Name: وحديثي الولادة ماوس الحبل الشوكي ضغط إصابة نموذج (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 31 s
Description: تعلم إجراء إصابة ضغط الحبل الشوكي في فئران حديثة الولادة باستخدام تقنية الضغط بالمشبك المعدّل. يتيح هذا النموذج دراسة اللدونة التكيفية وآليات التعافي العصبي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذا العمل بمنح من هيئة الصحة الإقليمية لجنوب شرق النرويج (JLB, 2014119; JCG، أرقام المشاريع 2015045 و 2012065)، من قبل مجلس البحوث النرويجي (JCG، رقم المشروع 23 00 00) وجامعة أوسلو.

تمت الموافقة على هذا البروتوكول التجريبي من قبل الهيئة العامة للبحوث الحيوان الوطنية في النرويج (Forsøksdyrutvalget، المحلي التجريبية موافقة عدد 12.4591) في الامتثال للوائح رعاية الحيوانات الاتحاد الأوروبي (مختبر الاتحاد الأوروبي جمعية علم الحيوان). وقد بذلت جهود لتقليل عدد الحيوانات المستخدمة ومعاناتهم. في هذه المقالة وصف الإجراءات المستخدمة على بعد الولادة (P) يوم 1-النوع البري مجلس النواب (يطبع منطقة التحكم) الفئران (جاكسون، الولايات المتحدة الأمريكية)، ولكن يمكن أيضا نفس النهج أن تستخدم في مراحل لاحقة. 1. بناء نظام التخدير الغاز الفئران حديثي الولادة (الشكل 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بناء الأنف قناع من غيض من حقنة. ربط هذا إلى 3 في اتجاه ومحبس مع أنابيب البلاستيك (الشكل 1 - أنابيب الأحمر والشكل 2A1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حفر ثقب صغير في جانب من قناع الأنف وربط هذا إلى أنابيب بلاستيكية لإزالة الفائض من الغاز منقناع. إنهاء الأنابيب إما في مضخة فراغ المحددة لضغط سلبي طفيف، أو في غطاء الدخان (الشكل 1 - أنابيب الأخضر الساطع). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل غرفة التخدير من 150 مم × 25 مم البلاستيك طبق بيتري (الشكل 2A2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على جانب واحد، وجعل حفرة كبيرة بما يكفي لاستيعاب الرأس من الفأرة وقناع الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على الجانب الآخر، وجعل اثنين من الثقوب الصغيرة التي يمكن من خلالها إدخال أنابيب البلاستيك من وإلى قناع الأنف (الشكل 1 - أحمر ومشرق أنابيب الأخضر، على التوالي). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل ثقب الثالث على الجزء العلوي من الغطاء ونعلق على هذا أنبوب بلاستيكي الثالث الذي ينتهي في مضخة فراغ (الشكل 1 - أنابيب الأخضر الداكن). والغرض من هذا الأنبوب الثالث هو التأكد من أن أي زيادة الغازات التي لم يتم التقاطها بواسطة منفذ من قناع الأنف وإزالتها. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بناء غرفة النوم عن طريق إحداث ثقب في الجزء السفلي من أي نوع من طبق المختبر الذي هو كبير بما يكفي لجontain الماوس، ولها حافة ناعمة وحتى (افتتاح الطبق يجب أن تكمن دافق مع الجدول لمنع تسرب الغاز). توصيل ثقب في غرفة إلى 3 في اتجاه ومحبس مع أنابيب البلاستيك (الشكل 1 - أنابيب البني). وضع غرفة النوم تحت غطاء الدخان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل 3 في اتجاه ومحبس إلى أنبوب مخرج من المرذاذ (الشكل 1 - أنابيب الأصفر والشكل 2A3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط مدخل المرذاذ إلى الأوكسجين (الشكل 1 - أنابيب الأزرق). </li></ol> 2. تعديل لYasargil المؤقتة تمدد الأوعية الدموية البسيطة كليب لإنشاء أداة ضغط (الشكل 2 والجدول 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يلصق مقطع بحزم الى وقفة مع المشبك. باستخدام العدسة مجهر لمراقبة بصرية، تقديم أسفل السطح الخارجي من طرف كل شفرة مقطع لسمك النهائي من حوالي 150 ميكرون باستخدام حجر شحذ التي شنت على الحفر (الشكل 2B و C). </لى&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل سدادة لمقطع بقطع مسافة قصيرة من البولي ايثلين الشعرية أنابيب (الجدول 1) تحت مجهر تشريحي باستخدام سكين الصغير (الجدول 1)، ووضع هذا على واحد من ريش (الشكل 2A4 وأرقام 2B وجيم). هذا يمنع اغلاق تام من مقطع ويخلق أبعادا ضغط موحدة. عند إغلاق مقطع المسافة interblade حوالي 230 ميكرون. جعل سدادة جديدة لكل تجربة كمادة البولي ايثيلين قد ضغط أثناء الاستخدام، والذي من شأنه أن يغير من الفضاء interblade. ملاحظة: التوتر في الربيع مقطع يقلل بمرور الوقت بحيث بعد حوالي 80 الضغط على مقطع لم تعد يغلق تماما على سدادة ويحتاج إلى استبداله. </li></ol> 3. إعداد قبل الجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في غرفة النوم (الشكل 1) والشروع في التخدير مع 4٪ الأيزوفلورين (الشكل 2A5 </strong&gt;) تبخيرها في الأكسجين النقي، وذلك باستخدام المرذاذ (الشكل 2A3 والجدول 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختبار رد الفعل سحب الماوس عن طريق معسر بلطف على شبكة الإنترنت من الجلد بين أصابع القدم مع ملقط رقيقة من البلاستيك. هل هذا بعناية كما هي الفئران الوليدة أصيب بسهولة. معسر نتائج من الصعب جدا في كدمات على الفور. أداء هذا الاختبار في بداية التخدير يتسبب في رد الفعل، ويوفر مؤشرا جيدا لمقدار القوة اللازمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم إلغاء منعكس، وإزالة الماوس من غرفة النوم ووضعه في وضعية الرقود على طاولة العمليات مع خطم إدراجها في قناع الأنف أن يوفر امدادات مستمرة من 4٪ الأيزوفلورين مختلطة في الأكسجين النقي (الشكل 1). تأكد من أن لوحة الاحترار في وضع التشغيل وتعيين إلى 37-38 درجة مئوية كما انخفاض حرارة الجسم أثناء الجراحة يمكن أن تكون قاتلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحقيق التسكين الكامل، حقن تحت الجلد 50 ميكرولتر من مخدر موضعي بوبيفاكايين (2.5 ملغ / مل، <stronز&gt; الشكل 2A6) في موقع الجراحة (في التجارب ذكرت هنا، وهذا هو في مستوى الصدر (T) 9-T11). استخدام حقنة الأنسولين (300 ميكرولتر، 30 G، الشكل 2A7 والجدول 1) لإجراء الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> والحد من تركيز الأيزوفلورين تسليمها إلى قناع الأنف إلى 1-2٪. </li></ol> 4. ظهري استئصال الصفيحه <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء عمليات جراحية تحت السيطرة المجهرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تنظيف منطقة الجراحة مع غلوكونات الكلورهيكسيدين (الجدول 1 رقم 19) لمدة 30 ثانية على الأقل، وجعل 1-2 ملم عرضية شق الجلد في T9-T11 باستخدام microknife (الشكل 2A8). ملاحظة: في مجلس النواب الفئران حديثي الولادة الجزء منقاري من المعدة، وضوحا عندما يحتوي الحليب، والتي تواجه مستويات الفقري T12-T13 (الشكل 3). معلم آخر هو جزء منقاري من تحت الجلد مجموع الأنسجة الدهنية الصدري الذي ينتهي في حوالي T8-9. هذا المعلم مرئيا إلا بعد شق الجلد. </li><lط&gt; استخدام ملقط (الشكل 2A9 وA10) لتوسيع فتحة الجلد في الاتجاه العرضي إلى 8-9 مم عن طريق سحب الجلد بلطف rostrally وcaudally (الجلد الدموع بسهولة، وخلق الجرح على نحو سلس ومستقيم). هذا يوفر وصولا الجانبي كافية في العمود الفقري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التراجع عن حواف شق الجلد من الهياكل الأساسية عن طريق إدخال قطعة معقمة من الإسفنج الجيلاتين لوقف نزيف الدم (الشكل 2A11 والجدول 1) منقاري تحت الجلد والذيلية إلى الشق. هذا يوسع افتتاح ويمنع البشرة من التراجع والتعتيم على المنطقة خلال عملية جراحية. لا تحتاج إلى أن تكون غارقة في المياه المالحة قبل استخدامها الاسفنج الجيلاتين لوقف نزيف الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لفضح العمود الفقري، تشريح عضلات مجاورة للفقرة باستخدام مقص رقيقة (الشكل 2A12، والجدول 1). قطع المرفقات من العضلات إلى العمود الفقري وفضح الصفيحة (الشكل 4A). ليسه أيضا أنه في هذه المرحلة عملية في العمود الفقري متخلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعرف على خط الوسط وقطع مستعرض بين الصفائح اثنين (الذي في هذه المرحلة هو غضروفي) مع مقص رقيقة (الشكل 4B). بعناية وضع شفرة واحدة من ملقط رقيقة بين الصفيحة والجافية (الشكل 4C)، فهم الصفيحة مع ملقط ورفعه بعناية حتى قطعة يكسر بعيدا، وترك الجافية سليمة (الشكل 4D). كرر هذه 2-3 مرات للحصول على الثقب 1-2 شريحة طويلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط رقيقة كما رينجرز، وإزالة أجزاء من مفاصل ثنائيا لكسب مساحة كافية لوضع مقطع داخل قناة العمود الفقري. تنظيف المنطقة الجراحية والسيطرة على النزيف مع قطع صغيرة من الإسفنج الجيلاتين لوقف نزيف الدم. </li></ol> 5. الحبل الشوكي ضغط الإصابات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح تعديل تمدد الأوعية الدموية المصغرة في مقطع حامل كليب (الشكل 2A13 والشكل 2B) والمركز الرابعشفرات الإلكترونية على جانبي الحبل الشوكي في الفراغات بين الوجه ينضم والنخاع. تأكد من أن يتم إدراج ريش يكفي عميق يؤثر على الجزء البطني من الحبل الشوكي. إذا لم يكن ذلك ممكنا، وإزالة أكثر من مفاصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الافراج عن ميني كليب بسرعة، عقد في مكانه مع حامل كليب لمنعها من الانزلاق. الحفاظ على ضغط لمدة 15 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح مصغرة كليب بسرعة وإزالته. لتحقيق ضغط متناظرة، عكس اتجاه ميني كليب، واستخدام علامة ينظر اليه بسهولة أدلى بها ذمة النزفية من ضغط الأول كدليل، إعادة مقطع في الاتجاه العكسي لالثاني ضغط 15 ثانية (قبل وأظهرت التجربة أن هذا يولد العجز النسيجية والفسيولوجية متناظرة، في حين الضغط على واحدة لا 1). لا ينبغي أن يكون معطوبا الجافية من الضغط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف المنطقة والحفاظ على الارقاء مع قطعة من الإسفنج الجيلاتين لوقف نزيف الدم.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة قطعة من الإسفنج الجيلاتين لوقف نزيف الدم التي تم وضعها تحت حواف شق الجلد في بداية عملية جراحية وإغلاق شق الجلد مع معقمة 6.0 خياطة وحامل إبرة (الشكل 2A14 و 15). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن تحت الجلد 0.75 ملغم / كغم من وزن الجسم البوبرينورفين (الشكل 2A16) المخفف في برنامج تلفزيوني العقيمة باستخدام حقنة الأنسولين (300 ميكرولتر، 30 G). </li></ol> 6. العناية بعد العملية الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الماوس من قناع الأنف ووضعه في مجموعة غرفة التحكم في درجة الحرارة عند 30 درجة مئوية حتى ترتدي التخدير وإيقاف الماوس يصبح في حالة تأهب (1-3 ساعة عادة كافية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الديازيبام (الشكل 2B17) البريتونى إلى الأم (8 جم / كجم من وزن الجسم). وهذا يخلق سبات أن يقلل من مخاطر أكل لحوم البشر خلال الليلة الأولى، عندما يكون هذا الخطر هو أعلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عودة الماوس تعمل على القمامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا القمامة هي لالدو (&gt; 12 الجراء)، وإزالة بعض الجراء unoperated، تفضيلي الحيوانات الكبيرة إذا كانت تختلف في الحجم، للحد من المنافسة على الحليب. رعاية الأمومة من الجراء تشغيلها هو أفضل في خط النواب إذا كان حجم القمامة حوالي 9 الجراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإدارة الألم، وإدارة البوبرينورفين (0.75 ملغ / كغ من وزن الجسم) تحت الجلد مرة واحدة يوميا خلال أيام بعد العملية الجراحية الأولى، وذلك باستخدام حقنة الأنسولين (300 ميكرولتر، 30 G). حجم مناسب للحقن تحت الجلد هو 30-50 ميكرولتر. في النطق الفئران حديثي الولادة والتحريض مؤشرات جيدة من الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء الفحص اليومي من الفئران المصابين باستخدام ورقة نتيجة لتقييم التغذية، ووزن الجسم، والجفاف، والألم، التئام الجروح، واحتباس البول وحالة عدوى. وفقا لدرجة حصل عليها، وتوفير رعاية خاصة، مثل حقن محلول معقم للأطفال التغذية (الجدول 1 رقم 18) في حالة التغذية غير طبيعية. لائحة الهدافين أيضا0؛ يحدد معايير نقطة النهاية إنسانية. أم أن لا يرفض الجراء أصيب هو أفضل الرعاية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حالة غير عادية من ضعف المثانة، نفذ التدليك المثانة مرتين في اليوم حتى يتم استعادة وظيفة. ويتم ذلك عن طريق وضع الماوس في موقف ضعيف في يد واحدة وتدليك أسفل البطن برفق في اتجاه rostro الذيلية باستخدام الإصبع. </li></ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

في هذه المقالة وصفت إجراءات لإصابة SCC ولدت في مقطع P1 الفئران. ويمكن أيضا أن يتم تنفيذ نفس الإجراءات في مراحل لاحقة. أجريت الإصابات ضغط بنجاح في P5، P7، P9 و P12 (Züchner، وآخرون، مخطوطة في الإعداد). في جميع مراحل ما بعد الولادة، ويتم الحصول على التخدير العام مع isoflurane تبخيرها في الأكسجين النقي، ولكن النتيجة التخدير يعتمد إلى حد كبير على العمر. في المحاولات الأولية لP1-P4، قبل عرضه التخدير الموضعي في البروتوكول، كان من الصعب الحصول على تخدير عميق وممتد بسبب نافذة جرعة تأثير ضيق بين عدم كفاية تخدير وجرعة زائدة. وبالإضافة إلى ذلك، فقد أثيرت المخاوف المتعلقة أثر أعصاب من الأيزوفلورين في الحيوانات حديثة الولادة 27-30. مزيج من الأيزوفلورين ونتائج مخدر بوبيفاكايين المحلية في التخدير أعمق وأكثر استقرارا في حين تسمح تخفيض جرعة الأيزوفلورين بعامل 2-3. أنواع مختلفة من anestheوقد وصفت سيا للقوارض حديثي الولادة، بما في ذلك تخدير بالبرد 31،32، ولكن واحدة إزعاج محتمل للتخدير بالبرد هو تأثيره الأعصاب (التي استعرضتها 33،34)، والتي يمكن أن تعقد الجيل اصابة فعالة وقابلة للتكرار. يعتبر التخدير القائم على الباربيتورات أن يكون أقل كفاءة في الفئران حديثي الولادة بسبب انخفاض مستويات الزلال في الدم والدهون في الجسم من البالغين 35،36. على الرغم من الغازية تماما وصدمة، مرة واحدة يتم تأسيس إجراء معدل الوفيات أثناء الجراحة منخفضة. ومع ذلك، هناك خطوات حاسمة أثناء العملية التي تتطلب اهتماما خاصا لتحسين الانتعاش وبقاء الفئران تشغيلها. قضية واحدة مهمة هي لتحديد الجراء التي سيكون لها أفضل فرصة البقاء على قيد الحياة لعملية جراحية. عندما القمامة كبيرة في الحالة التغذوية للالجراء الفردية تختلف. بالإضافة إلى نزيف لا مفر منه أن يحدث أثناء الجراحة، الجراء تعمل تنفق ساعةق بعيدا عن الأم، وغالبا ما لا تشرب الحليب قبل صباح اليوم التالي. ومن ثم ميزة لتحديد الجراء التي لديها بالفعل كمية معينة من الحليب في المعدة. هذا هو مرئية بسهولة من خلال الجلد في منطقة البطن من P0 إلى P7. خلال الليلة الأولى الجرو تعمل في خطر كبير من أن نهبها من قبل الأم. خلال التطوير الأولي من هذا النموذج أكثر من نصف الفئران تعمل في عداد المفقودين في صباح اليوم التالي، مع وجود علامات واضحة من الدم في القفص. وقد تم دراسة Necrophagy، أكل لحوم البشر وقتل الأطفال في القوارض لعقود 37-40. في هذه الدراسة، تم شهد أكل لحوم البشر مرة واحدة فقط، ولكن كان يعتبر تفسيرا أكثر عرضة من necrophagy لأن الجراء التي أعيدت إلى القفص كانت عادة في مثل هذا الشكل الجيد أن الموت لأسباب طبيعية أثناء الليل يبدو غير محتمل. وهذا ما دفع فكرة استخدام وكيل الدوائية عكسها مثل الديازيبام للحد من القلق والعدوانية طن الأم (التي استعرضتها 41). حقن داخل الصفاق من الديازيبام إلى تحسن كبير في الوضع، واسقاط وفيات خلال الليلة الأولى من أكثر من 60٪ إلى أقل من 20٪. تقليل حجم القمامة التي كتبها اعدام وتعكير القمامة أقل قدر ممكن بعد عودة بعد العملية الجراحية عناصر الإضافية التي يمكن أن تستفيد منها الحيوانات تشغيلها. ومع ذلك، وترك الجراء فقط تعمل مع الأم ليست مفيدة. قد تختلف أفضل توازن من تشغيلها / الجراء unoperated وفقا للخط، ولكن لمجلس النواب وSCID-مجلس النواب الفئران ترك 4-5 الجراء تعمل (الإصابة أو صورية) جنبا إلى جنب مع 3-4 الجراء unoperated أعطى أفضل النتائج. في الشعور العام، والقيد الرئيسي من هذا النموذج اصابات النخاع الشوكي حديثي الولادة هو أن الحبل الشوكي حديثي الولادة يختلف في كثير من النواحي من الحبل الشوكي الكبار، وبالتالي قد لا توفر النتائج التجريبية التي هي مماثلة لتلك التي تم الحصول عليها من نماذج اصابات النخاع الشوكي الكبار. وتشمل هذه الخلافات الحجم الكلي و<html> حجم النخاع الشوكي، عدد الخلايا، في تمثيل أنواع معينة من الخلايا مثل الخلايا قليلة التغصن، الاستجابات المناعية غير ناضجة ودوائر العصبية غير ناضجة. ولذلك يجب أن الاستنتاجات المستخلصة من التجارب في هذا النموذج أن تدرس بعناية. من ناحية أخرى، وهذا النموذج هو ذات الصلة لسيناريو أقل التحقيق نسبيا من الأطفال اصابات النخاع الشوكي. وعلاوة على ذلك، فإن ضعف واضح فيما يتعلق نماذج اصابات النخاع الشوكي الكبار هو أيضا قوة محتملة لأنها قد تؤدي إلى توضيح آليات اللدونة أنه على الرغم موجودة بشكل ضئيل في الحبل الشوكي الكبار، يمكن أن تمثل الركيزة العلاجية إذا رد إليه اعتباره. فمن المتصور أن إعادة الأوضاع حديثي الولادة أو حتى الجنينية يمكن أن تنفذ من خلال زرع خلايا الأقل نموا أو الأنسجة أو عن طريق العلاج مع الكواشف التي تولد أنسجة البالغين مع الخصائص النمائية السابقة. باستخدام أنزيمات للقضاء على شبكات محيط بالعصبون مثال على هذا النهج الأخير 42،43. &quot;jove_content&quot;&gt; وثمة مسألة رئيسية عند إنشاء نموذج حيواني لاصابات النخاع الشوكي هو الحصول على إصابة موحدة. هذا هو جانب هام التي تم تناولها في نماذج اصابات النخاع الشوكي متعددة، على سبيل المثال، transection، تنصيف، الرواطم، ضغط البالون، وسحق الملقط، ثابت ضغط الوزن، وما إلى ذلك وفيما يتعلق تؤثر على أجهزة الهاتف، وأسفرت الجهود المبذولة في هذا الاتجاه في نماذج اصابات النخاع الشوكي في القوارض الكبار حيث يمكن التلاعب بها معلمات متعددة من تأثير مثل السرعة والقوة والمدة (التي استعرضتها 44). وثمة نهج آخر، تنطوي على أقل من المعدات، ويعمل على تعديل كير Lougheed تمدد الأوعية الدموية كليب 45،46. هذه المقاربات 2 متكاملان كما المسبار يقلد لإصابة كدمة في حين أن يقلد كليب اصابة في ضغط مع درجة معينة من نقص التروية المتزامنة. بسبب القيود حجم كبير وتزيد من ضعف الفئران حديثي الولادة، وارتفاع معدل الوفيات المرتبطة العمليات الجراحية أطول فضلا عن تكاليف جمعةoping المعدات على نطاق أصغر، وقد اختير لتطوير ضغط ولدت كليب بدلا من نهج كدمة ولدت المسبار. وقد تحقق ذلك من خلال تكييف متوفر تجاريا تمدد الأوعية الدموية المصغرة كليب لاستيعاب حجم العمود الفقري من الفئران حديثي الولادة 1. إضافة سدادة يضمن عرض ضغط موحد، وطالما أن التوتر من مقطع يضغط على الحد من سدادة، يجب أن قوة ضغط خلال المرحلة ثابتة في الحد الأدنى من العرض تختلف قليلا. ما ليست موحدة وسرعة ضغط خلال المرحلة الديناميكية، لأن هذا سوف تختلف مع تغير كليب التوتر خلال فترة المشروع. كمرحلة ثابتة للضغط تدوم أطول بكثير من مرحلة ديناميكية، وهناك دلائل تشير إلى أن نسيج الحبل الشوكي تبذل الكثير من المضادة ضد ريش مصغرة كليب، فمن المرجح أن شدة الإصابة الأكثر اعتمادا على مرحلة ثابتة. هذا، ومع ذلك، لا يزال لفحصها. جرحومن المرجح أن تعتمد على عوامل متعددة، بما في ذلك قوة ثابتة ضغط والمدة، وسرعة ضغط وإزالة الضغط، موقف ميني كليب، وعدد من الضغط على تنفيذها في نفس الموقع شدة. وهكذا، يمكن الاختلاف اندماجي في هذه المعايير يؤدي إلى توليد مجموعة من بالقسوة إصابة من ضعيف إلى حادة. وعلى الرغم من احتمال تقلب، لدينا في الدراسة التي نشرت سابقا 1 حصلنا على نتائج متسقة في النسيجية، ومستويات الفسيولوجية والسلوكية، لذلك هناك دلائل تشير إلى أن توحيد مقبول من الصعب تحقيقه. ونلاحظ أن في هذه الدراسة استخدمنا أساليب متعددة من التحقق من صحة في كل مستوى، بما في ذلك الاختبارات السلوكية مثل الهواء التنقل كما هو مبين في الشكل (5). في هذا النموذج اصابات النخاع الشوكي الوليدي إصابة قطع الغيار نسبة معينة من المحاور، وبالتالي يوفر الوضع مواتية لانتزاع اللدونة التكيف من خلال إعادة modelin-ز الاتصالات يدخر وتشكيل دوائر جديدة. وعلاوة على ذلك، منذ الماوس حديثي الولادة هي مناسبة تماما للتحقيق من قبل العديد من الطرق التجريبية، فإنه من الممكن استخدام هذا النموذج لدراسة الانتعاش وظيفية واللدونة التكيف مع نهج تكاملي، بما في ذلك الاختبارات السلوكية، إلى الوراء وتقدمي تتبع محور عصبي، المناعية، الكهربية وعالية -throughput تسجيل البصرية 1. وكمثال على ذلك، أننا قد استفادت من هذا النهج التكاملي لإثبات شبكة إعادة النمذجة على مستوى المدخلات الهابطة محددة باستخدام عالية الإنتاجية التصوير الكالسيوم في الجسم الحي السابقين الاستعدادات wholemount من جذع الدماغ والحبل الشوكي المصاب 1. هذا ويمكن زيادة دفع عن طريق استخدام أدوات علم البصريات الوراثي العصبية والصيدلة علم البصريات الوراثي لتقييم إعادة عرض من الاتصالات المشبكية بين القطعان محددة من الخلايا العصبية في العمود الفقري.

خلال العقد الماضي ، أظهرت الأدلة المتزايدة التي تم الحصول عليها من نماذج إصابة الحبل الشوكي المختلفة (SCI) أن شبكات العمود الفقري يمكن أن تعيد التنظيم تلقائيا للمساهمة في التعافي الوظيفي1-9. نتيجة لذلك ، أصبحت اللدونة التكيفية موضوعا مهما في أبحاث اصابات النخاع الشوكي. لقد ثبت أن اللدونة تشمل إعادة نمو المحاور المحفوظة ، وتنبت ضمانات محورية جديدة وتشكيل روابط متشابكة جديدة. تم الحصول على الكثير من هذه المعرفة من الدراسات السلوكية أو التشريحية على البالغة. من القيود المهمة لدراسات الحبل الشوكي للبالغين صعوبة إجراء تقييم فسيولوجي عالي الإنتاجية ، وهو أسهل في الاستعدادات الوليدية1. يتمثل أحد الاختلافات الرئيسية في أن المستحضرات الكاملة خارج الجسم الحي لجذع الدماغ والحبل الشوكي للبالغين لها قابلية منخفضة للحياة. آخر هو أن أنسجة العمود الفقري للبالغين أكثر تعتيما للضوء لأنها أكثر سمكا ونخاعية. على الرغم من أن التطورات الحديثة في التصوير في الجسم الحي (انظر على سبيل المثال ، 10-12) قد تتغلب جزئيا على هذه المشكلات ، إلا أن إمكانية إجراء التصوير عالي الإنتاجية في أي عمق ظهري بطني مرغوب فيه في مواقع متعددة على طول تحضير معين لجذع الدماغ والحبل الشوكي ممكنة حاليا فقط عند حديثي الولادة. تسهل الحالة غير الناضجة لتكوين النخاع المحوري في الحبل الشوكي حديثي الولادة التسجيل البصري عالي الإنتاجية خارج الجسم الحي ، مما يسمح بإجراء تقييم ديناميكي للاتصالات المشبكيةالوظيفية 13-17. إلى جانب مراسلي الكالسيوم المشفرين وراثيا وأدوات التحفيز البصري الوراثي وعلم الأدوية ، يمكن أن تساهم الأساليب البصرية في فهم أعمق للآليات الكامنة وراء اللدونة التكيفية.
تشير التقديرات إلى أن ما بين 1-10٪ من جميع إصابات الحبل الشوكي تؤثر على الرضع والأطفالالذين تتراوح أعمارهم بين 18 و 22 عاما. على عكس اصابات النخاع الشوكي لدى البالغين ، فإن التسبب في النخاع الشوكي وإمكانية التعافي التلقائي في اصابات النخاع الشوكي لدى الأطفال أقل دراسة. وبالتالي ، فإن استخدام نموذج اصابات النخاع الشوكي لحديثي الولادة يمكن أن يوفر مزيدا من التبصر في اصابات النخاع الشوكي لدى الأطفال ويساهم في فهم أفضل لآليات المرض والتعافي المعنية. علاوة على ذلك ، يعتقد أن اللدونة بعد اصابات النخاع الشوكي التي تدعم التعافي الوظيفي في الحبل الشوكي للبالغين تنطوي على الأقل جزئيا على نفس الآليات التي تحكم تطور الجهاز العصبي المركزي مثل نمو المحاور العصبي والتفرع وتشكيل نقاط الاشتباك العصبي الجديدة23-26. وبالتالي ، فإن استخدام نموذج اصابات النخاع الشوكي لحديثي الولادة يمكن أن يوفر رؤى مهمة حول الآليات التي تعمل أيضا في الحبل الشوكي للبالغين ، أو التي يمكن إعادتها في الحبل الشوكي للبالغين (على سبيل المثال عن طريق زرع خلايا أو أنسجة جنينية أو أنسجة مصنوعة من جديد من الخلايا الجذعية متعددة القدرات) لتسهيل الشفاء.
 وبالتالي يوفر الفأر حديث الولادة منصة لنهج تكاملي متعدد المنهجيات للتحقيق في اللدونة التكيفية بعد إصابة الحبل الشوكي ، حيث يمكن استخدام مزيج من الأساليب السلوكية والفسيولوجية والتشريحية والجزيئية والجينية بسهولة. يعد إنشاء نماذج موحدة لإصابات حديثي الولادة خطوة مهمة في تنفيذ مثل هذه الدراسات.

<table><tbody><tr><td>حقنة بلاستيكية (30 أو 50 &nbsp; مل)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>طبق بتري بلاستيكي (150 × 25 &nbsp ؛ مم)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Fortec isoflurane مبخر</td><td>Cyprane</td><td></td><td>نحن نستخدم والجهاز القديم خارج الإنتاج ، تحقق من الرابط للجهاز الأحدث</td></tr><tr><td>Yasargil تمدد الأوعية الدموية المؤقت مصغرة</td> <td>كليب &AElig ؛ معرف</td> أنابيب البولي إيثيلين ذات التجويف الدقيق sculap <td>FE681K</td><td></td></tr><tr><td>0.58 & nbsp; مم ، OD 0.96 &nbsp ؛ مم</td><td>سميث ميديكال</td><td>800/100/200</td><td></td></tr><tr><td>إيزوفلوران (فورين) أبوت</td> جي إم <td>بي إتش وشركاه كي جي</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ماركين (بوبيفاكين) أسترا</td> <td>زينيكا</td><td></td><td></td></tr><tr><td>إنسولين سيرينج 0.3 & nbsp ؛ مل 30 &nbsp; ز × 8 &nbsp ؛ مم</td><td>VWR</td><td>80086-442</td><td></td></tr><tr><td>سكين دقيق فائق الدقة 5 &nbsp ؛ مم</td> أدوات <td>العلوم الدقيقة</td><td>المتطورة 10315-12</td><td></td></tr><tr><td>ملقط Graefe ناعم للغاية &ndash; 0.5&nbsp; مم تلميح</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>1153-10</td><td>ليست ضرورية حقا ، غالبا ما تكون الأسنان كبيرة جدا</td></tr><tr><td>ملقط SuperGrip أدوات</td><td>العلوم الدقيقة</td> المستقيمة <td>00632-11</td><td>ملقطان ضروريان</td></tr><tr><td>إسفنجوستان خاص 70 × 50 × 1 & nbsp ؛ مم</td><td>مقص سبرينغ Ferrosan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vannas &ndash; 2&nbsp; مم شفرات أدوات</td><td>العلوم الدقيقة</td><td>المستقيمة 15000-03</td><td></td></tr><tr><td>Vario Clip تطبيق الملقط</td><td>Aesculap</td><td>FE502T</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 6 & ndash ؛ 0 (إيثيكون)</td><td>حامل إبرة</td><td></td> جونسون آند جونسون J105G <td></td></tr><tr><td>ديثريتش</td><td>11-510-20</td><td></td>Temgesic (بوبرينورفين)Schering-Plough Stesolid (diazepam)Actavis المعروف أيضا باسم الفاليوم Pedamix Fresenius Kabi Klorhexidinsprit (غلوكونات الكلورهيكسيدين)Fresenius <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> كابي</td><td>D08A C02</td><td></td></tr></tbody></table>

وحديثي الولادة ماوس الحبل الشوكي ضغط إصابة نموذج

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

إصابة الحبل الشوكي (النخاع الشوكي) وعادة ما يسبب العجز العصبية المدمرة، لا سيما من خلال الأضرار التي لحقت الألياف تنازلي من الدماغ إلى الحبل الشوكي. وتركز المساحة الحالية الرئيسية للبحث في آليات المرونة التكيفية التي تكمن وراء الانتعاش وظيفية عفوية أو بفعل التالية اصابات النخاع الشوكي. وتفيد التقارير الانتعاش وظيفية عفوية أن يكون أكبر في وقت مبكر من الحياة، مما يثير تساؤلات مثيرة للاهتمام حول كيفية تأثير التغيرات اللدونة التكيف مع تطور الحبل الشوكي. لتسهيل التحقيق في هذه الدينامية، وقد وضعنا نموذجا اصابات النخاع الشوكي في الماوس حديثي الولادة. نموذج له أهمية للأطفال اصابات النخاع الشوكي، التي تدرس القليل جدا. بسبب اللدونة العصبية في البالغين تتضمن بعض الآليات نفسها كما اللدونة العصبية في وقت مبكر من الحياة 1، وهذا النموذج من المحتمل أن يكون بعض الأهمية أيضا لتعليم الكبار اصابات النخاع الشوكي. نحن هنا وصف الإجراء بأكمله لتوليد اصابة في استنساخه انضغاط الحبل الشوكي (SCC) في الماوس حديثي الولادةفي وقت مبكر بعد الولادة (P) اليوم يتحقق 1. SCC عن طريق إجراء الثقب على مستوى العمود الفقري معين (هو موضح هنا في مستويات الصدرية 9-11) ثم استخدام تعديل Yasargil تمدد الأوعية الدموية المصغرة كليب لضغط بسرعة وضغط على الحبل الشوكي . كما هو موضح سابقا، والفئران حديثي الولادة المصابين يمكن اختبار لعجز السلوكية أو التضحية لخارج الجسم الحي تحليل الفسيولوجي للاتصال متشابك باستخدام تقنيات التسجيل البصري الكهربية والإنتاجية العالية 1. وقد أظهرت في وقت سابق والمستمرة الدراسات باستخدام تقييم السلوكية والنفسية لذلك، انخفاض دراماتيكي حاد في الحركة hindlimb يتبعه انتعاش وظيفي كامل في غضون 2 أسابيع، وأول دليل على التغيرات في الدوائر الوظيفية على مستوى حددت تنازلي الاتصالات المشبكية 1.

العمود الفقري إصابة انضغاط الحبل وفقدان وظيفة كما هو موضح سابقا، عن طريق تحسين الإجراءات قبل الجراحة والجراحة وبعد العملية الجراحية، وهذا نموذج ضغط اصابات النخاع الشوكي يمكن استنساخه في الماوس حديثي الولادة ويمكن الحصول على 1. سدادة البولي ايثيلين وضعت على شفرة واحدة من كليب (الشكل 2B و C) يمنع اغلاق تام من مقطع ويحافظ على المسافة بين شفرة باستمرار في حوالي 230 ميكرون. عكس اتجاه مقطع في الضغط بين النتيجتين في الإصابة متناظرة، كما تقرره عقابيل النسيجي (الشكل 5A و 1). مباشرة بعد إزالة ميني كليب، ونسيج الحبل الشوكي المضغوطة يصبح أكثر قتامة بسبب كدمة النزفية وذمة. مراقبة أقسام المسلسل من الحبل الشوكي المصاب الملون ليوزين والهيماتوكسيلين بالفعل يوم واحدإصابة fter يكشف تدهور تدريجي في الأنسجة عند الاقتراب من مركز الآفة (الشكل 5A). وجود تجاويف داخل النخاع أو الدم في الآفة ليس من غير المألوف. التقييم السلوكي، على سبيل المثال من خلال تتبع مسارات hindlimb تحت غير الوزن الظروف تحمل بضع ساعات بعد الجراحة، ويظهر انخفاض الكبير في الحركة hindlimb في SCC المصابين الفئران بالمقارنة مع الفئران التي تحكم الزائفة التي يتم تنفيذ سوى الثقب (الشكل 5B و 1) . هذا الاختبار يمكن أن تتكرر حتى الفأر هو قادرة على أداء الاختبارات السلوكية الأخرى التي تتطلب تحمل الوزن الخاص بها 1. وفيات والتعافي بعد الجراحة هي وفيات أثناء العملية ويرجع ذلك أساسا إلى توقف التنفس وتوقف القلب الناجم عن ارتفاع تركيز الأيزوفلورين اللازمة لتحقيق anesthesi كافيةا. إدخال مخدر بوبيفاكايين المحلي في بروتوكول الجراحي يسمح الحد من تركيز الأيزوفلورين وبالتالي يقلل بشكل كبير من معدل الوفيات. في سلسلة التجارب الأخيرة بما في ذلك أكثر من 20 حيوانا، وكان معدل الوفيات أثناء العملية معدومة. في المقابل، أثرت البقاء على قيد الحياة بعد الجراحة بشكل رئيسي عن طريق قبول من الفئران التي تديرها والدتهما. حدث تحسن كبير عندما تم تخفيض القلق والعدوانية من خلال توفير حقنة واحدة من الديازيبام (IP 8 جم / كجم من وزن الجسم) للأم قبل أن تعود الفئران تعمل لالقمامة 1. يمكن رصدها القبول والتعافي بعد العملية الجراحية من الفئران التي تديرها وجود الحليب في المعدة. المعدة من الماوس P1-P7 الذي يحتوي الحليب في حالة سكر بيضاء بشكل واضح وضوحا من خلال الجلد في منطقة البطن (الشكل 3). مقارنة التغذية في تشغيلها، ومراقبة صورية والفئران unoperated مفيدة لتقييم الحالة التغذوية للاصاباتالفئران د. تقييم نمو تعمل مقابل الفئران unoperated يدل على أنه على الرغم من فقدان الوزن قليلا خلال اليوم الأول بعد الجراحة، ومنحنى نمو الفئران تعمل طبيعتها بسرعة بعد ذلك (الشكل 6). لم يكن لوحظ الوفيات المتعلقة اضطرابات المثانة أو العدوى حتى في الفئران درس لطالما 7 أسابيع. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> عدد في الشكل. 2 </td><td> اسم </td><td> المصنع / مزود </td><td> مرجع # </td><td colspan="3"> صلة </td><td> التعليق </td></tr><tr><td> 1 </td><td> حقنة بلاستيكية (30 أو 50 مل) </td><td></td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td> البلاستيك طبق بيتري (150 × 25 مم) </td><td></td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td> المرذاذ الأيزوفلورين FORTEC </td><td> Cypraشمال شرق </td><td></td><td colspan="3"> http://www.mssmedical.co.uk/products/new-vaporisers/ </td><td> نحن نستخدم والجهاز القديم من الإنتاج، والتحقق من الرابط لجهاز أحدث </td></tr><tr><td> 4 ا </td><td> Yasargil تمدد الأوعية الدموية مؤقتة مصغرة كليب </td><td> أيسكولاب </td><td> FE681K </td><td colspan="3"> http://www.aesculapusa.com/assets/base/doc/DOC697_Rev_C-Yasargil_Aneurysm_Clip.pdf </td><td></td></tr><tr><td> 4B </td><td> تتحمل غرامة البولي ايثيلين الشعرية معرف أنابيب 0.58 ملم، OD 0.96 ملم </td><td> الحدادون الطبية </td><td> 800/100/200 </td><td colspan="3"> http://www.smiths-medical.com/industrialproducts/8/39/ </td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td> الأيزوفلورين (Forene) </td><td> أبوت GMBH &amp; Co. KG ل </td><td></td><td colspan="3"> http://www.life-sciences-europe.com/product/forene-abbott-gmbh-wiesbaden-group-narcotic-germany-west-2001-1858.html </td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td> Marcain (بوبيفاكايين) </td><td> استرا زينيكا </td><td></td><td colspan="3"> http://www.astrazeneca.co.uk/medicines01/neuroscience/Product/marcaine </td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> أنسولين حقنة 0.3 مل 30 G العاشر 8MM </td><td> VWR </td><td> 80086-442 </td><td colspan="3"> https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp؟product_id=4646138 </td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td> الترا مايكرو الجميلة سكين 5 ملم المتطورة </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 10315-12 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp؟Suchtyp= كات وsuchkatalog = 0019900000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td> الملقط الجميلة غريف إضافية - 0.5 ملم تلميح </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 1153-1110 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp؟Suchtyp= كات وsuchkatalog = 0055700000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td> ليس من الضروري حقا، في كثير من الأحيان الأسنان كبيرة جدا </td></tr><tr> &lt;td&gt; 10 </td><td> ملقط SuperGrip مستقيم </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 00632-11 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp؟Suchtyp= كات وsuchkatalog = 0053500000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td> ضرورية اثنين ملقط </td></tr><tr><td> 11 </td><td> Spongostan الخاصة 70 × 50 × 1 مم </td><td> FERROSAN </td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 12 </td><td> Vannas الربيع مقص - 2 شفرات ملم على التوالي </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 15000-03 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp؟Suchtyp= كات وsuchkatalog = 0012800000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td></td></tr><tr><td> 13 </td><td> فاريو كليب تطبيق الملقط </td><td> أيسكولاب </td><td> FE502T </td><td colspan="3"> http://www.aesculapusa.com/assets/base/doc/DOC697_Rev_C-Yasargil_Aneurysm_Clip.pdf </td><td></td></tr><tr><td> 14 </td><td> Vicryl 6-؛ 0 ([إثيكن) </td><td> جونسون وجونسون </td><td> J105G </td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 15 </td><td> Diethrich حامل الإبرة الصغيرة </td><td></td><td> 11-510-20 </td><td colspan="3"> http://trimed-ltd.com/Products/Suture-Instruments/Micro-Needle-Holders-With-Tungsten-Carbide-Inserts/Ref-11-29.html </td><td></td></tr><tr><td> 16 </td><td> Temgesic (البوبرينورفين) </td><td> شيرينغ بلاو </td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 17 </td><td> Stesolid (ديازيبام) </td><td> ACTAVIS </td><td></td><td colspan="3"></td><td> المعروف أيضا باسم الفاليوم </td></tr><tr><td> 18 </td><td> Pedamix </td><td> فريزينيوس كابي </td><td></td><td colspan="3"> http://www.helsebiblioteket.no/retningslinjer/pediatri/mage-tarm-lever-ern%C3%A6ring/parenteral-ern%C3%A6ring </td><td></td></tr><tr><td> 19 </td><td> Klorhexidinsprit (غلوكونات الكلورهيكسيدين) </td><td> Fresenالناهية الكعبي </td><td> D08A C02 </td><td colspan="3"> http://www.felleskatalogen.no/medisin/klorhexidinsprit-fresenius-kabi-klorhexidinsprit-farget-fresenius-kabi-fresenius-kabi-560639 </td><td></td></tr></tbody></table> الجدول 1. قائمة الأدوات والمعدات اللازمة لتوليد اصابة في العمود الفقري انضغاط الحبل يحركها كليب في الماوس حديثي الولادة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig1.jpg" /> الشكل 1. تخطيطي من الإعداد التخدير. ويقدم هذا التخطيطي الإعداد التخدير تصميم الماوس حديثي الولادة، مع غرفة النوم للتخدير الأولي وجهاز قناع الأنف لاستمرار التخدير أثناء الجراحة. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig2.jpg" /> الشكل 2. الأدوات الرئيسية وكليب الضغط. (أ) الأدوات المستخدمة أثناء العملية. الأرقام تتوافق مع الشرح المستخدمة في الجدول 1. (B و C) وYasargil تمدد الأوعية الدموية مؤقتة مصغرة كليب مع غيض من كل شفرة قطع يدويا إلى حوالي 150 ميكرون سمك. يتم وضع سدادة مصنوعة من شريحة من البولي ايثلين أنابيب (الجدول 1) على واحد من شفرات لمنع إغلاق كامل للمقطع. شريط النطاق: 2 مم. التطبيق: قضيب كليب (رقم 12 في ألف)؛ القديس: سدادة <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53498/53498fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig3.jpg" /> الرقم 3. لاندمارك للتقييم قبل الجراحة من مستوى العمود الفقري في الماوس النواب حديثي الولادة. (A) عرض الوحشي على فأرة الحاسوب P1 مجلس النواب مع الحليب الأبيض في الصورة<html> tomach. الجزء منقاري من المعدة يتوافق مع مستوى العمود الفقري T12-T13. (ب) P1 مجلس النواب الماوس تحت التخدير في وضعية الرقود. وعلى الرغم من صعوبة تصور من في الفقرة (أ)، والمعدة مليئة الحليب هو متعارف عليها. الجزء منقاري من المعدة يشير T12-T13 مستوى العمود الفقري. الحانات الحجم: 0.5 سم. <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig4.jpg" /> الشكل 4. ظهري الثقب. (A) تشريح عضلات مجاورة للفقرة. لاحظ أنه في هذا العصر عملية في العمود الفقري متخلفة. (ب) باجتزاء متقاطع من الصفيحة مع مقص رقيقة. (C) مقدمة من شفرة واحدة من ملقط رقيقة بين الصفيحة والجافية. يظهر نقطة الدخول بحلول رأس السهم. (D) إزالة الصفيحة. شريط النطاق: 2 مم. ملفات / ftp_upload / 53498 / 53498fig5.jpg &quot;/&gt; الرقم 5. التركيب النسيجي وسلوكه بعد إصابة ضغط الحبل الشوكي في P1. (A) يوزين والهيماتوكسيلين تلطيخ في أقسام الحبل الشوكي من الفأرة المصاب (1 يوما بعد الإصابة) على مسافة مختلفة من مركز الزلزال الاصابة. (ب) لاحظت آثار التمثيلية للforelimb وhindlimb مسارات 6 ساعات بعد الإصابة أو بعد استئصال الصفيحة الفقرية سيطرة صورية. آثار على رأس تمثل مسارات ينظر إليها من وجهة نظر الجانبي للحيوان. آثار في أسفل تمثل مسارات ينظر اليها من الجانب البطني للحيوان. انظر أيضا 1. شريط مقياس: 250 ميكرون. DH: القرن الظهري. L، غادر. R: اليمنى. SCC: انضغاط الحبل الشوكي. VH: القرن البطني <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53498/53498fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <iبديل ملغ = &quot;الشكل 6&quot; SRC = &quot;/ ملفات / ftp_upload / 53498 / 53498fig6.jpg&quot; /&gt; الشكل 6. منحنيات النمو مقارنة. الرسم البياني يبين زيادة الوزن من unoperated وSCC الفئران المصابين من يوم ما بعد الولادة 1 إلى يوم بعد الولادة 9.

توضح هذه المقالة طريقة لتوليد إصابة ضغط الحبل الشوكي القابلة للتكرار (SCI) في فأر حديثي الولادة. يوفر النموذج منصة مفيدة لدراسة آليات اللدونة التكيفية التي تكمن وراء الانتعاش الوظيفي التلقائي.

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إحداث إصابة انضغاطية في النخاع الشوكي بشكل قابل للتكرار في فأر حديث الولادة. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تخدير الفأر تخديراً عميقاً، ثم إجراء عملية استئصال الصفيحة الفقرية الظهرية للكشف عن النخاع الشوكي.وأخيرًا، من خلال إحداث إصابة انضغاطية. لقد أنشأنا مؤخرًا نموذجًا للفئران حديثة الولادة لإصابة الحبل الشوكي، وأثبتنا أن الفئران حديثة الولادة تظهر درجة مذهلة من اللدونة التكيفية. إن دراسة هذه الآلية الكامنة وراء التعافي قد توفر رؤى مهمة يمكن استخدامها في علاج إصابات الحبل الشوكي.في هذا الفيديو، سنوضح كيفية إجراء إصابة انضغاط الحبل الشوكي في فأر يبلغ من العمر يوماً واحداً. يتضمن هذا الإجراء الجراحي التخدير، واستئصال الصفيحة الفقرية، وعمليتي ضغط فوق الجافية باستخدام المشابك. التحضير للجراحة.تُجرى الجراحة تحت مجهر ستيريو. ضع وسادة تدفئة تحت المجهر؛ فمن الضروري الحفاظ على دفء الجرو لتجنب الوفاة المفاجئة أثناء الجراحة.ضع بطانية جراحية أو ورقة مختبرية ناعمة ونظيفة وكبيرة الحجم فوق وسادة التدفئة. ولتسكين الآلام قبل الجراحة، قم بتجهيز حقنة إنسولين مقاس 30 gauge وسعة 0.3 milliliters، مملوءة بالمخدر الموضعي Marcaine المخفف بمحلول PBS معقم، ليصل التركيز النهائي إلى 2.5 milligrams per milliliter. أما بالنسبة لشق الجلد وإزالة العضلات واستئصال الصفيحة الفقرية، فاستخدم سكيناً جراحياً دقيقاً وملقطاً دقيقاً ومقصات استئصال القزحية الدقيقة.لاحظ أننا نستخدم هنا أيضاً ملقطاً قمنا بثني أطرافه لتكوين أسنان. وتؤدي هذه الملاقط عملاً أفضل من الملاقط المسننة المتوفرة تجارياً لأن الأسنان يجب أن تكون صغيرة جداً. أما بالنسبة لضغط الحبل الشوكي، فاستخدم مشبك تمدد الأوعية الدموية المؤقت Yasargil Miniclip معدلاً بشكل خاص، والذي سنقوم بوصفه لاحقاً.يلزم أيضاً توفير قطعة صغيرة من أنبوب شعري بلاستيكي لصنع سدادة تمنع الإغلاق التام للمشبك، بالإضافة إلى أداة وضع المشبك لتثبيته. وللخياطة، استخدم حامل إبر ومقصاً صغيراً لقص الخيط. أما بالنسبة لعلاج الألم، فقم بتخفيف Temgesic في PBS معقم، ليصل التركيز إلى 0.03 milligrams per milliliter.تتضمن إصابة الحبل الشوكي ضغطاً مدفوعاً بمشبك، باستخدام مشبك Yasargil Temporary Aneurysm Miniclip. قبل الاستخدام، يجب تعديل المشبك ميكانيكياً عن طريق تقليل سماكة الشفرات لتصل إلى 150 micrometers باستخدام حجر شحذ. وقبل الجراحة مباشرة، يتم قطع قطعة قصيرة من الأنابيب البلاستيكية ووضعها فوق إحدى شفرات المشبك.تعمل الأنابيب كسدادة لمنع الإغلاق الكامل للمشبك. التخدير وتسكين الآلام. بالنسبة للتخدير الغازي، نستخدم مبخر suprane متصلاً بأسطوانة أكسجين.يعتبر الإيزوفلوران (Isoflurane) هو المخدر الذي يتم تبخيره في أكسجين نقي. ولتوزيع خليط الإيزوفلوران والأكسجين على الفأر، تحتاج إلى صنع قناع أنفي مخصص لحديثي الولادة. ونظراً لصغر حجم الفئران حديثة الولادة، يمكن صنع القناع من طرف سرنجة، والتي تعمل كمدخل للأنابيب البلاستيكية المتصلة بمخرج جهاز التبخير.قم بحفر ثقب صغير على جانب القناع لتوصيل أنبوب إخلاء ينتهي إما بمضخة فراغ منظمة، مع وحدة تجميع، أو ببساطة داخل خزانة استرداد الغازات (fume hood). اصنع غرفة فائض للتخدير باستخدام طبق بتري بلاستيكي بمقاس 150 في 25 ملليلتر. وفي أحد جوانبه، اصنع ثقباً كبيراً بما يكفي لمرور رأس الفأر.في الجانب المقابل، اصنع ثقبين أصغر بقطر الأنبوب البلاستيكي. وأخيراً، اصنع ثقباً للإخلاء، يكون أصغر من الثقوب الأخرى، في الجزء العلوي من الطبق. اقطع طرف رأس ماصة سعة 250 microliter وأدخله في هذا الثقب الأخير.تعمل طرف الماصة كوصلة لأنبوب التفريغ المتصل بجهاز تفريغ مضبوط على ضغط سلبي طفيف. وباستخدام الصلصال الاصطناعي (Plasticine)، قم بتثبيت القناع داخل فتحة رأس الفأر مباشرة. وباستخدام الشريط اللاصق أو الصلصال الاصطناعي، قم بتثبيت الأنابيب البلاستيكية بسقف الغرفة، مع التأكد من وضع الأنابيب بشكل صحيح في الفتحات المناسبة.ضع الحجرة على البطانية الجراحية تحت المجهر. يظهر النظام بأكمله في هذا المخطط. يتم وضع صنبور إيقاف ثلاثي الاتجاهات عند مخرج المبخر.هنا، يكون المسار إلى غرفة النوم مفتوحاً، بينما يكون المسار إلى القناع مغلقاً، مما يسمح بوضع الفأر في غرفة النوم لبدء عملية التهدئة. ويؤدي تدوير الصنبور ثلاثي الاتجاهات إلى اليمين إلى السماح بتدفق الغاز إلى القناع وإغلاق المسار المؤدي إلى غرفة النوم. وفي هذا التكوين، يمكن نقل الفأر إلى القناع.يتم إزالة تسرب الغاز بواسطة تفريغ الهواء من غرفة التدفق الزائد. اختر جرواً من الفئران كان يشرب الحليب مؤخراً، وهو ما يستدل عليه باللون الأبيض المرئي من خلال الجلد. ضع الجرو في غرفة النوم وأدخل بخار Isoflurane بتركيز 4% لتحقيق تخدير سريع.انقل الجرو إلى القناع. ضع خطم الفأر بعناية داخل القناع لضمان التعرض الكافي للغاز المخدر. أدر صمام التوقف ثلاثي الاتجاهات لتوجيه الغاز نحو القناع.احقن 50 µL من Marcaine بتركيز 2.5 mg/mL تحت الجلد في موقع الجراحة المطلوب. توخَّ الحذر لعدم الحقن بعمق زائد، حيث يمكن إصابة الأوعية الدموية بسهولة، كما أن دخول Marcaine إلى وعاء دموي يعد أمراً مميتاً. امسح فائض Marcaine باستخدام ضماطة معقمة صغيرة.استئصال الصفيحة الفقرية الظهرية. خفّض تركيز الـ Isoflurane إلى 1% أو 2%. بعد بضع دقائق، اثقب الجلد باستخدام سكين دقيق وأحدث فتحة نقل بطول 8 إلى 9 mm عن طريق سحب الجلد بلطف في اتجاه من المنخري إلى الذيلي.تعتبر الفتحة الانتقالية أكثر ملاءمة وتوفر وصولاً جانبياً أفضل لإجراء عملية استئصال الصفيحة الفقرية. قم بإبعاد حواف الشق الجلدي عن الأنسجة الكامنة عن طريق إدخال قطع من الإسفنج الطبي (spongistatin) تحت الجلد في الاتجاهين الرأسي والذنبي للشق. قم بقص العضلات أمام الفقرية باستخدام مقص رفيع للكشف عن العمود الفقري.لاحظ أن النتوء الشوكي لا يكون مكتمل النمو في حديث الولادة. حدد الخط الناصف واقطع الصفيحة عرضياً باستخدام المقص الرفيع. احرص على عدم القطع بعمق زائد، لأن ذلك قد يؤدي إلى تلف الجافية أو حتى النخاع الشوكي.ضع أحد طرفي ملقط رفيع بعناية بين الصفيحة والصلابة. أمسك الصفيحة بإغلاق الملقط وارفعها بحذر حتى تنفصل، مع الحفاظ على سلامة الصلابة. كرر هذه الخطوة من مرتين إلى ثلاث مرات لإجراء استئصال صفيحي يمتد من قطعة إلى قطعتين.يتم التحكم في النزيف باستخدام قطع صغيرة من الإسفنج الجراحي (spongistatin). وباستخدام الملقط الرفيع كقارض عظمي، تُزال أجزاء من المفاصل الوجيهية بشكل ثنائي الجانب لتوفير مساحة كافية لوضع ملقط تمدد الأوعية الدموية المصغر المعدل (modified aneurysm miniclip) داخل القناة الفقرية. وغالباً ما تؤدي هذه الخطوة إلى حدوث نزيف يمكن التحكم فيه باستخدام قطع صغيرة من الإسفنج الجراحي (spongistatin).لتحسين الرؤية، قد يكون من المفيد أحياناً الشطف باستخدام PBS معقم ودافئ، بدرجة حرارة 37 درجة مئوية. إحداث إصابة بضغط الحبل الشوكي. افتح المشبك وضع الشفرات على جانبي الحبل الشوكي في المساحات الموجودة بين المفاصل الوجيهية والحبل الشوكي.تأكد من إدخال الشفرات بعمق كافٍ لتشمل الجزء البطني من النخاع الشوكي. أغلق الملقط بسرعة مع تثبيت أداة التطبيق في مكانها لتجنب انزلاق الملقط للخلف. وبعد مرور 15 ثانية، حرر الملقط بسرعة.نظف الجرح باستخدام spongistatin. ولتحقيق ضغط متماثل، اعكس الشفرات وقم بإجراء عملية ضغط ثانية لمدة 15 ثانية في الاتجاه المعاكس. الخياطة. قم بإزالة قطع spongistatin التي وُضعت تحت الجلد في بداية الجراحة وأغلق الجلد باستخدام غرز 6.0.احقن 0.05 milliliters من Temgesic بتركيز 0.03 milligrams per milliliter تحت الجلد باستخدام حقنة إنسولين مقاس 30 gauge، ثم ضع الجرو في بيئة محكومة درجة الحرارة عند 30 درجة مئوية لبضع ساعات. وللحد من السلوك العدواني للأم تجاه الجرو الذي خضع للعملية خلال الليلة الأولى بعد الجراحة، قم بتحضير محلول من Diazepam مخفف في PBS نظيف بتركيز 0.1 milligrams per milliliter للحقن داخل الصفاق بجرعة ثمانية غرامات لكل كيلوغرام. النتائج.كما يظهر في هذا الرسم البياني، بعد مرور ست ساعات من ضغط الحبل الشوكي، وفي المستويات الصدرية السفلية، تكون الأطراف الخلفية للفئران المصابة مصابة بالشلل، بينما لا تكون الأطراف الأمامية كذلك. وفي حالة حيوانات المجموعة الضابطة (sham control)، التي خضعت فقط لعملية استئصال الصفائح الفقرية، تكون كل من الأطراف الخلفية والأمامية ذات حركة عالية. ويظهر مقطع الحبل الشوكي وجود بقايا دم في موقع الإصابة.بالإضافة إلى ذلك، تكون الأنسجة شفافة، مما يشير إلى فقدان الأنسجة، وهو ما يؤدي غالباً إلى تكوين فجوة بعد عدة أيام. الخلاصة. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون لديك معرفة جيدة بكيفية إحداث إصابة بضغط الحبل الشوكي في فأر حديث الولادة. وتكمن ميزة استخدام الفئران حديثة الولادة في إمكانية استخدام طرق محددة لدراسة اللدونة التكيفية، وهي طرق لا يمكن تطبيقها على الفئران البالغة.بالإضافة إلى ذلك، يوفر النموذج منصة لاختبار النهج العلاجية، مثل زراعة الخلايا الجذعية.

a-neonatal-mouse-spinal-cord-compression-injury-model

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

المصدر: Elzat، E.Y.Y.، وآخرون، إنشاء نموذج إصابة الحبل الشوكي لكدمة الفئران بناء على تقنية طفيفة التوغل. J. Vis. Exp. (2022).يوضح هذا الفيديو طريقة إحداث إصابة كدمة على مستوى T9 في نموذج فأر ، باستخدام منصة متحدة المحور لإصابة الحبل الشوكي. يتم إسقاط الوزن على الحبل الشوكي على مستوى T9 مما يؤدي إلى كدمة تسبب على الفور تغير لون الأنسجة وتورمها.

إحداث كدمة في الحبل الشوكي في نموذج فأر باستخدام منصة متحدة المحور لإصابة الحبل الشوكي

المصدر: لاكشمان ، ن. ،  وآخرون . اختبار الغلاف العصبي لتقييم تنشيط الخلايا الجذعية العصبية الذاتية في نموذج فأر للحد الأدنى من إصابة الحبل الشوكي.  J. Vis. Exp.  (2018). يوضح هذا الفيديو تنشيط وهجرة الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) في نموذج إصابة الحبل الشوكي للفأر. لفضح الحبل الشوكي ، تتم إزالة فقرة من المنطقة الصدرية من العمود الفقري من فأر مخدر. ثم يتم إنشاء إصابة سطحية في المادة البيضاء للحبل الشوكي باستخدام إبرة مثنية تحافظ على القناة المركزية. بعد الإصابة ، يتم تنشيط الخلايا العصبية المحيطة...

 نموذج الحد الأدنى من إصابة الحبل الشوكي لدراسة تنشيط الخلايا الجذعية العصبية وهجرتها

المصدر: Kumar, S., et. al.  نموذج الفأر لتقرحات الضغط بعد إصابة الحبل الشوكي. J. Vis. Exp. (2019) يوضح هذا الفيديو تحريضا مفصلا لإصابة الحبل الشوكي في الفئران. يتم تشريح الفأر المخدر لكشف فقرات T9-T10 ، وإزالة عملياتها الشائكية. ثم يتم تمرير الحبل الشوكي المكشوف لإحداث الإصابة. ثم يتم إغلاق المنطقة الجراحية ، ويسمح للفأر بالتعافي.

إنشاء نموذج فأر مصاب بإصابة في الحبل الشوكي

إصابة الحبل الشوكي هي حالة الصدمة التي تسبب الاعتلال الشديد وارتفاع معدل الوفيات. في هذا العمل ونحن تصف بالتفصيل نموذج كدمة من إصابة الحبل الشوكي في الفئران تليها زرع الخلايا الجذعية العصبية.

العصبية زرع الخلايا الجذعية في التجريبية Contusive نموذج من إصابة الحبل الشوكي

يجب أن تكون نماذج إصابات الحبل الشوكي  قابلة للتكرار بدرجة كبيرة. نوضح أن نموذج ضغط الملقط المعاير لإصابة الحبل الشوكي هو طريقة جراحية سهلة الاستخدام لإحداث إصابات قابلة للتكرار في الحبل الشوكي للفئران.

معايرة الملقط نموذج من الحبل الشوكي ضغط الإصابات

نحن نقدم الأنسجة القائم على النزوح الكائن نموذج إصابة الحبل الشوكي التي يمكن أن تنتج إصابة الحبل الشوكي متناغمة متسقة في الفئران الكبار.

A النزوح القائم على النزوح النخاع الشوكي نموذج إصابة في الفئران

يصف هذا البروتوكول كيفية إنشاء عملية استئصال لامينكومي دقيقة للتحريض على إصابة الحبل الشوكي المستقرة من نوع الترانسكشن في نموذج الماوس ، مع الحد الأدنى من الأضرار الجانبية لأبحاث إصابة الحبل الشوكي.

تحريض كامل من إصابة الحبل الشوكي من نوع الترانصيب في الفئران

تعمل التقنيات طفيفة التوغل وجهاز مختبري بسيط على تحسين استنساخ نموذج إصابة الحبل الشوكي عن طريق تقليل الأضرار الجراحية لحيوانات التجارب والسماح بصيانة التشكل التشريحي. هذه الطريقة جديرة بالاهتمام لأن النتائج الموثوقة والإجراءات القابلة للتكرار تسهل التحقيقات في آليات تعويض المرض.

إنشاء نموذج إصابة الحبل الشوكي لكدمة الفأر بناء على تقنية طفيفة التوغل

أدى البروتوكول الحالي الذي يحاكي متلازمة الحبل المركزي (CCS) في الفئران إلى تحسين قابلية التكرار وتقليل أضرار التشغيل لحيوانات التجارب ، وتجنب تعطيل البنية التشريحية بشكل مفرط. الاستراتيجية في هذه الدراسة مفيدة لأنها تسمح بالبحث في آليات الإصابة من خلال تحقيق نتائج متسقة.

إنشاء نموذج متلازمة الحبل المركزي في الماوس C57BL / 6J

يظهر هنا جهاز كدمة آلي جديد لإصابة الحبل الشوكي للفئران ، والذي يمكنه إنتاج نماذج كدمة إصابة الحبل الشوكي بدقة بدرجات متفاوتة.

نموذج الصدمة الآلي لإصابة الحبل الشوكي الطارئ في الفئران

تعلم إجراء إصابة ضغط الحبل الشوكي في فئران حديثة الولادة باستخدام تقنية الضغط بالمشبك المعدّل. يتيح هذا النموذج دراسة اللدونة التكيفية وآليات التعافي العصبي.

وحديثي الولادة ماوس الحبل الشوكي ضغط إصابة نموذج

استكشف المزيد من الفيديوهات