التي تعتمد على ملوحة سمية الفحص من الفضة Nanocolloids عن طريق الميداكا البيض

الهدف العام من هذه التجربة هو اختبار السمية المعتمدة على الملوحة للمواد الكيميائية للكائنات المائية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم السموم البيئية ، مثل تقييم السمية على المياه العذبة والمياه قليلة الملوحة وظروف مياه البحر. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه لا يطلب من الميداكا أبدا اختبار سمية المواد الكيميائية في الملوحة المختلفة.

بالإضافة إلى ذلك ، يمتد تأثير هذه التقنية إلى العلاج الآخر أو تشخيص سمية المواد الكيميائية. يتم تغطية تحضير الغرويات النانوية الفضية التجارية في المحلول ، في ملوحة مختلفة ، في بروتوكول النص. كما هو الحال مع زراعة ميداكا وجمع البيض.

ابدأ بشطف ست مجموعات من بيض الميداكا في المرحلة 21 ، ثلاث مرات في محلول الاختبار. افعل ذلك باستخدام ERMs ، بتركيز مختلف لكل مجموعة من البيض. الآن ، من كل مجموعة مغسولة ، انقل 15 بيضة إلى بئر مختلف من محلول الاختبار ، في طبق بلاستيكي من ستة آبار.

قم بإعداد هذه التجربة في ثلاث نسخ ، واغسل كل مجموعة على حدة. لف الأطباق بورق القصدير واحتضانها عند 25 درجة مئوية في الظلام. حتى يفقس البيض ، أو لمدة 14 يوما ، أيهما أقرب.

أثناء الحضانة ، راقب البيض يوميا بحثا عن أي تغييرات بيولوجية. ولأي بيض ميت. قم بتغيير محلول الاختبار يوميا ، جنبا إلى جنب مع إبداء الملاحظات.

في اليوم السادس من الملاحظة ، احسب معدل ضربات القلب لكل جنين على مدار 15 ثانية. في اليوم السادس أيضا ، قم بقياس قطر عيون كل جنين ، في كل حالة تجريبية ، باستخدام ميكرومتر. عندما تفقس الأجنة إلى يرقات ، قم بقياس أطوال الجسم بالكامل باستخدام ميكرومتر.

أيضا ، على مدار 14 يوما ، احتفظ بحساب إجمالي البيض الذي يفقس. لقياس التراكم الحيوي للفضة ، في اليوم السادس ، اجمع مشيقات البيض ، باستخدام الطريقة القياسية. يمكن تحليل البويضات منقطعة التكاثر ، تماما كما يتم تحليل محلول SNC ، كما هو موضح في القسم التالي.

لعزل الفضة القابلة للذوبان من كل محلول SNC. أولا ، قم بتصفية خليط الغرويات والفضة القابلة للذوبان باستخدام غشاء ثلاثة كيلو دالتون. بعد ذلك ، قم بتدوير الفلتر المحمل عند 14،000 Gs ، لمدة 10 دقائق ، في جهاز طرد مركزي مبرد.

من 50 ميكرولتر من المرشح ، قم بقياس تركيز الفضة عن طريق تحليل ICP-MS. قم بتحميل الكمية في دورق تفلون سعة 50 مليلتر ، وأضف ملليلترين من حمض النيتريك فائق النقاء إلى الدورق ثم سخني الخليط على طبق ساخن على حرارة 110 درجة مئوية.

على مدار حوالي ثلاث ساعات من التسخين ، اترك المحلول يجف تقريبا. بمجرد أن يبرد الدورق ، قم بإذابة المواد الصلبة العضوية تماما. أضف ملليترين من حمض النيتريك فائق النقاء ، و 0.5 مل من بيروكسيد الهيدروجين ، إلى الدرق.

ثم سخني الخليط مرة أخرى حتى يجف تقريبا مرة أخرى. الآن ، قم بإذابة البقايا المتبقية في أربعة ملليلتر من واحد بالمائة من حمض النيتريك فائق النقاء ، المصنوع من ماء فائق النقاء. انقل المحلول إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل.

كرر عملية إذابة المواد الصلبة المتبقية في دورق التفلون ، مرتين أخريين ، وتبريد المجموعات الثلاث في أنبوب واحد. الآن ، قم بقياس تركيز الفضة في العينة باستخدام ICP-MS. استخدم البروتوكول الموصى به من الشركة المصنعة لتحليل العينات.

تأكد من استخدام المعايير الداخلية والخارجية. كان تأثير الملوحة على سمية SNC واضحا بسهولة. من الواضح أن تحريض التشوه أو الموت كان يعتمد على الملوحة.

تم إجراء قياسات فسيولوجية مختلفة. لم تتأثر معدلات ضربات القلب حتى وصلت الملوحة إلى 30 × ERM. كان طول الجسم أقصر بكثير عند ملوحة 15 و 30 × ERM.

انخفض قطر العين أيضا ، بما يتفق مع طول الجسم. كان الفقس أقل احتمالا عند 15 × ERM ، وحدث فقط لاثنين بالمائة من البيض في 30 × ERM. في ظل المحاليل التجريبية ، تشكلت المجمعات المعدنية القابلة للذوبان في الماء بسهولة أكبر مع زيادة تركيز الملح.

أظهر فحص المجمعات المعدنية في الأجنة بعد ستة أيام أنها زادت في تركيزها في الأجنة مع زيادة تركيزها في المحلول. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر ضبط درجة الحموضة لظروف الاختبار ، لأن إطلاق أيون الفضة يتم تسهيله من خلال الحالة الحمضية.