نموذج الفأر ليزر بفعل اتساع الأوعية الدموية المشيمية

الهدف العام من هذا الإجراء هو إعادة إنشاء السمات المميزة للتنكس البقعي المرتبط بالعمر الوعائي الجديد أو MD في نموذج حيواني سهل الدراسة. يمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة جوانب مختلفة من أبحاث A MD للأوعية الدموية الجديدة ، بما في ذلك كيف يمكن أن تؤثر التغيرات الجينية أو العلاجات الصيدلانية على المرض أو كيف يمكن أن يظهر المرض في ظل طرق تصوير مختلفة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه بمجرد إتقانها ، يسهل إعادة إنتاجها ، مما يسمح بإجراء التجارب بسرعة وكفاءة.

بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأنهم يفتقرون إلى البراعة الدقيقة والتنسيق ليكونوا ناجحين ، وكلاهما يتحسن مع الممارسة. لإعداد موضع محطة الليزر ، مصباح الليزر والشق حيث يمكن الوصول إليه بسهولة ، قم بتشغيل الليزر واضبطه على المعلمات المحددة مسبقا. هنا ، يتم استخدام الإعداد 75 ميكرومتر ، وحجم البقعة ، والطاقة 100 مللي واط ، ومدة 100 مللي ثانية.

بعد ذلك ، ضع مناديل التخدير وقطرات الأنسجة المبللة للحيوانات مع سهولة الوصول إلى مشغل الليزر. بعد تخدير الماوس الأول ، ضعه على جهاز تسخين لمدة ثلاث إلى خمس دقائق تقريبا. قم بإجراء قرصة إصبع القدم لضمان التخدير الكامل.

ثم استخدام مناديل ملفوفة لمنع شفط الأنف من لفة السائل. ضع قطرة 30 ميكرولتر من هيدروكلوريد التتراكايين في كل عين. انتظر دقيقتين حتى يصبح الحل ساري المفعول.

بعد ذلك ، ضع قطرة واحدة من مساعد المناطق الموضعية على كل عين لتوسيع حدقة العين. وانتظر دقيقتين حتى يصبح الحل ساري المفعول. الآن ضع الماوس بسرعة على مرحلة الماوس ، ثم اضبط المسرح على بقية الذقن من المصباح الشقي.

قم بتشغيل المصباح الشقي واضبطه على أقل سطوع للضوء. تقييم تمدد حدقة العين في الفأر. إذا لم يحقق التلميذ 2.5 إلى ثلاثة ملليمترات من التمدد.

أعد الفأر إلى جهاز تدفئة أو قم بإعطاء قطرة إضافية من مساعد المناطق الاستوائية بعد اتساع حدقة العين. قم بتوجيه الماوس على المنصة بحيث يكون أفقيا عموديا على شعاع الشق. أدر الماوس قليلا بحيث لا يكون بزاوية 170 درجة تقريبا.

مع توجيه الرأس بالقرب من مشغل الليزر ، ضع الماوس في أقرب مكان ممكن من المصباح الشقي مع الحفاظ على ثبات المنصة وترك مساحة كافية للمشغل لإجراء معالجات دقيقة بالمحرك. بمجرد وضع الماوس بشكل صحيح ، ضع قطرة واحدة من محلول المسيل للدموع الاصطناعية على زلة غطاء زجاجي مقاس 25 ملم × 25 ملم. أيضا ، ضع قطرة واحدة من هذا المحلول على عين الفأر غير المستهدفة لمنع الجفاف.

أمسك أحد أركان زلة الغطاء بين الإبهام وإصبع السبابة، ولف الأصابع الثلاثة المتبقية حول الماوس لدعم كل من ويد المشغل. ثم اضغط بعناية على الغطاء. انزلق على عين الماوس لتسطيح القرنية.

ضع زلة الغطاء بشكل عمودي على مسار شعاع الليزر لمنع تشتت أو انعكاس الحزمة. بالنظر من خلال المصباح الشقي ، استخدم اليد الحرة لضبط التركيز البؤري حتى تظهر شبكية العين. يجب أن تظهر شبكية العين من الأصفر الفاتح إلى الأحمر مع وجود أوعية دموية حمراء مميزة ببطء وحذر تحريك رأس الفأر أو انزلاق الغطاء حتى يتم ملاحظة العصب البصري.

سيكون العصب البصري أصفر مع تشع منه أوعية دموية متعددة. ثم قم بتشغيل شعاع التركيز بالليزر وقم بمناورته للتركيز على ظهارة صبغة الشبكية أو RPE لقاع العين. إذا بدا أن شعاع التركيز البيضاوي أو خارج نطاق التركيز البؤري، فاضبط تركيز المصباح الشقي أو زلة الغطاء.

عندما يتم ضبط شعاع التركيز بشكل مناسب ، استخدم مشغل القدم لبدء إعطاء الليزر. يجب أن تتشكل الفقاعة مباشرة بعد إعطاء الليزر يجب استبعاد الآفات ذات الحدود الضبابية أو العيون المصابة بآفات نزفية من التحليل. تأكد من مراقبة تكوين الفقاعة ومنطقة دائرية واضحة ومحددة بشكل حاد تشير إلى حرق ليزر مركز.

لا تؤدي الآفات التي لا تنتج فقاعة إلى الإصابة بالفيروسات CNV بشكل مناسب. قم بإنشاء آفات إضافية في جميع أوضاع الأوعية الدموية المشيمية أو CNV المرغوبة. قم بتبديل الليزر إلى وضع الاستعداد عندما لا يكون قيد الاستخدام ، وسجل في دفتر ملاحظات المختبر موقع ونتيجة كل إدارة ليزر.

كرر إعطاء الليزر للعين الثانية للماوس باستخدام زلة غطاء جديدة واليد المعاكسة لتثبيت الماوس. بعد الانتهاء من جميع الإدارات ، قم بإيقاف تشغيل الليزر والمصباح الشقي ، وتخلص من زلة الغطاء وضع الماوس على. أكثر دفئا من الناحية المجهرية.

افحص العين بحثا عن أي إصابة في سطح القرنية أو إعتام عدسة العين. بعد التعافي ، أعد الماوس إلى قفصه. تم تحديد CNVs من خلال تحليل المشيمية المثبتة بشكل مسطح بعد تلطيخ الفلورسنت المناعي هنا.

تم وضع العلامات على Fit c dextran عن طريق التروية مباشرة قبل التضحية بالحيوانات. تبع ذلك القياس الكمي للمنطقة عن طريق العتبة في الصورة J.Here تلطيخ مناعي ما بعد الوفاة باستخدام علامة الخلية البطانية. تم إجراء ISO selectin GS IB four ، متبوعا بالتصوير عبر الفحص المجهري متحد البؤر.

تم إنشاء عمليات إعادة بناء ثلاثية الأبعاد لآفة CNV على البرمجيات الحرة والمفتوحة المصدر والمنظر الجانبي. كما تم استخدام التصوير المقطعي بالتماسك البصري لتصور آفات CNV في الجسم الحي. هنا ، تظهر صورة مقطعية لشبكية العين مع آفة CNV محاطة بدائرة باللون الأصفر.

أيضا صورة en FOSS للآفة ، محاطة بدائرة باللون الأصفر. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في 10 دقائق إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم التأكد من تخدير بشكل صحيح ووضع يديك بحيث تكون مدعومة ومستقرة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقديم التركيز. حروق الليزر للحث على CNV ، والتي يمكن دراستها لاحقا بعدة طرق.