدم الحقن بعمق شديد ، حيث يمكن بسهولة إصابة الأوعية الدموية وإدخال الماركيين في الوعاء أمر قاتل. امسح الماركيين الزائد بضغط معقم صغير.

استئصال الصفيحة الفقرية الظهرية. قلل تركيز الأيزوفلوران إلى واحد إلى اثنين بالمائة. بعد بضع دقائق ، اخترق الجلد بسكين دقيق وقم بعمل فتحة نقل من ثمانية إلى تسعة ملليمترات عن طريق سحب الجلد برفق في اتجاه الذيلية المنقارية.

تعتبر فتحة النقل أكثر ملاءمة وتوفر وصولا جانبيا أفضل لإجراء استئصال الصفيحة الفقرية. اسحب حواف شق الجلد من الأنسجة الأساسية ، عن طريق إدخال قطع من الإسفنجستاتين ، المنقارية تحت الجلد والذيلية في الشق. قطع عضلات ما قبل الفقرات بمقص رفيع لفضح العمود الفقري.

لاحظ أنه في حديثي الولادة ، لا تكون عملية العمود الفقري كاملة التطور. حدد خط الوسط وقطع الصفيحة بشكل عرضي باستخدام المقص الرفيع. انتبه إلى عدم القطع العميق جدا ، لأن هذا قد يؤدي إلى إتلاف الجافية وحتى الحبل الشوكي.

ضع شفرة واحدة من ملقط رفيع بحذر بين الصفيحة والجافة. أمسك الصفيحة عن طريق إغلاق الملقط وارفعها بحذر حتى تنفصل ، تاركة الجافية في لباقة. كرر الخطوة مرتين إلى ثلاث مرات للحصول على استئصال الصفيحة الفقرية من جزء إلى جزءين.

السيطرة على النزيف باستخدام قطع صغيرة من الإسفنجستاتين. باستخدام الملقط الرفيع كجرف ، قم بإزالة أجزاء من مفاصل الوجه بشكل ثنائي للحصول على مساحة كافية لوضع مشبك تمدد الأوعية الدموية المعدل داخل القناة الفقرية. غالبا ما تؤدي هذه الخطوة إلى نزيف يمكن السيطرة عليه باستخدام قطع صغيرة من الإسفونجيستاتين.

لتحسين الرؤية ، من المفيد أحيانا شطفها باستخدام PBS المعقم الدافئ ، 37 درجة مئوية. توليد إصابة ضغط الحبل الشوكي. افتح المشبك وضع الشفرات على جانبي الحبل الشوكي في الفراغات بين مفاصل الوجه والحبل.

تأكد من إدخال الشفرات بعمق كاف لتشمل الجزء البطني من الحبل الشوكي. أغلق المشبك بسرعة، مع تثبيت القضيب في مكانه، لتجنب انزلاق المشبك للخلف. بعد 15 ثانية ، حرر المقطع بسرعة.

نظف الجرح باستخدام الإسفونجيستاتين. لتحقيق ضغط متماثل ، قم بعكس الشفرات وقم بإجراء ضغط ثان لمدة 15 ثانية في الاتجاه المعاكس. خياطة. قم بإزالة قطع الإسفونجيستاتين التي وضعت تحت الجلد في بداية الجراحة وأغلق الجلد ب 6.0 خيوط.

حقن 0.05 ملليلتر ، Temgesic ، بمعدل 0.03 ملليغرام لكل ملليلتر. تحت الجلد باستخدام حقنة أنسولين قياس 30 وضع الجرو في بيئة يتم التحكم في درجة حرارتها عند 30 درجة مئوية لبضع ساعات. لتقليل سلوك الأم العدواني تجاه الجرو الذي تم تشغيله خلال الليلة الأولى ، بعد الجراحة ، قم بإعداد محلول ديازيبام ، المخفف في PBS النظيف ، إلى 0.1 ملليغرام لكل مليلتر للحقن داخل الصفاق بمعدل ثمانية جرامات لكل كيلوغرام. النتائج.

كما هو موضح في هذا الرسم البياني ، بعد ست ساعات من ضغط الحبل الشوكي ، عند المستويات الصدرية السفلية ، تصاب الأطراف الخلفية للفئران المصابة بالشلل ، في حين أن الأطراف الأمامية ليست كذلك. في حالة التحكم الزائفة ، التي تلقت فقط استئصال الصفيحة الفقرية ، فإن كل من الأطراف الخلفية والأطراف الأمامية متحركة للغاية. يظهر جزء من الحبل الشوكي الدم المتبقي عند رؤية الإصابة.

بالإضافة إلى ذلك ، فإن الأنسجة شفافة ، مما يشير إلى فقدان الأنسجة ، مما يؤدي غالبا إلى تكوين تجويف بعد عدة أيام. استنتاج. بعد هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية توليد إصابة ضغط الحبل الشوكي في فأر حديثي الولادة. تتمثل ميزة استخدام الفئران حديثي الولادة في أنه يمكننا استخدام طرق محددة لمعالجة اللدونة التكيفية ، والتي لا يمكن استخدامها في الفئران البالغة.

بالإضافة إلى ذلك ، يوفر النموذج منصة لاختبار الأساليب العلاجية ، مثل زرع الخلايا الجذعية.