دراسة في Complexation من الزئبق (II) مع Dicysteinyl Tetrapeptides التي كتبها Electrospray التأين الطيف الكتلي

الهدف العام من هذا الإجراء هو إعداد مجمعات من ببتيدات الزئبق والديسستينيل تحت مقاييس تفاعلية مختلفة ، وتوصيف المجمعات المختلفة التي تشكلت من تأين الرش الكهربائي وقياس الطيف الكتلي oribitrap. ويمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية المتعلقة باتجاهات التعقيد لمركبات الزئبق والثيول، مما سيعزز التصميم الرشيد للعوامل المخلبية لعزل أيونات الزئبق. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسهل تحليل مجمعات الأيونات المعدنية مع تجزئة ضئيلة.

وتشمل المسائل الأخرى نمطا مميزا لتوزيع نظائر الزئبق. سهولة في تعيين الشحنة وتحليل القمم المتداخلة عن طريق قياس الطيف الكتلي الترادفي. على الرغم من أن هذه الطريقة توفر نظرة ثاقبة لمجمعات الببتيد الزئبقية ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا مع مجمعات أخرى ، خاصة مع أيونات المعادن الموجودة في أشكال نظائرية مختلفة.

Degas عبارة عن مخزن مؤقت لفورمات الأمونيوم بخمسة ملليمولار تحت نظام تفريغ لمدة 10 دقائق ، وتطهيره بالأرجون. كرر مرتين وقم بتخزين المحلول تحت الأرجون. في يوم الاستخدام ، قم بتصفية المحلول العازل من خلال مرشح 0.2 ميكرون قبل الاستخدام.

لتحضير محاليل كلوريد الزئبق ، قم بوزن 0.2375 جرام من كلوريد الزئبق. قم بإذابة 25 مل من محلول فورمات الأمونيوم خمسة مللي مولار، لإنتاج محلول كلوريد الزئبق 0.035 مولار. أضف 0.214 ملليلتر من محلول كلوريد الزئبق إلى 9.785 ملليلتر من محلول فورمات الأمونيوم المكون من خمسة ملليمول، لإنشاء محلول 0.75 ملليمول.

قم بتغطية المحلول الناتج بغاز الأرجون. بعد ذلك ، أضف 225 ميكرولترا من محلول مخزون CGGC بسعة خمسة ملليمولات إلى 1.275 ملليلتر من خمسة ملليمولات فورمات الأمونيوم الأس الهيدروجيني 7.5 ، لإعطاء محلول CGGC 0.75 ملليمول. بعد ذلك ، قم بإعداد نسبة واحدة إلى 0.5 من محلول الزئبق إلى محلول CGGC عن طريق وضع 255 ميكرولتر من خمسة مللي مولار من الرقم الهيدروجيني 7.5 في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر.

ثم أضف 30 ميكرولترا من محلول كلوريد الزئبق 0.75 مللي مولار في الأنبوب. دوامة الحل لمدة 10 ثوان. ثم أضف 15 ميكرولترا من محلول CGGC 0.75 مللي مولار إلى الأنبوب.

بتدوير المحلول لمدة 10 ثوان أخرى ، ثم اترك المحلول يقف لمدة 10 دقائق قبل الحقن في مطياف الكتلة. لتحضير مطياف الكتلة ESI ، أو MS ، ارسم 100 ميكرولتر من معايير المعايرة في حقنة زجاجية سعة 500 ميكرولتر. ضع المحقنة في حامل المحقنة لمضخة MS.

قم بتوصيل الأنبوب ، وحقنه في مطياف الكتلة. قم بإعداد اسم الملف للتشغيل عن طريق تحديد أيقونة الملف وكتابة اسم الملف. حدد زر الحصول على البيانات في وحدة الحصول على البيانات، واجمع 150 عملية مسح ضوئي.

قم بتحليل الكروماتوگرام للتحقق من معايير المعايرة عن طريق فتح وحدة معالجة البيانات الخاصة بالبرنامج. ثم انتقل إلى قائمة الملفات ، وحدد فتح ، متبوعا بالملف في مربع الحوار. تحقق من أن القمم في الكروماتوجرام ترتبط بنسب الكتلة إلى الشحن للمعايير.

قم بتنظيف المحقنة الزجاجية سعة 500 ميكرولتر عن طريق سحب 500 ميكرولتر من الميثانول بدرجة HPLC ثم توزيعها في دورق اسحب 500 ميكرولتر من الميثانول من فئة HPLC في المحقنة الزجاجية ، واغسل النظام. حدد وحدة إعداد الطريقة الخاصة بالبرنامج لتعيين المعلمات.

اختر قائمة وضع المسح وحدد أجهزة التحليل FTMS ، ثم انقر فوق موافق. بعد ذلك ، انقر فوق الرموز المختلفة في صفحة طيف العرض في الوقت الفعلي لإعداد المعلمات كما هو مفصل في بروتوكول النص. لتشغيل المخزن المؤقت ، ضع 500 ميكرولتر من محلول فورمات الأمونيوم سعة خمسة ملليمولار في المحقنة الزجاجية سعة 500 ميكرولتر.

ضعه في مهد المحقنة لمضخة MS ، وافصل الأنبوب. قم بتشغيل المخزن المؤقت عبر الأنبوب لمدة دقيقة إلى دقيقتين. قم بإعداد اسم الملف للتشغيل، عن طريق تحديد أيقونة الملف وكتابة اسم الملف.

حدد زر الحصول على البيانات في الوحدة ، واجمع 150 عملية مسح ضوئي. انقر فوق الزر إيقاف التشغيل لإيقاف التجميع بعد جمع 150 عملية مسح ضوئي. بعد ذلك ، افتح وحدة متصفح البيانات ، وانتقل إلى قائمة الملفات وحدد فتح ، متبوعا بالملف في مربع الحوار.

تحقق من عدم وجود قمم عند 483 و 683 و 1163 و 1363 من الشحنة الزائدة للكتلة التي تشبه مجمعات الببتيد أو الببتيد الأيوني الزئبق. قم بتشغيل محلول واحد إلى 0.5 زئبق إلى نسبة CGGC عن طريق وضع 250 ميكرولتر من العينة في المحقنة. ضع المحقنة في حامل المحقنة لمضخة MS.

نعلق الأنبوب, تجهيز الجهاز. الحصول على 150 عملية مسح للبيانات ، وافتح وحدة المتصفح ، وانتقل إلى قائمة الملفات ، وحدد فتح. ثم حدد الملف في مربع الحوار.

تحقق من أن الكروماتوجرام يحتوي على قمم بما في ذلك تلك الخاصة بببتيد CGGC وحده. يتمثل أحد الجوانب الحاسمة لهذا الإجراء في التأكد من إزالة التحليلات من التشغيل السابق تماما قبل كل تحليل لخليط التفاعل. يتم ضمان تقليل تلوث العينة من التحليلات المرحلية عن طريق تنظيف خط الحقن جيدا.

اغسل المحقنة عن طريق الشفط باستخدام 500 ميكرولتر من محلول فورمات الأمونيوم ، ثم توزيع المخزن المؤقت في دورق بعد ذلك ، حدد زر النفايات على MS وقم بغسل الأنبوب ثلاث مرات باستخدام 500 ميكرولتر من محلول فورمات الأمونيوم. اغسل المحقنة بشكل إضافي عن طريق شفط 500 ميكرولتر من الميثانول وتوزيعها في دورق

اغسل الأنبوب مرة واحدة ب 500 ميكرولتر من الميثانول. ثم حدد زر كاشف الحمل على MS. بعد إضافة 500 ميكرولتر من محلول فورمات الأمونيوم إلى المحقنة ، ضع المحقنة في مهد المحقنة لمضخة MS. نعلق الأنبوب, تجهيز الجهاز.

حدد اسم ملف لتشغيل المخزن المؤقت كما كان من قبل، واحصل على 150 عملية فحص قبل النقر فوق زر إيقاف التشغيل. افتح الوحدة النمطية لمتصفح البيانات للتحقق من أن الكروماتوگرام خال من القمم من التشغيل السابق للزئبق إلى CGGC. كرر إجراء التحليل لعينات CGGC المتبقية.

لتحضير نسبة واحدة إلى 0.5 من الزئبق إلى محلول CEEC ، ضع 255 ميكرولتر من خمسة مللي مولار فورمات الأمونيوم الأس الهيدروجيني 7.5 ، في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر. أضف 30 ميكرولترا من محلول كلوريد الزئبق 0.75 ملليمولار في الأنبوب. بعد دوامة المحلول لمدة 10 ثوان ، أضف 15 ميكرولترا من محلول CEEC 0.75 ملليمولار في الأنبوب.

دوامة الحل لمدة 10 ثوان أخرى. واترك المحلول يقف لمدة 10 دقائق قبل حقن مطياف الكتلة. كرر إجراء التحليل باستخدام عينات CEEC ومخاليط تفاعلية من أيونات الزئبق و CEEC.

يظهر طيف كتلي تمثيلي. بعد 10 دقائق ، تظهر الأنواع المختلفة من مجمعات الببتيد الزئبقية لمزيج تفاعل من زئبق إلى 0.5 زئبق إلى CGGC ، إلى جانب ذروة الببتيد 339.08 ، وثنائي الببتيد 677.15. كما لوحظ في الطيف السابق ، يحتوي خليط تفاعل الزئبق إلى واحد إلى CGGC على بعض القمم المتشابهة.

على سبيل المثال ، تشير الذروة 539.03 إلى مركب واحد إلى واحد من الزئبق والببتيد. ويعرض المنظر المكبر مخطط نظائر الزئبق المميز المقابل لنظائر الزئبق الرئيسية السبعة التي تحدث بشكل طبيعي. ولوحظ أيضا ، من زئبق واحد إلى اثنين من مركب CGGC ، كما ورد سابقا بالنسبة لثلاثي الببتيد ثنائي شينيل الزئبق.

يظهر هذا المركب في جميع مخاليط التفاعل الثلاثة من الزئبق و CGGC. تم تحليله بسهولة من خلال نمط نظائر الزئبق المميز مع ذروة أحادية النظير عند 877. ومع ذلك، إذا كان الزئبق زائدا، كما هو الحال في خليط تفاعل واحد إلى 0.5 زئبق إلى خليط تفاعل CGGC، يكتشف مركب إضافيين أو اثنين من الزئبق إلى مركب CGGC.

ويقابل هذا التوقيع النظيري للزئبق مركبا من زئبق على النحو المحسوب باستخدام برنامج الكيمياء. تتوافق الكتلة أحادية النظير البروتونية النظرية مع قيمة الشحن الزائد للكتلة البالغة 1077 ، وهي الذروة التاسعة في مجموعة النظائر المرصودة. ويبين طيف تمثيلي يبين مختلف الزئبق إلى مجمعات CEEC.

ومن المثير للاهتمام أن القمم المتداخلة المرتبطة بالزئبق إلى مقاربات CEEC في الشحنة زائد واحد تظهر ذروة أحادية النظير عند 883. وفي الشحنة زائد اثنين ، مع قيمة ذروة أحادية النظير محسوبة تبلغ 1765. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في أقل من ساعتين ، إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إزالة المخازن المؤقتة وشطف الخط جيدا لتجنب التحليلات المرحلة. باتباع هذا الإجراء ، يمكن استخدام طرق أخرى مثل البروتون والكربون-13 والزئبق-199 التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي أو قياس الجهد ، لتوفير تحديد أكثر دقة لمجمعات المحتوى في مرحلة المحلول. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن تكون قادرا على تحليل مجمعات الزئبق المختلفة وأنماط توزيع نظائر الزئبق المميزة وتكوينات الشحنة باستخدام قياس الطيف الكتلي أوربيتراب مع تأين الرش الكهربائي ، وكذلك لتمييز القمم المتداخلة عن طريق تحليل MS الترادفي.

لا تنس أن العمل مع محاليل الزئبق يمكن أن يكون خطيرا للغاية ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء معدات الحماية الشخصية أثناء تنفيذ هذا الإجراء.