فيفو تصوير لايف الرئة ورم خبيث والمكروية بهم

الهدف العام من هذا الإجراء هو تصور تفاعلات سدى الخلايا السرطانية الديناميكية داخل نقائل الرئة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال ورم خبيث للسرطان ، مثل كيفية إنشاء ورم خبيث ، وما هي أنواع الخلايا داخل البيئة الدقيقة التي تشارك في هذه العملية؟ الميزة الرئيسية التي تقدمها هذه التقنية هي أن هذه طريقة سريعة وسهلة لتصوير الرئة خارج الجسم الحي والتي تتيح تصور الخلايا الحية لمدة أربع ساعات على الأقل. قد تكون هذه التقنية قد عززت فهمنا لآليات عمل العلاجات المستهدفة المختلفة لعلاج ورم خبيث في الرئة. كانت لدينا فكرة عن هذه الطريقة لأول مرة عندما كنا نفحص ورم خبيث عن طريق تصوير قسم الرئة وكنا نكافح مع موت الخلايا على نطاق واسع نتيجة لهذا الإجراء. لتحضير الرئتين للتصوير الحي خارج الجسم الحي ، ابدأ بتثبيت الفأر على غطاء رغوة البوليسترين مغطى بقطعة من معتاد على الثمالة وتعقيم بنسبة 70٪ من الإيثانول. بعد ذلك ، باستخدام المقص الجراحي ، قم بعمل شق شرسوفي عرضي عبر الجلد ، متبوعا بشق مماثل عبر الصفاق. بعد ذلك ، قم بتحريك لوحة التشريح إلى وضع رأسي ، وقم بقطع الشريان الأورطي الهابط ، بحيث يتجمع الدم في البطن وليس في تجويف الصدر. قص الفتحة الصغيرة في الحجاب الحاجز لتحرير الفراغ. ثم قم بقص القفص الصدري لاستئصال الحجاب الحاجز وتصور الرئتين. باستخدام المقص الجراحي ، قم بقص الجلد حتى القصبة الهوائية فوق القفص الصدري مع ترك الضلوع سليمة. بعد ذلك ، افصل الجلد عن القفص الصدري ، وقم بإزالة النسيج الضام المحيط لفضح القصبة الهوائية ، مع الحرص على عدم إتلاف القصبة الهوائية نفسها. قص فتحة صغيرة قطرها حوالي ملليمتر واحد في القصبة الهوائية المكشوفة ، بالتوازي مع الحلقات الغضروفية بالقرب من الحنجرة قدر الإمكان دون قطع القصبة الهوائية بالكامل. بعد ذلك ، أدخل برفق إبرة قياس 20 من أربعة إلى خمسة ملليمترات في القصبة الهوائية دون أي قوة مضادة. يجب أن تكون نهاية الإبرة مرئية من خلال القصبة الهوائية. املأ حقنة ب 400 ميكرولتر من 37 درجة مئوية 2٪ درجة انصهار منخفضة ، ثم قم بتثبيت الإبرة بالملقط. الحفاظ على لوحة التشريح عمودية ، قم بغرس الكمية الكاملة من الاغاروز الدافئ ببطء من خلال الإبرة في الرئتين. بمجرد نفخ الرئتين ، افصل المحقنة مع الاحتفاظ بالإبرة داخل القصبة الهوائية واسكب ما يقرب من 50 مل من 20 درجة مئوية PBS على الرئتين للمساعدة في ضبط الاغاروز. عندما يتجمد الاغاروز ، قم بإزالة الإبرة واستخدم الملقط لإغلاق القصبة الهوائية لمنع تسرب أي أغروز غير صلب. الآن ، افتح الصدر عن طريق بضع القص وأمسك القصبة الهوائية بالملقط. ثم ، باستخدام زوج من المقصات الجراحية ، قم بقطع القصبة الهوائية تماما. لإزالة الرئتين ، اسحب القصبة الهوائية برفق لأعلى ، وقطع النسيج الضام والمريء ، واسحب الرئتين تماما من تجويف الصدر. اغمر الأنسجة في 37 درجة مئوية RPMI 1640 لغسل الدم الزائد. باستخدام المقص والملقط ، اقطع الفصوص