افضل طريقة لرابيد تنبيب القصبة الهوائية في الفئران
فبراير 22, 2016
تقدم هذه المقالة طريقة سريعة وبسيطة لإدارة بليوميسين مباشرة إلى القصبة الهوائية الماوس عبر التنبيب. المزايا الرئيسية لهذه الطريقة هي أنها تكرار للغاية، وسهلة لسيده، ولا يتطلب معدات متخصصة أو أوقات الانتعاش طويلة.
الهدف العام من هذا الإجراء هو توفير إدارة سريعة وسهلة وموثوقة للكواشف في رئتي الفئران عن طريق التنبيب. تحد هذه الطريقة أيضا من خطر التلف المتبقي للأنسجة المحيطة وهي غير مكلفة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في بيولوجيا الرئة الأساسية وآليات مجالات المرض.
مثل إصابة الرئة الحادة وتكوين الليف. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها قابلة لإعادة الإنتاج بدرجة كبيرة ، وسهلة الإتقان ، ولا تتطلب معدات متخصصة أو أوقات استرداد طويلة. يجب تنفيذ الإجراء باستخدام أدوات معقمة.
لذا قم بالأوتوكلاف كل من الملقط النهائي الحاد والخافض. في غطاء معقم ، قم بإعداد مخزون عامل من إعادة الوكيل لإدارته عن طريق التنبيب. يوصى بحجم البلعة بين 30 و 45 ميكرولتر.
قم بتوصيل المحلول لمدة 10 دقائق عند 35 كيلو هرتز لضمان الخلط المتساوي. الآن ، قم بإعداد مساحة العمل. قم بتعيين مساحة مترا مربعا على الأقل لمساحة العمل نفسها.
بالإضافة إلى مواقع مميزة للحيوانات قبل وبعد العملية. الآن ، قم بإعداد لوحة الإجراءات. يتم قطع هذا النموذج المخصص من صفائح الألمنيوم وتقويته بواسطة قوس T.
تتوفرأيضا لوحات تجارية مماثلة. باستخدام بضع شرائط من الشريط ، قم بتثبيت قاعدة لوحة الإجراءات على المقعد ، بحيث تكون أمام المجرب مباشرة. ثم اربط خياطة بطول 4.0 بين مسامير تحديد المواقع في لوحة الإجراءات.
بعد ذلك ، قم ببناء مقياس التنفس. قم بإزالة الغطاسات من ثلاث محاقن سعة مليلتر واحد. ثم قم بتحميل ما يصل إلى 60 ميكرولترا من PBS في الجزء العلوي من كل برميل حقنة.
قم بتثبيت إحدى هذه المحاقن الثلاث بشكل فضفاض في محور القسطرة. عند الاستخدام ، سيؤدي الهواء المنبعث من القصبة الهوائية إلى ارتفاع وانخفاض PBS في البرميل. ضع هذا بجوار لوحة الإجراءات.
ضع المحقنتين الأخريين في متناول اليد لتكون بمثابة نسخ احتياطية. بعد ذلك ، في حقنة رابعة ، استنشق 300 ميكرولتر من الهواء ، وضعها على جانب واحد من اللوحة. قم أيضا بإعداد بضعة أطوال من الشريط اللاصق بحجم ستة بوصات لتأمين على السبورة.
ثم قم بإعداد غرفة الأيزوفلوران إذا لزم الأمر. قم بتوصيل خطوط الأكسجين والأيزوفلوران والتفريغ بالمنافذ المناسبة في الغرفة وفراغ الخلوص. ابدأ بتخدير الفأر.
الأهم من ذلك ، نظرا لأن عوامل مثل عمر ووزنه وصحته يمكن أن تعدل استجابة التخدير ، يجب على كل مختبر تحسين التعرض للأيزوفلوران لتلبية احتياجاته الخاصة. أثناء الانتظار ، قم بتحميل بلعة الكاشف في طرف الماصة ، واتركها جانبا. عندما يتم تخدير الماوس ، قم بتعليقه بواسطة القواطع العلوية من الخيط الموجود على منصة الإجراء ، مع وضع ظهر بشكل مسطح على سطح المنصة.
الآن ، مع الحرص على عدم تقييد التهوية ، قم بلصق الجزء السفلي من التجويف الصدري ، فوق الحجاب الحاجز مباشرة ، على المنصة ، للحفاظ على محاذاة أثناء العملية. بعد ذلك ، اضبط مصباح الرأس المنحنية على 80 إلى 100٪ ضع الضوء على بعد سنتيمتر إلى سنتيمترين من سطح الجلد بالقرب من الضفيرة الشمسية وتأكد بانتظام من أنه لا يفرط في تسخين الجلد. من خلف المنصة ، استخدم ملقط الطرف الحاد لتحديد موقع اللسان.
ثم توخي الحذر لتجنب القواطع السفلية ، وامسك اللسان برفق وأخرجه من تجويف الفم. أثناء تثبيت اللسان ، قم بتسطيحه باستخدام الخافض في اليد غير المهيمنة ، مما يسمح للملقط بالتحرير. الآن ، قم بتوجيه الرأس المنحنية تقريبا من الضفيرة الشمسية إلى القصبات الهوائية الجذعية الرئيسية لإضاءة القصبة الهوائية.
يمكن أيضا تمييز القصبة الهوائية بسهولة من خلال عمل التنفس ، مما يؤدي إلى تذبذب الضوء في شدته أثناء مغادرته للقصبة الهوائية. عند وضعها بشكل صحيح ، يمكن رؤية القصبة الهوائية على أنها دبوس مركزي للضوء ، مع الحد الأدنى من الضوء المحيط في تجويف الفم نفسه. يجب ألا تدخل القسطرة إلى تجويف الفم حتى يكون منظر القصبة الهوائية مثاليا.
لا يمكن إبراز القصبة الهوائية من خلال التلاعب بمصدر الضوء أو الخافض. يجب على الباحثين تحرير اللسان وإعادة محاولة الإجراء. بعد ذلك ، زاوية المحقنة لتتبع المسار الطبيعي للقصبة الهوائية.
وقم بخفض طرف القسطرة قياس 22 ، مع المحقنة المرفقة التي تحتوي على PBS ، مباشرة في التجويف. الآن ، قم بتغذية القسطرة بخمسة ملليمترات إضافية وقم بإزالة خافض اللسان. إذا تم وضعها بشكل صحيح ، فستبدأ فقاعة PBS في البرميل في الارتفاع والانخفاض مع كل نفس.
كن صبورا عند البحث عن هذا المؤشر لأن التخدير الثقيل والخفيف يمكن أن يعدل وتيرة التنفس. ثم قم بتحويل المحقنة إلى اليد غير المهيمنة. أثناء الإمساك بالمحور ، قم بإزالة المحقنة برفق مع ترك القسطرة في مكانها.
من اليد المهيمنة ، قم بإيداع بلعة الكاشف المحضرة مباشرة في وسط محور القسطرة. ثم قم بتوصيل المحقنة الثانية ب 300 ميكرولتر من الهواء وإخراج الهواء في المحور. سيساعد ذلك في ضمان توزيع البلعة بشكل جيد في الرئتين.
الآن ، قم بإزالة المحقنة واستبدلها بحقنة تحتوي على فقاعة PBS. ستستمر الفقاعة في الارتفاع والانخفاض إذا تم تنفيذ الإجراء بنجاح. الآن ، قم بإزالة القسطرة والشريط.
وضع في مكان دافئ وجاف حتى يستعيد وعيه. عادة في غضون دقيقتين. تمت مراقبة الفئران المنبوبة يوميا لفقدان الوزن.
تم جمع الفئران في أربعة و 10 و 17 يوما بعد التنبيب داخل القصبة الهوائية باستخدام البليومايسين. تم جمع غسل القصبات الهوائية من هذه الرئتين وتحليلها. أظهرت المستويات المرتفعة من IgM زيادة كبيرة تعتمد على الوقت في نفاذية الرئة مما يدل على خلل الحاجز الظهاري و / أو الحاجز البطاني.
تم تثبيت الرئتين اليمنيتين وملطختين بثلاثية الألوان لماسون. تم تحديد الاستجابة الليفية ، وهي علامة راسخة لمحتوى الكولاجين الكلي. أظهرت أقسام الأنسجة سماكة تعتمد على العلاج في الخلال الرئوي ، وزيادة في الآفات الليفية.
بمجرد إتقان هذه التقنية ، يمكن القيام بها في أقل من دقيقة إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن التلاعب بالأنسجة الرخوة المحيطة بالقصبة الهوائية ليس ضروريا أو موصى به. ويمكن أن يضر بصحة وسلامة التجربة.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
النظرة العامة
تقدم هذه المقالة طريقة سريعة وبسيطة لإدارة النيوميسين مباشرة في القصبة الهوائية للفأر عن طريق التنبيب. تعد هذه الطريقة قابلة للتكرار بشكل كبير، وسهلة الإتقان، ولا تتطلب معدات متخصصة أو فترات نقاهة طويلة.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلم
- بيولوجيا الرئة
- آليات المرض
- الإصابة الحادة في الرئة
الخلفية
- إدارة المواد الكيميائية في رئتي الفئران أمر حاسم للبحث.
- قد تسبب الطرق الحالية تلفًا مستمرًا للأنسجة المحيطة.
- هناك حاجة لتقنيات فعالة من حيث التكلفة في أبحاث الرئة.
- يمكن أن يكون التنبيب طريقة موثوقة لتوصيل المواد الكيميائية.
غرض الدراسة
- توفير طريقة سريعة وموثوقة لإدارة المواد الكيميائية.
- للحد من تلف الأنسجة أثناء الإجراء.
- لتسهيل البحث في إصابة الرئة والتليف.
الطرق المستخدمة
- التنبيب المباشر للنيوميسين في القصبة الهوائية للفأر.
- استخدام أدوات معقمة أثناء الإجراء.
- تقييم قابلية التكرار وسهولة التقنية.
- تقييم فترات النقاهة بعد الإدارة.
النتائج الرئيسية
- أظهرت الطريقة قابلية عالية للتكرار.
- تم تأكيد سهولة إتقان التقنية.
- لم تكن هناك حاجة لمعدات متخصصة.
- تمت ملاحظة فترات نقاهة قصيرة.
الاستنتاجات
- هذه الطريقة فعالة لتطبيقات أبحاث الرئة.
- تحدي من تلف الأنسجة المحيطة.
- تكون التقنية في متناول الباحثين الذين ليس لديهم أدوات متخصصة.
الأسئلة المتداولة
Executive Industry Relevance
This method enables rapid, reproducible intratracheal delivery of compounds in murine models, supporting preclinical evaluation of pulmonary therapeutics. By minimizing tissue damage and procedural complexity, it enhances throughput and data reliability in early-stage lung disease research. The approach aligns with target validation and assay development needs in biopharma discovery pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables precise delivery of toxicants like bleomycin to interrogate mechanisms of lung injury and fibrosis.
- Operational Value: Reduces variability in lung exposure, improving consistency of phenotypic readouts across cohorts.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Provides a standardized route for compound administration, enabling reliable dose-response assessment in pulmonary assays.
- Operational Value: Eliminates need for invasive surgery or high-dose anesthesia, streamlining workflow for high-throughput screening preparation.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports longitudinal monitoring of lung permeability and fibrotic endpoints, facilitating mechanistic de-risking of pulmonary candidates.
- Operational Value: Allows rapid treatment of large animal cohorts with minimal post-procedure care, accelerating preclinical study timelines.
Pipeline & Workflow Integration
The method fits within the discovery continuum from target validation through preclinical efficacy testing, particularly for lung-targeted modalities where direct pulmonary delivery is critical.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing via controlled delivery of fibrogenic or injurious agents to validate disease-relevant targets.
- Screening: Delivers standardized lung exposure, supporting reproducible compound screening in pulmonary disease models.
- Analytics: Facilitates quantitative readouts such as bronchoalveolar lavage analysis and collagen quantification for objective comparison.
- Translational Research: Connects acute injury and fibrosis endpoints to preclinical continuity, supporting biomarker-aligned advancement decisions.
- Enterprise Reuse: Represents a scalable, low-cost capability for repeated use across multiple pulmonary research programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Improves predictive confidence in lung disease models by reducing procedural artifacts and enhancing biological relevance.
- Operational Value: Increases lab efficiency through short procedure times (<1 minute) and minimal training requirements.
- Strategic Value: Reduces attrition risk by enabling more reliable mechanistic studies in pulmonary pathways.
- Portfolio Impact: Supports data-driven go/no-go decisions through consistent, quantifiable pulmonary endpoints.
Implementation Considerations
- Requires training in murine handling and intubation technique to ensure consistent tracheal visualization.
- Depends on access to basic surgical tools (forceps, depressor, sutures) and sterilization capacity (autoclave).
- Necessitates standardization of anesthesia protocols (e.g., isoflurane) across users to minimize respiratory variability.
- Requires adaptation of bolus volume (30–45 μL) based on reagent properties and mouse strain.
- Limited to non-survival studies; survival beyond observation period requires additional monitoring and humane endpoints.
