Name: عالية الإنتاجية الفحص لفحص تفضيلات بيضة زرع الفردي ذبابة الفاكهة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 58 s
Description: تعلم تقييم تفضيلات وضع البيض في ذباب الفاكهة Drosophila melanogaster بدقة فردية باستخدام منصة عالية الإنتاجية. تساعد هذه الطريقة الباحثين على تحديد الجينات والدوائر العصبية المسؤولة عن اتخاذ القرارات السلوكية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر متجر Duke Physics ، وخاصة Phil Lewis ، لمساعدتنا في بناء الجهاز السلوكي والمرفقات وإنشاء الرسم. يتم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة بموجب الجائزة رقم R01GM100027.

1. إعداد الذباب إلى أن يعاير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة الذباب على العسل الأسود القياسية / وسائل الإعلام دقيق الذرة في مجموعة حاضنة عند 25 درجة مئوية والرطوبة 65٪. الحرص على عدم ازدحام قارورة. على سبيل المثال، وضعت 8 إناث و 6 ذكور في قارورة الغذاء الضيقة. ملاحظة: &quot;قارورة الغذاء الضيقة&quot; المستخدمة هنا ديها قطرها الداخلي 2.3 سم. ونحن عادة الاستغناء عن 10 مل من المواد الغذائية يطير في كل قارورة. ووصف وصفة الطعام ذبابة كنا هنا: http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.html. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 - بعد 3 أيام من الإناث eclosion، وإعداد قارورة مع عجينة الخميرة الطازجة كما هو مبين في الشكل 1E. جعل الطازجة عجينة الخميرة عن طريق خلط 6 غرام من الخميرة النشطة مع 10 مل من حمض proprionic 0.5٪. استخدام ملعقة لتطبيق عجينة الخميرة على جدار من قارورة الغذاء. جمع 30-35 الإناث eclosed جنبا إلى جنب مع 20 - 25 من الذكور في قارورة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بشكل عام، وجمع الذكور من نفس قارورة حيث يتم جمع الإناث(وذلك لتوفير الوقت والجهد). ومع ذلك، إذا كان هناك قلق حول خصوبة الذكور، استخدام الذكور WT بدلا من ذلك. أيضا، الخميرة لصق مهم لتحفيز إنتاج البيض ومن ثم إعدادها طازجة يوميا. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على جمع الإناث / الذكور عند 25 درجة مئوية، الرطوبة 65٪، إلا الذباب هي درجة الحرارة حساسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ~ 4-5 أيام، والتحقق من قوارير لمعرفة ما اذا الإناث جاهزة للتجارب وضع البيض. انهم مستعدون عند سطح المتوسطة الغذاء الرطب من اليرقات تختبئ بنشاط في الغذاء (انظر الشكل 1E - F). ملاحظة: الإناث عادة الامتناع عن وضع البيض مرة واحدة يصبح سطح الغذاء الرطب والزحف مع اليرقات. تضمن هذه الخطوة أن الإناث ستكون جاهزة لوضع الكثير من البيض عندما كانت تواجه ركائز مع الملمس المطلوب (على سبيل المثال، ~ 1 الاغاروز٪). </li></ol> 2. غرفة البناء، الجمعية، إعداد الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لدينا متجر آلة بناء غرف وضع البيض الاكريليك (فايجوري 1A - D). وظهر الرسم الهندسي من قطع مختلفة في الشكل التكميلي 1 - 3 يمكن العثور عليها أيضا صور عالية الدقة هنا (http://www.rebeccayang.org/pdf/chamber٪20design.pdf). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج الأغطية البلاستيكية إلى تحميل (أعلى) قطعة من الغرفة كما هو مبين في الشكل 1C. وهذا بمثابة السطح السفلي بينما الذباب تحميل في الساحات وضع البيض على حدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الإناث على وسادة CO 2 وتحميلها بشكل فردي في كل الساحة وضع البيض. سماح ~ 30 دقيقة للذباب للتعافي من CO 2 وتصبح تأقلم مع البيئة الجديدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير ركائز الاغاروز. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للراحة، والحفاظ على زجاجة ولم يضف من ذاب 1٪ الاغاروز في 55 ° C حمام الماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة المبلغ المطلوب من محلول المخزون السكروز (2 م) إلى 50 مل أنبوب مخروطي الشكل وخلطها مع كمية مناسبة من الاغاروز. على سبيل المثال، لإعداد 150 ملي السكروز الركيزة، جيش التحرير الشعبى الصينىم 750 ميكرولتر من 2 M حل السكروز في أنبوب ثم ملء الأنبوب مع الاغاروز إلى علامة 10 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الركيزة سهل بنفس الطريقة ولكن مع إضافة الماء المقطر بدلا من محلول السكروز. ملاحظة: تركيز النهائي من الاغاروز في هذا البروتوكول هو قليلا أقل من 1٪. في تجربتنا، والتركيز الدقيق الاغاروز لا يهم طالما تسيطر عليه أن يكون في حدود ~ 0،9-1،1٪ وأن ركائز هما من تركيز الاغاروز نفسه. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ قطعة الركيزة (القاع) من الغرفة وماصة 1000 ميكرولتر من الركيزة الأغاروس في كل الحوض كما رأينا في الشكل 1D. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للالاغاروز لترسيخ ب ~ 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة ركائز الاغاروز والذباب جاهزة، تجميع كل الأجزاء الثلاثة من الغرفة وضع البيض ثم تأخذ بها الأغطية البلاستيكية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الدوائر في حاضنات الطاير. ملاحظة: طول التجارب وضع البيض يمكن أن تختلف تبعا بةاحتياجات rimental. ونحن عادة تشغيل التجربة O / N (14-16 ساعة). أيضا، لم يلاحظ أي تأثير كبير على توقيت الساعة البيولوجية على تفضيلات وضع البيض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير عن طريق حقن الإناث CO 2 في الغرفة. تفكيك الغرفة، تجاهل الذباب تخدير في مشرحة ذبابة (أي، يمكن للقهوة فارغة مليئة بعض زيت الذرة). التقاط صور من نتائج السجلات (انظر الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب عدد البيض يدويا وحساب مؤشرات تفضيل للتحليل. حساب مؤشر التفضيل (N A - N ب) / (N + N لب) حيث ن أ و ن ب يمثلون عدد من البيض في الموقع موقع مقابل ب، على التوالي. </li></ol>

<ol><li>Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shocking+revelations+and+saccharin+sweetness+in+the+study+of+Drosophila+olfactory+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory.</a> Curr. Biol. 23 (17), 752-763 (2013).</li>
<li>Yamamoto, N. C., Koganezawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+circuits+of+courtship+behaviour+in+Drosophila+males%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genes and circuits of courtship behaviour in Drosophila males.</a> Nat. Rev. Neurosci. 14 (10), 681-692 (2013).</li>
<li>Zwarts, L., Versteven, M., Callaerts, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+and+neurobiology+of+aggression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Fly%22%5BJournal%5D)">Genetics and neurobiology of aggression in Drosophila.</a> Fly. 6 (1), 35-48 (2012).</li>
<li>Joseph, R. M., Devineni, A. V., King, I. F., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oviposition+preference+for+and+positional+avoidance+of+acetic+acid+provide+a+model+for+competing+behavioral+drives+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Oviposition preference for and positional avoidance of acetic acid provide a model for competing behavioral drives in Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 106 (27), 11352-11357 (2009).</li>
<li>Miller, P. M., Saltz, J. B., Cochrane, V. A., Marcinkowski, C. M., Mobin, R., Turner, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+variation+in+decision-making+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Natural variation in decision-making behavior in Drosophila melanogaster.</a> PLoS One. 6 (1), 16436(2011).</li>
<li>Schwartz, N. U., Zhong, L., Bellemer, A., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-laying+decisions+in+Drosophila+are+consistent+with+foraging+costs+of+larval+progeny%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Egg-laying decisions in Drosophila are consistent with foraging costs of larval progeny.</a> PloS One. 7 (5), 37910(2012).</li>
<li>Yang, C. H., Belawat, P., Hafen, E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+egg-laying+site+selection+a+system+to+study+simple+decision-making+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Drosophila egg-laying site selection a system to study simple decision-making processes.</a> Science. 319 (5870), 1679-1683 (2008).</li>
<li>Kacsoh, B. Z., Lynch, Z. R., Mortimer, N. T., Schlenke, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fruit+flies+medicate+offspring+after+seeing+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fruit flies medicate offspring after seeing parasites.</a> Science. 339 (6122), 947-950 (2013).</li>
<li>Wu, C. -L., Fu, T. -F., Chou, Y. -Y., Yeh, S. -R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Single+Pair+of+Neurons+Modulates+Egg-Laying+Decisions+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">A Single Pair of Neurons Modulates Egg-Laying Decisions in Drosophila.</a> PloS one. 10 (3), e0121335(2015).</li>
<li>Yang, C. H., He, R., Stern, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+circuit+basis+of+sucrose+rejection+by+Drosophila+females+in+a+simple+decision-making+task%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral and circuit basis of sucrose rejection by Drosophila females in a simple decision-making task.</a> J. Neurosci. 35 (4), 1396-1410 (2015).</li>
<li>Gou, B., Liu, Y., Guntur, A. R., Stern, U., Yang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+neurons+on+the+internal+reproductive+tract+contribute+to+egg-laying+induced+acetic+acid+attraction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive neurons on the internal reproductive tract contribute to egg-laying induced acetic acid attraction in Drosophila.</a> Cell Rep. 9 (2), 522-530 (2014).</li>
<li>Stern, U., Zhu, E. Y., He, R., Yang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-duration+animal+tracking+in+difficult+lighting+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Long-duration animal tracking in difficult lighting conditions.</a> Sci. Rep. 5, 10432(2015).</li>
<li>Zhu, E. Y., Guntur, A. R., He, R., Stern, U., Yang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-laying+demand+induces+aversion+of+UV+light+in+Drosophila+females%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Egg-laying demand induces aversion of UV light in Drosophila females.</a> Curr. Biol. 24 (23), (2014).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat. Methods. 6, 451-457 (2009).</li>
<li>Klatpoetke, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+Optical+Excitation+of+Distinct+Neural+Populations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Independent Optical Excitation of Distinct Neural Populations.</a> Nat. Methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

الدوائر والبروتوكولات المذكورة هنا لديهم العديد من التحسينات على المقايسات وضع البيض السابقة. أولا، أنها تزيد من الإنتاجية من يعاير تفضيلات من الحيوانات وحيدة بشكل ملحوظ. كل غرفة يمكن فحص 30 من الإناث واحدة ويستغرق أقل من ساعة لاقامة. ثانيا، أنها تزيد من الاتساق في تفضيلات وضع البيض على الطرق السابقة. توحيد أبعاد الساحة، وحجم ركائز وضع البيض، والمسافة بين ركائز يجعل من الاسهل لمقارنة النتائج بين أيام التجريبية المختلفة ومن المجموعات البحثية المختلفة. ثالثا، غرف يمكن تركيبها مع الم...

ذبابة الفاكهة السوداء هو كائن حي نموذجي جيني قوي لدراسة الأساس العصبي للسلوكيات. أدت التطورات السريعة للأدوات الجينية لمعالجة الخلايا العصبية بطريقة مستهدفة وظهور أدوات التحليل السلوكي المتطورة إلى تحسين قدرتنا بشكل كبير على تشريح آليات الدوائر التي تكمن وراء عمليات التحول الحسي الحركي للعديد من السلوكيات الفطرية والمكتسبة1-3.
ذبابة الفاكهة وضع البيض هو نموذج مناسب لدراسة الأساس العصبي لعمليات صنع القرار البسيطة. على وجه الخصوص ، ثبت أن إناث ذبابة الفاكهة تمتلك القدرة على مقارنة خياراتها وترتيبها قبل "الالتزام" بإيداع بيضة في خيارمعين 4-8. على سبيل المثال ، عند إعطاؤها ركيزة عادية (خالية من السكروز) فقط أو ركيزة تحتوي على السكروز فقط ، تقبل الإناث بسهولة أيا من الخيارين لوضع البيض. ومع ذلك ، عند تقديم كلا الخيارين ، ترفض الإناث القوية ركيزة السكروز في بعض السياقات7،9،10. ومع ذلك ، لا يعرف سوى القليل نسبيا عن الآليات العصبية التي تسمح للإناث "باختيار أكبر سلعتين". كانت العقبة الرئيسية هي عدم وجود طريقة فعالة لفحص تفضيلات وضع البيض بحيث يمكن للمرء استخدام نهج الفحص الجيني المنهجي لدراسة هذه المشكلة.
 في هذا التقرير ، نصف البروتوكول الذي طورناه والذي يسمح بفحص تفضيلات وضع البيض للإناث بدقة واحد وبإنتاجية متسنة بشكل كبير واتساق مقارنة بالطرق السابقة. على وجه التحديد ، نقدم المخططات لبناء الغرف التي صممناها ، وبروتوكول تحضير الإناث بحيث تكون كل منها مهيأة لوضع العديد من البيض ، وبروتوكول استخدام الغرف.

<table><tbody><tr><td>UltraPure Agarose&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>16500-500</td><td></td></tr><tr><td>السكروز</td><td>سيجما</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>حمام مائي &nbsp;</td><td>فيشر</td><td>15-462-6Q</td><td></td></tr><tr><td>LifeCam سينما كاميرا ويب</td><td>مايكروسوفت</td><td>H5D-00013</td><td></td></tr><tr><td>مصابيح LED حمراء</td><td>Cree</td><td>C503B-RAN-CA0B0AA1</td><td></td></tr><tr><td>غرف وضع البيض حاملات</td> الكاميرا <td>المصممة</td><td></td><td></td>خصيصا</tr><tr><td>حاملي</td><td></td><td></td><td></td>LED</tr> المصممة <tr><td></td><td>خصيصا</td><td></td><td></td></tr><tr><td>قوارير ذبابة مصممة خصيصا (ضيقة)</td><td>جينيسي</td><td>32-116 قبل الميلاد</td><td></td></tr></tbody></table>

عالية الإنتاجية الفحص لفحص تفضيلات بيضة زرع الفردي<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

في الآونة الأخيرة، ظهرت أفضلية وضع البيض ذبابة الفاكهة نموذجا لين العريكة وراثيا لدراسة الأساس العصبي للعمليات صنع القرار بسيطة. عند اختيار مواقع لإيداع بيضها، الذباب الإناث قادرة على المرتبة الجاذبية النسبية للخيارات واختيار &quot;أكبر من سلعتين.&quot; ومع ذلك، فإن معظم فحوصات تفضيل وضع البيض ليست عملية إذا كان أحد يريد أن يأخذ نهجا الفحص الجيني المنهجي للبحث عن أساس الدوائر الكامنة وراء هذه العملية صنع القرار بسيطة، كما هي وشاقة لانشاء القائمة على السكان. لزيادة الإنتاجية دراسة الأفضليات وضع البيض من الإناث واحدة، وضعنا غرف مخصصة كل علبة تفضيلات وضع البيض الفحص في وقت واحد لمدة تصل إلى ثلاثين فرد الذباب وكذلك البروتوكول الذي يضمن لكل امرأة لديها نسبة وضع البيض عالية (بحيث تفضيلها هو ملحوظ بسهولة وأكثر إقناعا). نهجنا هو بسيط لتنفيذوتعطي نتائج متسقة للغاية. بالإضافة إلى ذلك، يمكن تجهيز هذه الغرف مع المرفقات مختلفة للسماح تسجيل فيديو للحيوانات وضع البيض ولتسليم ضوء دراسات علم البصريات الوراثي. وتنص هذه المادة على مخططات لافتعال هذه الدوائر وإجراءات إعداد الذباب إلى أن يعاير في هذه الدوائر.

وتتكون غرف وضع البيض من عدة قطع: ركيزة (القاع) قطعة، قطعة المفرق (وسط)، وتحميل (أعلى) قطعة، و 2 أبواب منزلقة (الشكل 1A - D). وتستخدم هذه القطع بشكل مستقل الذباب الإعداد وركائز قبل التجارب وضع البيض. ويبين الشكل 1F كيف قارورة ينبغي أن ننظر عند الذباب الإناث على استعداد لوضع البيض. عندما تعطى الذباب الاختيار بين ركيزة واضحة والركيزة التي تحتوي على السكروز، الإناث تفضل بقوة الركيزة سهل لوضع البيض كما هو موضح في <stron...

يصف هذا البروتوكول مقايسة إنتاجية عالية لاختبار تفضيلات وضع البيض ذبابة الفاكهة السوداء بدقة واحد. يوفر هذا الاختبار نظاما أساسيا بسيطا وفعالا وقابلا للتطوير لتحديد الجينات ومكونات الدوائر التي تتحكم في عملية صنع القرار البسيطة.

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

الهدف العام من هذا المقايسة عالية الإنتاجية هو توفير منصة بسيطة وفعالة وقابلة للتطوير لتحديد الجينات والعصبونات التي تتحكم في سلوك اختيار بسيط لدى Drosophila. تكمن الميزة الرئيسية لهذه الطريقة في إمكانية إجراء العدوى كخيار للبيوض، وبطريقة مناسبة للغاية لحيوان واحد. لبدء التجربة، ضع ثماني إناث وستة ذكور في قارورة غذاء ضيقة مملوءة بأوساط نمو الذباب القياسية.ثم استخدم الذرية من الإناث الناتجة من هذه القارورة في تجارب وضع البيض. وبعد يومين إلى ثلاثة أيام من خروج الإناث من الشرنقة، قم بتحضير معجون خميرة طازج عن طريق خلط 6 g من الخميرة النشطة مع 10 mL من حمض البروبيونيك بتركيز 0.5%. استخدم ملعقة مسطحة (spatula) لدهن معجون الخميرة على الجدار الجانبي لقوارير الغذاء.بعد ذلك، ضع 30 أنثى و20 ذكراً من الذين فقسوا تم جمعهم مسبقاً في القوارير. وبعد مرور أربعة أيام، افحص سطح الوسط الغذائي. إذا كان السطح رطباً نتيجة حفر اليرقات بنشاط في الغذاء، فإن ذباب الإناث يصبح جاهزاً لتجارب وضع البيض.استمر في التجربة من خلال إحضار غرف وضع البيض الأكريليكية التي تم إنشاؤها مسبقاً. أدخل شرائح بلاستيكية في الجزء العلوي، مع وضع قطعة من الغرفة لتعمل كسطح سفلي. بعد ذلك، قم بتخدير الإناث على وسادة ثاني أكسيد الكربون، ثم ضعهن بشكل فردي في كل ساحة من ساحات وضع البيض.اترك الذباب لمدة 30 دقيقة للتعافي من تأثير ثاني أكسيد الكربون وللتأقلم مع البيئة الجديدة. وأثناء فترة تكيف الذباب، املأ أنبوباً بـ agarose حتى علامة 10 milliliter، ثم حضّر ركيزة سكروز بحجم 150 milliliter عن طريق وضع 750 microliters من محلول سكروز بتركيز two molar في الأنبوب. احتفظ بزجاجة من 1% agrose مُذاب في حمام مائي.قم بتحضير الركيزة السادة بنفس الطريقة، ولكن استبدل محلول السكروز بالماء المقطر. بعد ذلك، أحضر قطعة الركيزة الخاصة بالغرفة وانقل 1,000 µL من ركيزة الأغاروز إلى كل تجويف. اترك الأغاروز جانباً ليتجمد لمدة 30 دقيقة.بمجرد تجهيز ركائز الأجاروز والذباب، قم بتجميع القطع الثلاث لغرفة وضع البيض، ثم أخرج الرقائق البلاستيكية. ضع الغرف في حاضنات الذباب طوال الليل. قم بتخدير الإناث عن طريق حقن ثاني أكسيد الكربون في الغرفة.قم بتفكيك الغرفة، وتخلص من الذباب المخدر. وأخيراً، التقط صوراً للبيض لغرض التوثيق. تم حساب مؤشر التفضيل، أو PI، على أنه عدد البيض الذي وضعته إناث الذباب عند تخييرها بين ركيزة عادية وركيزة تحتوي على السكروز.أبدت الإناث تفضيلاً قوياً للركيزة السادة لوضع البيض. وبناءً على هذا الإجراء، تتوفر طرق أخرى مثل التسجيل الإشعاعي كفرص لإجراء دراسات وراثية للإجابة على تساؤلات أخرى، مثل كيفية سلوك الذباب قبل وضع كل بيضة.

high-throughput-assay-to-examine-egg-laying-preferences-individual

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

ذبابة الفاكهة السوداء البطن هو وراثيا وسلوكيا نظام نموذج قابل للطرق التي استخدمت لفهم الأساس الجزيئي والخلوي من العديد من العمليات البيولوجية الهامة لأكثر من قرن 1. ذبابة الفاكهة قد تم استغلالها بشكل جيد للحصول على نظرة ثاقبة الأساس الجيني للسلوك الذباب.

طرق الفحص ذبابة الفاكهة سلوك

يصف هذا الفيديو طريقة بسيطة لتحديد حركة الذباب ويظهر مقايسة التسلق التي تم إجراؤها. مقايسة تسلق الذباب هي اختبار عام للوظيفة الحركية التي تعتمد على استجابة جيوتاكس سلبية.

اختبار تسلق الذبابة: طريقة لاختبار الحركة العامة في ذبابة الفاكهة السوداء

يصف هذا الفيديو اختبار الجزيرة ، وهي طريقة سلوكية تستخدم لدراسة ذبابة الفاكهة الحركة. يتميز نموذج البروتوكول بإعداد للمقايسة المتوافق مع تحليل الصور شبه الآلي.

فحص الجزيرة: طريقة عالية الإنتاجية لتقييم السلوك الحركي ذبابة الفاكهة

تختار إناث ذبابة الفاكهة بين الركائز وتحديد المواقع الجذابة لوضع البيض. يصف هذا الفيديو فحصا سلوكيا يختبر عملية صنع القرار ، ويسمى مقايسة تفضيل وضع البيض. يوضح المقطع المميز الإجراء من خلال إعداد مصمم خصيصا ، والذي يمكن الباحثين ليس فقط من اختبار سلوك العديد من الإناث في نفس الوقت ولكنه متوافق أيضا مع تسجيل الفيديو وإعدادات البصريات الوراثية.

ذبابة الفاكهة مقايسة تفضيل وضع البيض: طريقة لاختبار اتخاذ القرار في الذباب

C. ايليجانس يمكن أن يوفر سلوك وضع البيض معلومات مهمة في الدراسات التنموية والإنجابية والتشريحية. يقدم هذا الفيديو الخطوات المهمة لمقايسة وضع البيض ويظهر عينة من التجربة التي يتم فيها اختبار الدواء للكشف عن السمية الإنجابية.

فحص وضع البيض: طريقة لتحديد سلوك وضع البيض ل C. ايليجانس

في هذه المقالة الفيديو، ونحن تصف مقايسة الآلي لقياس تأثير الجوع أو الشبع على حاسة الشم التي تعتمد سلوك البحث الغذائية في الفاكهة الكبار يطير ذبابة الفاكهة السوداء البطن.

واحدة ذبابة الفحص لسلوك البحث عن الطعام في ذبابة الفاكهة

هنا ، نقدم بروتوكولا لتحديد تجنب الأفراد المجهدين. هذا النموذج قوي ولكنه سهل الاستخدام ويمكن استخدامه لتقييم تأثير الجينات والبيئة على نوع واحد من التفاعل الاجتماعي في ذبابة الفاكهة السوداء.

الفحص مباشرة للالكمي لتجنب الاجتماعي في ذبابة الفاكهة السوداء

من أجل تحديد الطفرات الجديدة التي تؤثر على الإحساس الميكانيكي ، قمنا بتصميم اختبار يقيس الاستجابة السلوكية للتحفيز اللمسي لشعيرات الذباب في المستنسخة الطافرة الناتجة عن طريقة MARCM. يسمح الجمع بين التقنيات بتحديد الطفرات الحساسة للميكانيكا التي قد تكون قاتلة.

النسخ في والسلوكية الفحص لMechanosensation من MARCM المستندة<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

توضح هذه المقالة الفحص السلوكي يستخدم محرك التزاوج من الذكور في ذبابة الفاكهة melanogaste ص لدراسة الدوافع. باستخدام هذه الطريقة، يمكن للباحثين الاستفادة الطيران المتقدمة تقنيات العصبية الوراثية للكشف عن الآليات الوراثية والجزيئية والخلوية التي تكمن وراء هذا الدافع.

قياس وتغيير التزاوج محرك في ذكر<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

تم تصميم هذا البروتوكول لتقييم صلاحية دروسوفيلا في كل مرحلة من مراحل النمو، من الجنين إلى الكبار. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتحديد ومقارنة صلاحية مختلف الأنماط الجينية أو ظروف النمو.

طريقة مباشرة وبسيطة لتقييم قدرة دروسوفيلا ميلانوغاسترعلى البقاء من الجنين إلى الكبار

سلامة حاجز الدم في الدماغ أمر بالغ الأهمية لوظيفة الجهاز العصبي. في دروسوفيلا melanogaster، يتكون حاجز الدم في الدماغ من الخلايا الغليفية أثناء تكوين الجنين في وقت متأخر. يصف هذا البروتوكول طرق اختبار تكوين حاجز الدم في الدماغ وصيانته في أجنة D. melanogaster واليرقات النجمية الثالثة.

فحص لسلامة حاجز الدم في الدماغ في دروسوفيلا melanogaster

تعلم تقييم تفضيلات وضع البيض في ذباب الفاكهة Drosophila melanogaster بدقة فردية باستخدام منصة عالية الإنتاجية. تساعد هذه الطريقة الباحثين على تحديد الجينات والدوائر العصبية المسؤولة عن اتخاذ القرارات السلوكية.

عالية الإنتاجية الفحص لفحص تفضيلات بيضة زرع الفردي

استكشف المزيد من الفيديوهات