فبراير 16, 2016
أنشأنا تقنية لعزل وتوصيف المظهري والتحليل الوظيفي للخلايا المناعية من اللثة الفئران.
الهدف العام من هذه الطريقة هو عزل الخلايا المناعية اللثية من أجل التوصيف المتعمق للاستجابات المناعية المتعلقة بمناعة الفم والتهاب دواعم السن. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال المناعة الفموية ، مثل العوامل الخلوية المتورطة في التسبب في التهاب دواعم السن. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها تسمح بتقييم شبكة الخلايا المناعية عن طريق الفم وعزل ما يكفي من الخلايا القابلة للحياة لإجراء الفحوصات في المختبر
.كخطوة أولى من هذا البروتوكول ، ابدأ بوضع دبابيس لشل حركة جسم الفأر وفتح تجاويف الصدر والبطن لكشف القلب والأعضاء الداخلية. بعد ذلك ، قم بعمل شق في الوريد الأجوف ، واستخدم حقنة سعة 3 ملليلتر ، مزودة بإبرة قياس 27 ، لإنتاج 3 ملليلتر من PBS عبر البطين الأيسر. عندما يتم مسح الدم بالكامل ، قم بتثبيت رأس الفأر على وسادة تشريح ، بحيث تكون المعدة متجهة لأعلى.
ثم استخدم المقص لقطع كل قطعة من الشفة باتجاه الرقبة ، وفصل الجلد الذي يغطي منطقة الفك السفلي والرقبة ، وتعريض الأنسجة والعضلات الأساسية. قطع بين القواطع السفلية لفصل جانبي الفك السفلي. شل حركة كل جانب من الفك السفلي المنفصل بإبر قياس 25 للوصول إلى تجويف الفم.
بعد تحديد الحنك ، استخدم الشفرة الجراحية رقم 10 لعمل شقوق رأسية أمام الضرس الأول مباشرة ، وخلف الضرس الثالث. ثم قم بتشريح الأنسجة بعيدا عن تجويف الأنف ، وكذلك تشريح الكتل من الفك السفلي. ثم قم بإزالة الأنسجة الزائدة من حدود اللثة وانقل كتل الفك العلوي والفك السفلي إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر يحتوي على 5 ملليلتر من الكولاجيناز و DNase على الجليد.
هضم الأنسجة في حاضنة شاكر عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة ، مع إضافة 50 ميكرولتر من 0.5 مولار EDTA خلال الدقائق الخمس الأخيرة. ثم أضف 5 مل من وسط DNase البارد إلى الأنسجة ، واخلط محتويات الأنبوب برفق عن طريق الدوران. بعد ذلك ، انقل كتل الأنسجة الأربع إلى طبق بتري.
وتغطيتها ب 500 ميكرولتر من وسط DNase الطازج. استخدم مشرطا لإزالة اللثة من كل كتلة من الأنسجة. وانقل محتويات الطبق بالكامل إلى مصفاة خلية 70 ميكرون فوق أنبوب سعة 50 مل.
اغسل طبق بتري والمصفاة ب 3 إلى 5 ملليلتر من وسط DNase الطازج. ثم استخدم مكبس حقنة معقمة سعة 3 ملليلتر لهرس أنسجة اللثة على شبكة المصفاة. اشطف المصفاة ب 30 إلى 35 ملم من وسط DNase البارد ، وقم بالطرد المركزي للمرشح.
ثم أعد تعليق الحنك في 1 مليلتر من الوسط الكامل ، وحدد عدد الخلايا القابلة للحياة. إن عزل الخلايا المناعية ومعالجتها كما هو موضح للتو ، ينتج عنه عدد كاف من الخلايا لتحفيز خارج الجسم الحي وتوصيف أنماط إفراز السيتوكين في خلايا اللثة من كل من النوع البري ، وكذلك المعرضة لالتهاب دواعم السن. في الواقع ، يمكن تحليل تكوين الخلايا المناعية اللثية في الفئران كما هو موضح في مخططات الكثافة هذه التي تقيم حجرات الخلايا القاتلة t والطبيعية في الفئران بالضربة القاضية LFA المعرضة لالتهاب دواعم السن.
باستخدام استراتيجيات البوابات المناسبة ، يمكن أيضا تحديد إنتاج السيتوكين داخل الخلايا للخلايا التائية TCR beta CD4 الإيجابية ، و TCR beta CD8 الإيجابية ، و TCR delta gamma T ، بالإضافة إلى الخلايا القاتلة الطبيعية والخلايا اللمفاوية الفطرية. بمجرد إتقانها ، يمكن عزل الخلايا في غضون ثلاث ساعات للتلوين المناعي إذا تم تنفيذ هذه التقنية بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إكمال جميع الخطوات بكفاءة وسرعة ، مع إبقاء الخلايا على الجليد كلما لم يتم التلاعب بها.
باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى ، مثل فرز الخلايا ، للإجابة على أسئلة إضافية تتعلق بوظيفة المجموعات الفرعية المحددة للخلية.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
تقدم هذه المقالة تقنية لعزل وتوصيف الخلايا المناعية من اللثة الفأرية. تهدف الطريقة إلى تعزيز فهم المناعة الفموية والتهاب اللثة.
Precise isolation and functional profiling of gingival immune cells enables mechanistic de-risking in oral immunology and supports target validation for inflammatory disease research. This workflow provides high-viability cell populations for quantitative phenotyping and ex vivo functional assays, strengthening predictive confidence in early discovery and translational studies. The approach is positioned to inform portfolio decisions in immunology and oral health R&D by enabling robust interrogation of tissue-resident immune networks.
This method integrates into the discovery-to-preclinical continuum by supplying high-quality immune cell preparations for both mechanistic studies and functional screening in oral disease models.