توصيف الأنسجة بعد طريقة جديدة تصنيفها فيما يتعلق الجلد الصغرى الطعوم الجيل

الهدف العام من هذا الاختراع الجراحي هو إنتاج ترقيع دقيق للجلد الذاتي جاهز للاستخدام على الفور في نفس الجراحة لأغراض التئام الجروح. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الطب التجديدي وهندسة أنسجة الجلد حول أشياء مثل التئام الجروح المزمنة والحروق وتقرحات ما بعد الصدمة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها سهلة الاستخدام من قبل الطبيب بدون تقنية التوقعات، وهي سريعة وبأسعار معقولة.

للبدء ، استخدم خزعة لجمع عينات الجلد من المريض. ثم قم بإزالة الطبقة الظهارية والتخلص منها. امزج كل عينة من الأنسجة مع 1 مليلتر من المحلول الملحي لتوليد ترقيع دقيق ذاتي المنشأ.

لتحضير المجمعات الحيوية للتطبيق السريري ، انقل 1 مليلتر من محلول الكسب غير المشروع الدقيق إلى إسفنج الكولاجين. ضع المركب الحيوي على الفور على المنطقة المصابة للمريض. في المختبر ، اختبر جدوى المركب الحيوي.

بعد ثلاثة أيام من الاستزراع ، صب 0.3٪ فورمالين مباشرة على المجمعات الحيوية وثبته لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. استخدم ميكروتوم لتقطيع الأقسام بسمك 5 ميكرومتر وتركيبها مباشرة على شريحة زجاجية. ثم ضع الأقسام في 15 إلى 20 مل من الزيلين لمدة ثلاث دقائق.

بعد ذلك ، اغمر الشرائح في درجات متناقصة من الإيثانول لمدة ساعة واحدة قبل وضعها في ماء منزوع الأيونات لإزالة البارافينات وإعادة ترطيب الأقسام. ثم استخدم 1 إلى 2 مل من 1 جرام لكل لتر من الهيماتوكسيلين لمدة دقيقة إلى دقيقتين لتلطيخ الأقسام. وانقله إلى الماء لشطف البقعة.

الآن مع 1 إلى 2 مل من 1٪ Eosin Y و 70٪ الإيثانول وتخفيفه في الماء ، قم بتلطيخ الأقسام لمدة أربع إلى خمس دقائق. ثم استخدم ماء الصنبور الجاري لشطف الشرائح. اغمر الأقسام في تركيزات متزايدة من الإيثانول لمدة ساعة واحدة قبل حضانة لمدة ساعة واحدة في الزيلين.

أخيرا ، قم بتطبيق وسيط تثبيت أساسي على العينات قبل إضافة غطاء الغطاء. ثم راقب تحت المجهر الضوئي بتكبير 100x. باستخدام الجلد ، خذ عينات حليمية أو ميتة أو أدمة بسمك 0.6 ملم أو 1 ملم أو 0.2 ملم ، على التوالي ، من مناطق جذع أربعة متبرعين متعددي الأنسجة تتراوح أعمارهم بين 40 و 55 عاما وفقا للقواعد الوطنية للحصاد.

ضع العينات في 0.9٪ كلوريد الصوديوم وضعها على شاكر مداري لمدة خمس دقائق لشطف الأنسجة برفق. باستخدام لكمة خزعة 5 ملم ، قم بإنشاء عينات ذات قطر موحد من أنسجة الجلد ، والميتة والأدمة ، ووزن جميع عينات الأنسجة. بعد ذلك ، أدخل ثماني أو ثلاث أو أربع عينات موحدة من أنسجة الجلد ، الميتة أو الأدمة ، على التوالي ، في اضطراب الأنسجة ، وأضف 1.5 مل من المحلول الملحي للتجميع.

إجراء التصنيف لجميع عينات الأنسجة كما هو موضح في هذا الجدول. استخدم عددا مطابقا من خزعات الثقب المشتقة من عينات الأنسجة السليمة كضوابط. بعد التفكيك الميكانيكي ، قم بشفط المحلول الملحي الذي يحتوي على طعوم دقيقة وضع كل عينة على حدة في بئر واحد من صفيحة 12 بئرا.

أضف 1 مليلتر من وسط RPMI-1640 المكمل بنسبة 10٪ FBS والمضادات الحيوية لكل عينة. لتقييم صلاحية الخلية ، أضف إلى كل بئر 1 مليلتر من الوسط يحتوي على 0.5 ملليغرام لكل مليلتر من محلول MTT ، واحتضانه عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ثلاث ساعات. بعد الحضانة ، قم بإزالة وسيط MTT واستبدله ب 1 مليلتر من DMSO.

بعد الحضانة لمدة 10 دقائق ، انقل كل عينة في DMSO إلى كوفيت واستخدم مقياس الطيف الضوئي لقراءة الكثافة البصرية عند 570 نانومتر. احسب صلاحية الخلية كنسبة امتصاص عند 570 نانومتر ووزن وجرامات الأنسجة المستخدمة قبل التفكيك. بعد ذلك ، بمجرد شفط المحلول الملحي من أنسجة الجلد ، وعينات ميتة وأدمة من متبرع واحد ، ضع كل عينة على حدة في بئر من صفيحة مكونة من 12 بئرا لاختبار بقاء الخلية أو قارورة مزرعة للتحليل المورفولوجي.

أضف 1 ملليلتر من RPMI-1640 مع FBS بنسبة 10٪ والمضادات الحيوية إلى الصفيحة المكونة من 12 بئر أو 5 ملليلتر إلى قارورة الاستزراع عند 37 درجة مئوية وثاني أكسيد الكربون 5٪ لمدة 24 ساعة أو سبعة أيام على التوالي. في غضون 24 ساعة ، استخدم الفحص المجهري الضوئي لإجراء التحليل المورفولوجي من خلال تقييم وجود تعليق الخلية. كرر في اليوم السابع.

باستخدام تحليل FACS ، قم بتحليل عينات الأدمة من علامات الخلايا الوسيطة والمكونة للدم ، مثل CD146 و CD34 و CD45. أضف وسيطا إلى الخلايا غير المنفصلة ، ثم احتضن عند 37 درجة مئوية لمدة ثلاثة أيام. وتقييم عقم الأنسجة عن طريق إجراء التحليل الميكروبيولوجي كما هو موضح سابقا.

كما هو موضح هنا ، تم زرع الطعوم الدقيقة الذاتية البشرية المحملة على الفور على دعامة الكولاجين في آفة الساق. ولوحظت إعادة تشكيل الظهارة الكاملة المرتبطة بإصلاح الأنسجة بعد 30 يوما. علاوة على ذلك ، أظهرت المتابعة السريرية ملمسا جيدا ونعومة للمنطقة المتضررة بعد خمسة أشهر.

كما هو مذكور في هذا الجدول ، تم تحديد عتبات ثماني وأربع وثلاث خزعات يمكن معالجتها في خطوة واحدة ، وتم تصنيف الأنسجة في أربع أوقات مختلفة من أجل تحديد الظروف المثلى للتصنيف للحفاظ على صلاحية الخلية الجيدة. يحافظ التصنيف الميكانيكي الموضح في هذا الفيديو على متوسط قيمة 30٪ من صلاحية الخلية في جميع عينات الجلد ، الميتة والأدمة ، عند تقييمها في أوقات مختلفة فيما يتعلق بالأنسجة السليمة. يظهر هذا الكسب غير المشروع أنه بعد 24 ساعة ، أو سبعة أيام في المزرعة ، لم يلاحظ أي اختلاف كبير في صلاحية الخلايا في عينات أنسجة الجلد بحلول وقت التجانس في الثقافة مقارنة بوقت البدء.

ومع ذلك ، لوحظ انخفاض قابلية العينات الميتة للبقاء بعد 24 ساعة في المزرعة مقارنة بوقت البدء. لكن استعيدت صلاحية الخلية بعد سبعة أيام في المزرعة. لوحظت نتائج مماثلة للأدمة.

عند إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في خمس دقائق إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إزالة الطبقة الظهارية من الجلد. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل تفكيك أنسجة العظام من أجل الإجابة على أسئلة أخرى مثل آلية التئام العظام.

بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الطب التجديدي وهندسة الأنسجة لاستكشاف التئام الأنسجة لدى المرضى. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء عملية الكسب غير المشروع الدقيق هذه. لا تنس أن العمل مع الأنسجة يمكن أن يكون خطيرا للغاية.

ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل نظارات السلامة أثناء تنفيذ هذا الإجراء.